双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)说明书竞争法

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双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)酶联免疫分析(ELISA

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。 

使用目的:

本试剂盒用于测定样本中双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)的含量。

实验原理

本试剂盒应用酶联免疫竞争法测定标本中双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)水平。用纯化的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中加入双脱氧核苷三磷酸(ddNTP),和HRP标记的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)抗原,使它们竞争结合,,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。样本颜色的深浅和样品中的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)的含量呈负相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)的含量。 

试剂盒组成

1

30倍浓缩洗涤液

20ml×1

 

 

8

标准品S1800 ng/L

0.5ml×1

2

酶标试剂

6ml×1

标准品S2400 ng/L

0.5ml×1

3

酶标包被板

12孔×8

标准品S3200 ng/L

0.5ml×1

4

显色剂A

6ml×1

标准品S4100 ng/L

0.5ml×1

5

显色剂B

6ml×1

标准品S550 ng/L

0.5ml×1 

6

终止液

6ml×1/

9

说明书

1

7

样品稀释液

6ml×1/

10

封板膜

2

 

标本要求

1.标本处理:(1)水样   采集后经 -20℃反复冻融三次,再经玻璃纤维过滤后,备查

2)组织   样品用丁醇:甲醇:水(52570 VVV)抽提,或按相关文献提取进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,备查

2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤

 

1.         加样:分别设标准孔、空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上标准孔中加50微升,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

2.         加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

3.         温育:用封板膜封板后置37℃温育60分钟。  

4.         配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.         洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30后弃去,如此重复5次,拍干。

6.         显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

7.         终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

8.         测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

 

计算

  以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4.  请每次测定的同时做标准曲线,好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

检测范围:

20ng/L-900ng/L

规格:

96/

保存条件及有效期

1.试剂盒保存:2-8

2.有效期:6个月

原创作者:上海生物科技有限公司

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