小鼠L苯丙氨酸解氨酶(PAL)ELISA检测试剂盒操作说明书

公司介绍
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小鼠L苯丙氨酸解氨酶(PAL)ELISA检测试剂盒操作说明书产品简介

中文名:小鼠L苯丙氨酸解氨酶(PAL)ELISA试剂盒

  别名:小鼠L苯丙氨酸解氨酶(PAL)ELISA kit

  供应商:上海

  规格:48t/96t

  保存:2-8℃

  有效期:6个月

  库存状态:现货供应。

  保 存:2-8℃,避光保存。

  适用范围:仅用于科研实验,禁用于临床。

  性能:敏感性高,特异性强,重复性。

  ELISA试剂盒种属:人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、猪犬、牛羊、鸡鸭、植物ELISA试剂盒等。

  试剂盒检测目的:用于测定血清,血浆及相关液体等样本。例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本。

 

  小鼠L苯丙氨酸解氨酶(PAL)ELISA试剂盒液体类标本:

  包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

  1)血清:

  室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

  2)血浆:

  应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

  3)尿液:

  用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

  4)细胞培养上清:

  检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/ 分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并 放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

  5)组织标本:

  切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

小鼠L苯丙氨酸解氨酶(PAL)ELISA试剂盒操作流程

  1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

  2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

  3. 样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。

  4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

  5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

  6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

  7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

 

小鼠L苯丙氨酸解氨酶(PAL)ELISA检测试剂盒注意事项

1.标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应。保存过久可发生聚合在ELISA中可使本底加深。

  2.冻结标本溶解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀宜轻缓,避免气泡,可上下颠倒混合,不要在混匀器上强烈震荡。

  3.浑浊或有沉淀的标本应先离心或过滤,澄清后再检测。

  4.反复冻融会使蛋白效价降低,所以代测样本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存。
 

 

小鼠L苯丙氨酸解氨酶(PAL)ELISA检测试剂盒组织结构:

  1、 血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心23分钟将血红细胞迅速小心地分离。

  2、 血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心60分钟去除颗粒。

  3、 细胞上清液:1000×g离心32分钟去除颗粒和聚合物。

  4、 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心33分钟,取上清液。

  5、 保存:如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

 

小鼠L苯丙氨酸解氨酶(PAL)ELISA检测试剂盒操作说明书 包含以下各组分:

  (1)结合物及标本的稀释液;

  (2)洗涤液,在板式ELISA中,常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水;

  (3)酶标记的抗原或抗体(结合物);

  (4)酶的底物;

  (5)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),ELISA试剂盒参考标准品和控制血清(定量测定中);

  (6)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);
 

 

ELISA试剂盒准备:

  试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

  1. 标准品复溶:试剂盒提供6管标准品,每管已标定浓度,并且冻干。实验前在每个标准品管中加入0.5mL样本稀释液,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动助其溶解,使其恢复为每个标准品管身标注的浓度。

  2. 20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

原创作者:上海生物科技有限公司

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