琼脂糖凝胶,镍-琼脂糖凝胶H.P.

    公司介绍:上海生物科技公司是国内elisa试剂盒优质供应商,供应琼脂糖凝胶,镍-琼脂糖凝胶H.P.,代理销售不同elisa试剂盒品牌的进口/国产elisa试剂盒,专业供应科研实验所需的培养基,抗体,动物血清血浆,标准品对照品,化学试剂,酶联免疫试剂盒,白介素试剂盒,金标检测试剂盒,微生物,蛋白质,ELISA种属涵盖广,凭借多年行业经验,完善的售后服务,高质量的产品。欢迎来电咨询。

    产品名称:镍-琼脂糖凝胶H.P.

    英文名称:Ni Sepharose H.P.

    产品规格:BR

    包装:100mL/500mL等,其他包装电联我司销售

    单位:瓶

    Ni-琼脂糖凝胶H.P.是用于纯化6×His标签重组蛋白的一种纯化介质,它是由6%交联的Sepharose耦连了一种四齿螯合剂NTA而得。 它可用于在非变性或变性条件下纯化任何表达系统表达的6×His标签重组蛋白。NTA,含有四个螯合区,较一般的三齿螯合剂能更好的结合Ni2+。6×His可与Ni2+螯合,从而使His标签蛋白结合在Ni-NTA纯化介质上,未结合的蛋白被洗涤下去,结合在介质上的蛋白经过一定浓度的咪唑或低pH缓冲液的温和洗脱下来,从而得到高纯度的目的蛋白。该纯化介质与His标签蛋白具有极高的亲和力,可达5-20 mg/mL。可在非变性和变性条件下纯化任何表达系统所得的His标签蛋白。纯化程序简单,所得的蛋白纯度可高达95%。Ni-NTA可再生4-6次,重复使用。本产品悬浮液为20%乙醇,已螯合Ni2+。

    琼脂糖凝胶,镍-琼脂糖凝胶H.P.操作方法

    A. 非变性条件下抽提His标签蛋白

    1) 准备细胞,接种,诱导表达。收集细胞,置于-70°C或立即进行步骤2操作。

    2) 加入1/20细胞生长体积的NTA-0 Buffer和PMSF。PMSF使用的工作浓度为1 mM现用现加。

    3) 将细胞悬浮起来,加入溶菌酶,混匀,冰上放置30分钟,超声或匀浆破碎细胞。该步骤冰上操作。

    4) 加入10% Triton X-100, 使终浓度为0.05%,充分混匀,冰上放置15分钟。

    5) 12000 rpm/min(20,000×g以上),4°C离心15分钟以上。取上清,置于冰上备用或-20°C保存。

    6) 将NTA树脂装入合适的层析柱,层析用10倍NTA体积的NTA-0 Buffer洗。

    7) 将样品加至NTA层析柱中,流速在15 mL/h左右,收集穿透部分,用SDS/PAGE分析蛋白的结合情况。

    8) 层析用5倍NTA体积的NTA-0 Buffer洗,流速控制在30 mL/h左右。

    9) 分别用5倍NTA体积的NTA-20、NTA-40、NTA-60、NTA-80、NTA-100、NTA-200、NTA-1000 Buffer洗脱,流速控制在15 mL/h左右,收集洗脱液,每管收集一个NTA体积。

    10) 确定目标蛋白质在洗脱液中的分布情况。*为有效的方式是SDS-PAGE分析。也可以用Bradford 蛋白质测定试剂盒,快速确定蛋白质的含量,然后用SDS/PAGE分析蛋白质的分布。

    11)纯化的目标蛋白质的保存条件需要根据蛋白质的性质和用途确定。 NTA-0 、20、40、60、80、100、200、1000Buffer分别为浓度20 mM Tris-HCl pH7.9, 0.5 M NaCl, 10% Glycerol,添加0、20、40、60、80、100、200、1000 mM Imidazole。

    B.变性条件下从包涵体中纯化His标签蛋白

    1) 准备细胞,接种,诱导表达。收集细胞,置于-70°C或立即进行步骤2操作。

    2) 加入1/20细胞生长体积的GuNTA-0 Buffer和PMSF。PMSF使用的工作浓度为1 mM现用现加。

    3) 将细胞悬浮起来,冰上超声破碎细胞,降低粘稠度。

    4) 室温放置30分钟,间或混匀或用磁力搅拌。

    5) 12000转/分(20,000×g以上),4°C离心15分钟以上。取上清,置于冰上备用或-20°C保存。

    6) 将NTA树脂装入合适的层析柱,层析用10倍NTA体积的GuNTA-0 Buffer洗。

    7) 将样品加到NTA层析柱中,流速控制在15 mL/h左右,收集穿透部分,用于SDS/PAGE分析蛋白质的结合情况。

    8) 层析用5倍NTA体积的GuNTA-0 Buffer洗,流速控制在30 mL/h左右。

    9) 分别用5倍NTA体积GuNTA-20、GuNTA-40,GuNTA-60、GuNTA-100、GuNTA-500洗脱,流速在15 mL/ h左右,收集洗脱液,每管收集一个NTA体积。

