FDA活细胞荧光示踪探针；荧光素二乙酸酯

FDA活细胞荧光示踪探针;二乙酸荧光素；荧光素二乙酸酯
分子式 ：C24H16O7     分子量：416.38

简介：Fluorescein diacetate 是一种细胞渗透性的酯酶底物。Fluorescein diacetate 可作为人谷胱甘肽硫转移酶 Pi (hGSTP1-1) 的荧光底物。

物理性状及指标：

外观：…………………白色至微黄色粉末

熔点：…………………200-203 °C(lit.)

溶解性：…………………DMSO: ≥ 48 mg/mL；丙酮：25 mg/mL

纯度：……………………>97%（HPLC）

吸光度：…………………Ex (nm)494；Em (nm)521

敏感性：…………………对空气敏感

生物活性

产品描述

荧光素二乙酸酯是一种可渗透的酯酶-基质。荧光素二乙酸酯可作为hGSTP1-1的荧光基质。

体外研究

荧光素(FDA)是绿色荧光染料荧光素的一种乙酰化衍生物。荧光素(FDA)是一种荧光探针，用于重要的染色，是一种荧光活性物质，在不同的细胞质GSTs中有选择性地激活了人类pi类谷胱甘肽S-transferase (hGSTP1)的酯酶活性。在MCF7细胞外源性过表达hGSTP1的MCF7细胞中，观察到荧光素对GST抑制剂的荧光激活，但在表达hGSTA1或hGSTM1的细胞中不存在。荧光素二乙酸酯可作为hGSTP1-1的荧光基质。为了研究荧光激活是由于hGSTP1活性，荧光素二乙酸在体外培养重组hGSTP1-1和GSH。在hGSTP1-1和GSH的存在中观察到显著的荧光激活，而在没有它们的情况下或当酶处于热失活状态时，只观察到轻微的激活。这说明荧光素二乙酸的荧光激活依赖于hGSTP1-1活性。从增长率之间的线性关系在荧光和hGSTP1-1浓度,酶的特定活动1μM荧光素二醋酸盐决心79 nmol / 15分钟/毫克的蛋白质。荧光素二乙酸盐可作为一种荧光基板，用于测定GSTP1-1的体外抑制剂。作为底物的荧光素二乙酸乙酯和NBDHEX都以浓度依赖性的方式抑制hgstp1 -1依赖的荧光增加，ic50分别为3.3 0.5 M和0.61 0.04 M。

用途及描述：科研试剂，广泛应用于分子生物学，药理学等科研方面，严禁用于人体。FDA是一种非荧光性疏水性荧光素衍生物，它可以穿透细胞膜进入细胞，通过细胞内酯酶催化水解二乙酸酯基团产生具有高强度的荧光产物荧光素。荧光分子在具有完整细胞膜的细胞内积累，因此这种绿色荧光可以作为一种细胞活力的标签。不具有完整细胞膜或者新陈代谢活性的细胞，不能在细胞内积累荧光产物，因此不能显现绿色荧光。FDA可以与染料PI联合使用，无活性的死细胞被PI着色，发出红色荧光；有活性的细胞PI无法着色，在FDA作用下，紧发出绿色荧光。这两种颜色可以很好的辨别死细胞与活细胞，与单一颜色检测相比，它提供了一种更为准确的活细胞定量检测方法

储液配置

浓度/体积/质量比	1 mg	5 mg	10 mg
1 mM	2.4017 mL	12.0083 mL	24.0165 mL
5 mM	0.4803 mL	2.4017 mL	4.8033 mL
10 mM	0.2402 mL	1.2008 mL	2.4017 mL

经典实验操作（仅供参考）

细胞实验	MCF7细胞(2 – 3×105)播种在35毫米玻璃底部盘前的实验。在成像之前，用1ml PBS冲洗细胞，然后用1ml的Hanks的平衡盐溶液孵育(HBSS(+)不含苯酚红)，其中含有1 M荧光素(0.1% DMSO as a co溶剂)，在37 C中5分钟。用1ml PBS洗两次细胞，在成像前加1ml HBSS。荧光素和DsRed- express2荧光图像在FITC通道(473 nm)和DsRed通道(激发559 nm)中获得。得到的16位图像进行了分析。

使用方法举例（仅供参考）
1. 准备2-10mM DMSO 储备液 
溶解 4.2 mg 于 1 ml DMSO制备成10 mM 储备液(1 mg/ml 等同于 ~ 2.4 mM);

注意: 储备液请及时使用，剩余的储液请置于< -20℃，避免反复冻融，避光防潮密闭保存。

2.准备染料工作液

在使用前准备一个1～20μm的染料工作液。用Hanks和20 mm Hepes buffer（HHBS）或pH值为7的缓冲液稀释步骤1的DMSO原液，用涡旋把它们混合好。
3、用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞：

3.1用待测化合物处理细胞达所需时间。

3.2离心使细胞每管获得2-10个X105细胞。

3.3在染料工作溶液的500升中重新沉淀细胞（从步骤2）。

3.4在室温或37℃下用15℃或30℃的染料溶液孵育细胞，不受光照的影响。

3.5从细胞中去除染料工作溶液，用HHBS或您选择的缓冲液清洗细胞。在预加热的HHBS或培养基中500℃重培养细胞，获得每管2-10×105个细胞。

3.6用流式细胞仪（FL1通道）或荧光显微镜监测EX/EM＝490/520 nm处的荧光变化。
备注：对于细菌细胞染色：当试验溶液在一夜之间生长时，在培养基中稀释1:800稀释液是最有效的，但也可以使用新鲜的培养基或PBS。细菌悬浮液应以PBS稀释至每毫升105～107个生物。细菌可通过涂抹一毫升溶液至45μm滤光器（25mm）和真空过滤除去溶液，然后加入1ml染料溶液，并在室温下孵育5至10分钟。

储存条件：2-8℃，避光防潮密闭干燥

运输条件：常温运输

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