本试剂盒适用于Tris-甘氨酸电泳体系,其中包括PAGE凝胶制备所需全套试剂,不需要压线封闭,不需要加入TEMED,即可制备PAGE凝胶。所配制的浓缩胶带有颜色,便于上样。本试剂盒中过硫酸铵以溶液形式提供,可保证过硫酸铵溶液在4℃稳定保存三个月。
本试剂盒分离胶和浓缩胶缓冲液均含有SDS,只适用于变性凝胶电泳,如需要分析非变性蛋白,建议选购我公司 Native-PAGE非变性凝胶快速制备试剂盒(货号:MA0172)。
产品优势:
方便!不需压线,一步灌胶,不需等待分离胶凝固
快速!最少2分钟可灌注多块凝胶,15min即可凝胶;
安全!彻底告别TEMED,避免接触过硫酸铵粉末,远离有毒试剂;
节约!一块制胶成本低于3元钱,极大程度节约经费;
可靠!省去繁琐计算稀释操作,方法更可靠,电泳效果好,条带更清晰;
数据展示:
图1.使用我公司PAGE凝胶超快速配制试剂盒10%配制丙烯酰胺凝胶后蛋白电泳考马斯亮蓝染色图片。图中左侧第一泳道为我公司预染彩虹蛋白marker (10-190KD)(货号MA0342),其余泳道是RIPA强裂解液提取的小鼠肝脏组织和A549细胞蛋白质。
图2. 使用我公司免封闭PAGE凝胶超快速配制试剂盒10%浓度配制丙烯酰胺凝胶后蛋白免疫印记结果,实验使用使用小鼠肝脏组织提取的蛋白,一抗是GAPDH单克隆抗体。
保存方法
本试剂盒保存于4℃,其中改良型过硫酸铵溶液长期储存置于-20℃,1年有效。
操作步骤:
以一块0.75/1.00/1.50mm厚的mini胶为例。
1. 参照凝胶模具说明书,装配好凝胶模具。
2. 取等体积的分离胶溶液(2×)和分离胶缓冲液(2×),各2 / 2.7 / 4mL,混匀。
3. 取等体积的浓缩胶溶液(2×)和浓缩胶缓冲液(2×),各0.5 / 0.75 / 1mL,混匀。
4. 向步骤2已混合溶液中加入40 / 55 / 80ul的改良型过硫酸铵溶液,轻轻搅拌混匀,避免产生气泡。将混匀后的溶液注入凝胶模具中,使液面距离短玻璃板上沿约1.5cm即可。
5. 向步骤3已混合溶液中加入10 / 15 / 20ul的改良型过硫酸铵溶液,轻轻搅拌使其混匀,不需要等待下层胶凝固,可直接将混匀后的溶液缓慢注入分离胶溶液上面,插入梳子。注意加入分离胶后要在2分钟内将浓缩胶注入凝胶模具内,且在灌注浓缩胶时要缓慢,防止浓缩胶与分离胶混合在一起。
6. 静置约15分钟,等待浓缩胶凝固,小心地拔出梳子,用注射器或枪头,吸取电泳缓冲液将加样孔冲洗干净,即可进行常规电泳操作。
注意事项
7. 蛋白条带的清晰和平直与电泳条件相关,如果需要蛋白条带更加清晰、平直,建议电泳时电压在100-120V之间,如需要加快电泳速度,可增加至150V。
8. PAGE凝胶的凝聚速度与温度和过硫酸铵的用量密切相关,可通过改变过硫酸铵的用量,控制PAGE凝胶的聚合速度,凝胶聚合过快不利于操作,应根据实际操作情况做适当的调整。
9. 本产品已加入TEMED替代品,如需进一步加速凝胶,可在配制时加入TEMED。
10. 本产品凝胶速度较快,不需将凝胶模具放置在37℃温箱或者空调口下,正常室温条件下配制即可。
11. 为了您的安全和健康,操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。
附表1. SDS-PAGE分离胶的浓度与最佳分离范围
SDS-PAGE分离胶浓度 |
最佳分离范围 |
6% PAGE 凝胶 |
70-300kD |
8% PAGE 凝胶 |
30-200kD |
10% PAGE 凝胶 |
20-80kD |
12.5% PAGE 凝胶 |
15-60kD |
15% PAGE 凝胶 |
10-45kD |
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