测定意义:
辅酶ⅠNAD(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循环(TCA)的主要氢受体,生成的 NADH 经呼吸电子链(ETC)传递把电子交给氧,在合成 ATP 的同时,形成大量的 ROS,同时 NADH 再生为 NAD+。糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。NAD(H)含量和 NADH/NAD+比值的高低可用于评价糖酵解和 TCA 循环的强弱。较高的NAD(H)及 NADH/NAD+比值说明细胞呼吸耗氧量较高,处于过氧化状态。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和 TCA 循环。另外,NAD+降解产物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作用。
测定原理:
分别用酸性和碱性提取液提取样品中 NAD+和 NADH,NADH 通过 PMS 的递氢作用,还原氧化型噻唑蓝(MTT)为甲瓒,在 570nm 下检测吸光值;而 NAD+可被乙醇脱氢酶还原为 NADH,进一步采用 MTT 还原法检测。
需自备的仪器和用品:
酶标仪、台式离心机、移液器、96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
酸性提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;
碱性提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 10 mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存;
试剂三:粉剂×1 瓶,-20 ℃保存,用时加入 3mL 蒸馏水,混匀,用不完的试剂 4℃保存一周;
试剂四:粉剂×1 瓶,4 ℃保存,用时加入 3mL 蒸馏水,混匀,用不完的试剂 4℃保存一周;
试剂五:液体 3.6mL×1 瓶,4 ℃保存;
试剂六:液体 30mL×1 瓶,4 ℃保存;
试剂七:液体 50mL×1 瓶,4 ℃保存。
本产品仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。
原创作者：上海生物科技有限公司