鸡新城疫抗体检测试剂盒操作说明

鸡新城疫抗体检测试剂盒

名称：鸡新城疫病毒IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
英文名：Diagnostic Kit for chicken Antibodies to Newcastle Disease Virus (ELISA)
供应商：生物
产地：国产|进口
检测样本：血清
检测方法：酶联免疫法
产品规格：96T×1/盒、96T×2/盒、96T*5/盒
保质期：12个月
储藏：4～30℃密封干燥保存，忌冷冻，避免阳光直射。
预期用途：鸡新城疫是由新城疫病毒（Newcastle Disease Virus，NDV）引起的一种高度接触性传染病，又称亚洲鸡瘟或伪鸡瘟。主要特征是呼吸困难、便稀、神经紊乱、粘膜和浆膜出血。
鸡新城疫抗体检测试剂盒适用于鸡血清中新城疫病毒特异性抗体的检测，可用于鸡新城疫疫苗免疫效果评价。

鸡新城疫抗体检测试剂盒操作说明【试验原理】
鸡新城疫抗体检测试剂盒系由预包被新城疫病毒（NDV）抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测鸡血清或血浆中新城疫病毒特异性抗体。实验时，在酶标板中加入对照血清和稀释的待检血清，经温育后，若样品中含有新城疫病毒的特异性抗体，则将与酶标板上抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有特异性抗体。

【操作步骤】
1. 将试剂回温至室温，通过颠倒和涡旋将试剂混匀。
2. 将1份4×样品稀释液加入到含3份去离子水的容器中，充分混匀，例如，30ml 4×样品稀释液加入到90ml去离子水中。
3. 将1份20×洗涤液加入到含19份去离子水的容器中，充分混匀，例如，25ml 20×洗涤液加入到475ml去离子水中。
4. 稀释前将阳性对照、阴性对照和样品震荡均匀。
5. 阳性对照、阴性对照和样品均需要用样品稀释液稀释后使用。稀释比例为2μl ：800μl。将移液器调到100μl，反复吹打4次使之充分混匀。
6. 将稀释后的阴性对照、阳性对照分别加入微孔中，每种做两个平行，每孔100μl；将稀释后的样品100μl分别加入孔中，室温下静置30分钟。
7. 弃去微孔板中溶液，每孔加入300μl洗涤液洗涤，重复洗涤2次，在洗涤过程中防止酶标板变干。
8. 每孔立即加入100μl结合物，室温静置30分钟。
9. 重复步骤7进行洗板。
10. 每孔立即加入100μl底物，室温静置30分钟。
11. 不要倒掉板内液体，每孔立即加入100μl终止液。
12. 用酶标仪双波读数（405nm或410nm作为主要波长，630nm或650nm为参考波长），计算结果。