1. 样品处理
1) 动物组织样品:将组织剪切成长宽高均不大于0.5厘米的组织块,迅速加入5-10倍体积的RNAwait。注意如骨头等液体渗透性较弱的组织,不适合用本品进行RNA保护。
2) 细胞样品:收集细胞沉淀,用PBS洗涤后,5000g离心1-2分钟,吸除PBS后小心加入5-10倍体积的RNAwait,避免吹起细胞。
3) 细菌样品:12000g离心2min,弃上清加入5-10倍体积RNAwait试剂,对酵母和真菌样品进行保存时,请参考细菌处理方法。
2. 样品保存
1) 浸透于RNAwait试剂中的样品在37℃可保存一天,室温保存一周,4℃保存一个月。
2) -20℃保存方法:样本4℃浸透过夜,然后转移至-20℃长期保存,RNAwait试剂不会在-20℃冻结,但有可能出现结晶。可直接放在室温融化,不会影响RNA的提取量和完整性。
3) -80℃保存方法:样本4℃浸透过夜,然后转移至-80℃长期保存(建议样品在转移至-80℃前将其从RNAwait中取出,直接冻于-80℃保存)。样本可直接放在室温融化,再重新冻上,不会影响RNA的提取量和完整性。
3. RNA提取
4) 组织样品:用干净的镊子从RNAwait中取出组织块,吸水纸吸掉表面液体,之后立即置于裂解液中匀浆或液氮中研磨。
5) 细胞和细菌等样品:加入与RNAwait等体积的DEPC处理水,10000g离心1min收集样品,小心去除上清,后续即可用各种方法提取RNA。酵母和真菌参考本方法提取RNA。
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