双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)酶联免疫分析（ELISA）
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
使用目的：
本试剂盒用于测定样本中双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)的含量。
实验原理
本试剂盒应用酶联免疫竞争法测定标本中双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)水平。用纯化的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)，和HRP标记的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)抗原，使它们竞争结合，，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。样本颜色的深浅和样品中的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)的含量呈负相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)的含量。
试剂盒组成
|
1 |
30倍浓缩洗涤液 |
20ml×1瓶 |
8 |
标准品S1（800 ng/L） |
0.5ml×1瓶 |
|
2 |
酶标试剂 |
6ml×1瓶 |
标准品S2（400 ng/L） |
0.5ml×1瓶 |
|
|
3 |
酶标包被板 |
12孔×8条 |
标准品S3（200 ng/L） |
0.5ml×1瓶 |
|
|
4 |
显色剂A液 |
6ml×1瓶 |
标准品S4（100 ng/L） |
0.5ml×1瓶 |
|
|
5 |
显色剂B液 |
6ml×1瓶 |
标准品S5（50 ng/L） |
0.5ml×1瓶 |
|
|
6 |
终止液 |
6ml×1/瓶 |
9 |
说明书 |
1份 |
|
7 |
样品稀释液 |
6ml×1/瓶 |
10 |
封板膜 |
2张 |
标本要求
1．标本处理：（1）水样 采集后经 -20℃反复冻融三次，再经玻璃纤维过滤后，备查
（2）组织 样品用丁醇：甲醇：水(5：25：70 V：V：V)抽提，或按相关文献提取进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，备查
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 加样：分别设标准孔、空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上标准孔中加50微升，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
2. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。
4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
7. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
8. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
检测范围：
20ng/L-900ng/L
规格：
96份/盒
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月
原创作者：上海生物科技有限公司