DiI细胞膜荧光探针橙红色

产品简介：DiI 即 DiIC18(3)，全称为 1,1′-dioctadecyl-3,3,3′,3’tetramethylindocarbocyanine perchlorate，是最常用的细胞膜荧光探针之一，呈现橙红色荧光。染料 DiI, DiD, DiO 和 DiR 是一类亲脂性荧光染料家族，用于标记细胞膜和疏水性组织。这是一类环境敏感型荧光染料，当它们与膜结合或者与亲脂性生物分子（例如蛋白质，虽然在水中其荧光强度很弱）结合时，其荧光强度显著增强。它们具有很高的淬灭系数，偏光依赖性和很短的激发寿命。一旦应用于细胞中，这种染料会在细胞内质膜中逐步扩散，导致在其最佳浓度条件下，将整个细胞膜染色。它们不同的荧光颜色：DiI（橙红色荧光）、DiO（绿色荧光）、DiD（红色荧光）、DiR（深红色荧光），为活细胞多色彩荧光成像分析和流式细胞术提供了一种便捷的工具。DiI可以用标准的 TRITC 滤光片检测。
DiI 通常不会影响细胞的生存力因此被广泛用于正向或逆向，活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂 (long-term tracer)。被 DiI 标记的神经细胞在体外培养的条件下可以存活长达 4 周，在体内可以长达一年。DiI 在被固定的神经元细胞膜上的迁移速率为0.2-0.6 mm/day，在活的神经元细胞膜上的的迁移速率为 6mm/day。
DiI 除了用于细胞膜荧光标记外，还可用于检测细胞的融合和粘附，检测发育或移植过程中细胞的迁移，通过FRAP (Fluorescence Recovery After Photobleaching) 检测脂在细胞膜上的扩散，检测细胞毒性和标记脂蛋白等。
基本信息：

产品应用标准实测：（由细胞生物学项目组独立完成）
本品配成 5mM 溶液后为紫粉色液体，溶液澄清度且颜色检测无可见异物；然后进行荧光染色检测：工作条件：荧光显微镜，C6 细胞，400×，工作浓度 5μM。
结果：经细胞膜荧光染色，在40倍物镜下可看到清晰荧光。此浓度下在荧光显微镜下看到的荧光亮度亦足以用于共聚焦检测。

储存条件：-20℃，避光防潮密闭干燥

运输条件：2~8℃运输

操作说明（仅供参考）

1. 染色液制备

（1）配置DMSO或EtOH 储存液：储存液用 DMSO或EtOH配置浓度1～5 mM。
【注】未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融。
（2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，配制浓度为1～5 μM的工作液。
【注】工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度的10倍范围内开始最优浓度的摸索。

1. 悬浮细胞染色

（1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。
（2）37 ℃孵育细胞 2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
（3）孵育结束，按1000～1500 rpm离心5min。
（4）倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。
（5）重复（3），（4）步骤两次以上。
3. 贴壁细胞的染色
（1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
（2）从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。
（3）在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
（4）37 ℃孵育细胞 2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
（5）吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10min，然后吸干培养基。
4. 显微镜检测
DiI，DiD，DiO，DiR滤光器的选择参见表1。 DiD染色可见红色荧光。
5.流式细胞仪检测
经DiI，DiD，DiO，DiR染色的细胞可分别用流式细胞仪的FL1，FL2，FL3或FL4通道检测。

表1. 细胞膜荧光探针相关产品

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