犬泛素(Ub)ELISA检测试剂盒

犬泛素(Ub)ELISA检测试剂盒 应用定性夹心免疫检测技术,用合成的 HEV 多肽抗原包被微孔板板条,这些多肽是中国型 HEV 毒株核心氨基酸序列中抗原性很强的肽段,分别来自于该毒株的开放阅读框 2 和开放阅读框 3 。将样品或标准品加入孔中并孵育,如果其中存在 HEV IgM 抗体,这些抗体就会与 HEV 的多肽抗原结合,并固定在上面,洗板除去其它非特异性抗体和样品中的其它成份。然后加入羊抗人 IgM-HRP (辣根过氧化物酶)酶结合物,经第二次孵育后,酶结合物就会与次孵育结合上的 HEV IgM 抗体相结合,洗板除去未结合的酶结合物,加入 TMB 底物溶液,在第三次孵育时会发生酶 底物反应,只有那些含有 HEV IgM 抗体和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化,加入硫酸溶液终止酶和底物间的反应,并在波长 : 450nm 处测量 O.D. , 按照本 HEV IgM 抗体 elisa 试剂盒的测试标准 , O.D. 值大于或等于 Cut-Off 值的样品被认为是初试阳性。  

试剂盒组成:

试剂盒组成

48 孔配置

96 孔配置

保存

说明书

1

1

 

封板膜

2 片( 48 )

2 片( 96 )

 

密封袋

1  

1  

 

酶标包被板

1 × 48

1 × 96

2-8 ℃保存

标准品: 18 n g/L

0.5ml × 1

0.5ml × 1

2-8 ℃保存

标准品稀释液

1.5ml × 1

1.5ml × 1

2-8 ℃保存

酶标试剂

3 ml × 1

6 ml × 1

2-8 ℃保存

样品稀释液

3 ml × 1

6 ml × 1

2-8 ℃保存

显色剂 A

3 ml × 1

6 ml × 1

2-8 ℃保存

显色剂 B

3 ml × 1

6 ml × 1

2-8 ℃保存

终止液

3ml × 1

6ml × 1

2-8 ℃保存

浓缩洗涤液

( 20ml × 20 倍)× 1  

( 20ml × 30 倍)× 1  

2-8 ℃保存

犬泛素(Ub)ELISA检测试剂盒 试剂盒成分:  

1 预包被板 : 抗小鼠白介素 -6 兔子 IgG, 亲合纯化 96T  

2 酶标记抗体 : (30 倍浓缩 )HRP 标记抗小鼠白介素 -6 兔子 IgG, 亲合纯化 0.4mL x 1  

3 标准品 : 重组小鼠白介素 -6 0.5mL x 2  

4 EIA 缓冲液 : 1% BSA, 0.05% 吐温 20 BPS 30mL x 1  

5 标记抗体稀释液 : 1% BSA, 0.05% 吐温 20 BPS 12mL x 1  

6 显色剂 : TMB 底物液 15mL x 1  

7 终止液 : 1N 硫酸 12mL x 1


犬泛素(Ub)ELISA检测试剂盒 样本处理及要求

1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.

7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。


操作步骤

标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在、第二孔中分别加标准品100μl,然后在、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为18 ng/L,12 ng/L ,6 ng/L,3 ng/L,1.5 ng/L)。

加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。

洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30后弃去,如此重复5次,拍干。

加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

温育:操作同3。

洗涤:操作同5。

显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。


注意事项:

试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

请每次测定的同时做标准曲线,好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请后乘以总稀释倍数(×n×5)。

封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

底物请避光保存。

严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。


计算:

以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,    

在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD      

值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释      

倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标      

准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值      

代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释      

倍数,即为样品的实际浓度。                 

 

 

 

试剂盒性能:

1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990以上。

2.批内与批间应分别小于9%和11%

 

检测范围:                                              

1ng/L -25 ng/L                                      

                           

保存条件及有效期:

1.试剂盒保存:;2-8

2.有效期:6个月

 

原创作者:上海生物科技有限公司

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