犬泛素(Ub)ELISA检测试剂盒 应用定性夹心免疫检测技术,用合成的 HEV 多肽抗原包被微孔板板条,这些多肽是中国型 HEV 毒株核心氨基酸序列中抗原性很强的肽段,分别来自于该毒株的开放阅读框 2 和开放阅读框 3 。将样品或标准品加入孔中并孵育,如果其中存在 HEV IgM 抗体,这些抗体就会与 HEV 的多肽抗原结合,并固定在上面,洗板除去其它非特异性抗体和样品中的其它成份。然后加入羊抗人 IgM-HRP (辣根过氧化物酶)酶结合物,经第二次孵育后,酶结合物就会与次孵育结合上的 HEV IgM 抗体相结合,洗板除去未结合的酶结合物,加入 TMB 底物溶液,在第三次孵育时会发生酶 – 底物反应,只有那些含有 HEV IgM 抗体和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化,加入硫酸溶液终止酶和底物间的反应,并在波长 : 450nm 处测量 O.D. 值 , 按照本 HEV IgM 抗体 elisa 试剂盒的测试标准 , O.D. 值大于或等于 Cut-Off 值的样品被认为是初试阳性。
试剂盒组成:
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试剂盒组成 |
48 孔配置 |
96 孔配置 |
保存 |
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说明书 |
1 份 |
1 份 |
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封板膜 |
2 片( 48 ) |
2 片( 96 ) |
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密封袋 |
1 个 |
1 个 |
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酶标包被板 |
1 × 48 |
1 × 96 |
2-8 ℃保存 |
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标准品: 18 n g/L |
0.5ml × 1 瓶 |
0.5ml × 1 瓶 |
2-8 ℃保存 |
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标准品稀释液 |
1.5ml × 1 瓶 |
1.5ml × 1 瓶 |
2-8 ℃保存 |
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酶标试剂 |
3 ml × 1 瓶 |
6 ml × 1 瓶 |
2-8 ℃保存 |
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样品稀释液 |
3 ml × 1 瓶 |
6 ml × 1 瓶 |
2-8 ℃保存 |
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显色剂 A 液 |
3 ml × 1 瓶 |
6 ml × 1 瓶 |
2-8 ℃保存 |
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显色剂 B 液 |
3 ml × 1 瓶 |
6 ml × 1 瓶 |
2-8 ℃保存 |
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终止液 |
3ml × 1 瓶 |
6ml × 1 瓶 |
2-8 ℃保存 |
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浓缩洗涤液 |
( 20ml × 20 倍)× 1 瓶 |
( 20ml × 30 倍)× 1 瓶 |
2-8 ℃保存 |
犬泛素(Ub)ELISA检测试剂盒 试剂盒成分:
1 预包被板 : 抗小鼠白介素 -6 兔子 IgG, 亲合纯化 96T
2 酶标记抗体 : (30 倍浓缩 )HRP 标记抗小鼠白介素 -6 兔子 IgG, 亲合纯化 0.4mL x 1
3 标准品 : 重组小鼠白介素 -6 0.5mL x 2
4 EIA 缓冲液 : 含 1% BSA, 0.05% 吐温 20 BPS 30mL x 1
5 标记抗体稀释液 : 含 1% BSA, 0.05% 吐温 20 BPS 12mL x 1
6 显色剂 : TMB 底物液 15mL x 1
7 终止液 : 1N 硫酸 12mL x 1
犬泛素(Ub)ELISA检测试剂盒 样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在、第二孔中分别加标准品100μl，然后在、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为18 ng/L，12 ng/L ，6 ng/L，3 ng/L，1.5 ng/L）。
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30后弃去，如此重复5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
注意事项：
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
请每次测定的同时做标准曲线，好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
底物请避光保存。
严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算：
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，
在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD
值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释
倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值
代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释
倍数，即为样品的实际浓度。
试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990以上。
2.批内与批间应分别小于9%和11%
检测范围：
1ng/L -25 ng/L
保存条件及有效期：
1.试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月
原创作者：上海生物科技有限公司