    10) 确定目标蛋白质在洗脱液中的分布情况。*为有效的方式是SDS/PAGE分析。也可以用Bradford 蛋白质测定试剂盒,快速确定蛋白质的含量,然后用SDS/PAGE分析蛋白质的分布。

    11) 目标蛋白质需要进一步纯化需要根据蛋白质的用途确定。 12) 纯化的目标蛋白质需要复性,复性常用的手段可以参考有关手册确定的原则。

    GuNTA-0 、20、40、60、100、500Buffer分别为浓度20 mM Tris-HCl pH7.9, 0.5 M NaCl, 10% Glycerol,6 M Guanidium HCl添加0、20、40、60、100、500 mM Imidazole。

    C. NTA树脂的再生 NTA树脂在使用若干次数(3-5次)后,结合效率有所下降,可以用以下方法再生,提高树脂的使用寿命和蛋白质的结合效率。NTA树脂再生前需要从层析柱下端流干所有溶液,估计出NTA的树脂体积,按下列次序将再生试剂加到层析柱里,在等上一步再生溶液流干后,再加下一步再生溶解。用户需要自行准备25%、50%、75%、100%(v/v)乙醇和去离子水。 从层析柱下端流干所有溶液,用2倍NTA树脂体积的Stripping Solution I、2倍体积的去离子水、3倍体积的Stripping Solution II、1倍体积的25%乙醇、1倍体积的50%乙醇、1倍体积的75%乙醇、5倍体积的100%乙醇、1倍体积的75%乙醇、1倍体积的50%乙醇、1倍体积的25%乙醇、1倍体积的去离子水、5倍体积的Stripping Solution III、3倍体积的去离子水分别洗一遍。 如果立即使用,用5倍体积的Ni Charging Solution洗,再用10倍体积的平衡溶液(NTA-0Buffer或GuNTA-0 Buffer)洗;如果想长期储存,加入1倍体积的20%乙醇,4°C保存,使用前用5倍体积的Ni Charging Solution洗,再用10倍体积的平衡溶液(NTA-0Buffer或GuNTA-0 Buffer)洗

    再生溶液配方:Stripping Solution I:  6M GuHCl, 0.2M acetic acid。Stripping Solution II: 2% SDS。        Stripping Solution III: 100 mM EDTA, pH 8.0。Ni Charging Solution: 100 mM NiSO4

    琼脂糖凝胶,镍-琼脂糖凝胶H.P. 注意事项

    一般都用药匙取用。药匙的两端为大小两个匙,分别取用大量固体和少量固体。

    试剂一旦取出,就不能再倒回瓶内,镍NTA琼脂糖凝胶6FF可将多余的试剂放入指定容器。

    称量的天平应保持清洁、干燥,避免潮湿及腐蚀性气体的侵蚀。在进行称量操作时,被称取的试剂应置于称量纸上或其它器皿内,不可在盘中直接称量。

    琼脂糖凝胶,镍-琼脂糖凝胶H.P. 相关信息:

    CAS:121062-08-6,MelanotanIIacetatesalt

    CAS:51749-83-8,1,8-二蒽,90%

    CAS:541-16-2,丙二酸二叔丁酯

    CAS:280556-71-0,4-(4-吗啉基)苄醇

    CAS:22526-47-2,(S)-3,3-二甲基-2-丁胺,99+%

    CAS:603-83-8,2-甲基-3-硝基苯胺

    CAS:31677-93-7,安非他酮

    CAS:98-98-6,2-吡啶甲酸

    57-11-4,硬脂酸

    CAS:147-85-3,L-脯氨酸标准品|对照品

    CAS:9003-98-9,DNA酶

    CAS:5350-57-2,二苯甲酮腙

    CAS:13826-35-2,3-苯氧苄醇,98%

    CAS:1401-55-4,单宁酸

    CAS:36589-29-4,L-精氨酸乙酯二盐,98%

    CAS:719-80-2,二苯基乙氧基膦

    CAS:57-74-9,氯丹,分析标准品

    CAS:4187-56-8,(S)-(-)-1-(4-)乙胺

    CAS:327601-97-8,大果桉醛 L标准品|对照品

    CAS:870-24-6,2-氯乙胺盐,98%

    生物,专业供应科研实验所需的培养基,抗体,动物血清血浆,标准品对照品,化学试剂,酶联免疫试剂盒,白介素试剂盒,金标检测试剂盒,微生物,蛋白质,ELISA种属涵盖广,凭借多年行业经验,完善的售后服务,高质量的产品,赢得客户一致好评,欢迎来电咨询与订购!

原创作者:上海生物科技有限公司

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