NANOLIGHT萤光素酶报告基因检测试剂盒

产品内容：

产品简介：
NANOLIGHT萤光素酶报告基因检测系统是一种辉光型定量检测试剂盒，具有高灵敏度和发光信号稳定的特点，符合高通量检测的需求。NANOLIGHT萤光素酶是一个经过基因工程改造的小分子酶(19.1kDa)，是性能卓越的生物发光报告基因。它使用一种新型底物Furimazine，可产生高强度、辉光型发光。信号强度是萤火虫以及海肾萤光素酶的150倍；超强信号稳定性，半衰期可达2小时。NANOLIGHT萤光素酶的生物发光反应不依赖ATP，自发光背景低，光信号更亮，同时抑制背景发光以获得最高检测灵敏度。
反应原理如下：

使用说明：

1.自备材料
PBS；多道排枪；白色不透光细胞培养板；化学发光仪或酶标仪。
2.检测前准备
1）预先将NANOLIGHT Luciferase Reaction Buffer放置于室温融化。
2）取出NANOLIGHT Luciferase Substrate (50x)，每次开盖前需进行短暂低速离心。
3）根据实际使用量，以50:1的比例将适量的NANOLIGHT Luciferase Reaction Buffer与NANOLIGHT Luciferase Substrate (50x)混匀，室温避光备用。例如：如果需要100ml反应液，则需要加入2ml的检测底物。
注：建议现配现用，剩余的含有Furimazine底物的反应液在当次实验结束后，直接舍弃，不要留存。
3.操作方法
1）从细胞培养箱中取出细胞培养板，放置5-15min，恢复至室温。
注：使用白色不透光的细胞培养板，减少孔间的信号干扰。
2）加入检测溶液
使用多道排枪向每个细胞孔中加入平衡至室温的含有底物的NANOLIGHT Luciferase Reaction Buffer，加样体积与细胞培养液体积相同并混匀。例如，96孔板通常加入80-100ul培养液，相应加入80ul-100ul检测溶液；384孔板通常加入20-30ul培养液，相应加入20-30ul检测溶液。
3）孵育
室温下孵育5-10min。为了使得细胞裂解充分，也可将细胞培养板放在振荡混匀仪或附带振板功能的仪器上，室温条件下，采用中高速振板5-10min。
注：孵育时间，可根据细胞量进行适当调整，确保细胞充分裂解，得到稳定的发光检测结果。
4）检测
混匀后于化学发光仪或酶标仪中检测NANOLIGHT Luciferase报告基因活性。
注：为得到最佳检测结果，请在加入检测试剂后2小时内完成检测。

注意事项：
1．检测仪器选择：能够检测化学发光的仪器都适用本试剂盒的检测，但是针对相同的样品，不同检测器本底信号值和测量值均可能不同；且对于同一样本检测，不同仪器的数值不可横向比较。为防止孔间干扰，推荐使用不透明白色细胞培养板。
2．由于发光信号会受到检测环境如培养基组分、温度等影响，所以应确保同组内不同样本检测条件一致。
3．酶促反应对温度较为敏感，加样检测前务必将检测试剂以及细胞培养板平衡至室温。
4．如需同时检测多个细胞培养板，请尽量确保每个细胞板加入检测溶液后孵育时间一致，再进行数据读取，以此获得最佳的检测结果。
5．NANOLIGHT萤光素酶具有超强信号稳定性，半衰期可达2小时。但是当酶表达量过高时，信号半衰期会缩短，建议优化实验设计方案（如减少质粒转染量），避免萤光素酶表达量过高。

保存条件：
全新试剂盒-20℃保存，一年有效。

短期运输条件：
避光冷藏

数据展示

图1. NANOLIGHT萤光素酶光强、稳定性及萤光线性对比P进口品牌。NANOLIGHT 单酶报告基因试剂盒体外NANOLIGHT酶活检测中，绝对光强和稳定性都已经十分接近对比P进口品牌，并且NANOLIGHT萤光线性良好（R²=0.999）。

图2. 细胞培养体系下验证光强稳定性及细胞密度-光强标曲。在细胞培养基环境中，原位检测发光状况，可以看出组的稳定性和绝对光强与P进口品牌差异不大，而且，细胞密度-光强标曲线性很好（R²=0.999）。

图3. TNFα梯度诱导293T细胞的NF-κB通路对比P进口品牌。NANOLIGHT萤光素酶报告基因检测试剂盒得到的结果与P进口品牌一致性保持良好。

图4. NANOLIGHT酚红耐受及不同培养基中发光验证。配制含有浓度梯度的酚红PBS溶液，每孔加入等量的NANOLIGHT萤光素酶和发光反应液，验证NANOLIGHT的发光稳定性。由图可知，NANOLIGHT对比P进口品牌具有更好的酚红耐受能力。此外，NANOLIGHT在常见培养基里发光水平波动不大（图中以RPMI-1640归一化处理）。

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