鸡烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)elisa试剂盒
名称:鸡烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)elisa试剂盒
供应商:生物
产品规格:48T/96T
方法:酶联免疫法/酶免法(ELISA kit)
试剂盒成分:酶标板,试剂,标准品等。
预期应用:ELISA法定量测定血清、细胞培养上清或其它相关生物液体中的含量。
经营种类:国产/进口原装/进口分装
产品用途:科研实验,不能用于临床应用
试剂盒保存:2-8℃(长期不使用时,部分试剂应放在-20℃条件下)
备注:本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断
保质期:6个月,所有试剂盒均提供*新批次。
种属:人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、猪犬、牛羊、鸡鸭、植物elisa试剂盒等。
elisa试剂盒实验操作步骤包括:从包被,封闭,加样,洗涤,加显色底物,终止液加入,到读书操作,还有标准曲线制作等详尽的操作说明。
ELISA的主要常用类型及步骤:
1. 间接法测抗体
间接法是检测抗体常用的方法。其原理为利用酶标记的抗抗体(二抗)以检测与固相抗原结合的受检抗体,故称为间接法。操作步骤如下:
1)将特异性抗原与固相载体联结,形成固相抗原,洗涤除去未结合的抗原及杂质。
2)加稀释的样本,保温反应。样本中的特异抗体与固相抗原结合,形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后,固相载体上只留下特异性抗体,样本中的其他成份在洗涤过程中被洗去。
3)加酶标抗抗体。固相免疫复合物中的抗体与酶标抗抗体结合,从而间接地标记上酶。洗涤后,固相载体上的酶量与样本中受检抗体的量正相关。
定性测定
(1)阳性判定值法(cut-off value,CO值):一般为阴性对照的平均A值加一个常数,试剂制备严格标准化,要先计算出阳性对照A值平均数和阴性对照A值平均数。标本A值≥CO值即为阳性。
(2)抑制率法:在竞争抑制法中结果可用抑制率表示。
抑制率(%)=(A阴性对照A- A待测)/阴性对照X100%,一般以抑制率≥50%为阳性
2)半定量测定 结果一般以滴度表示。将标本连续稀释后,进行ELISA检测,在阳性临界值以上的稀释度即为该标本的“滴度”。
3)定量测定 即用己知量的标准品作一系列稀释后进行ELISA测定,与待测标本同时进行测定,绘制标准曲线,结果以绝对量或活性单位表示之。
鸡烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)ELISA试剂盒 操作流程:
(1)待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。
(2)酶标板置4℃,包被过夜。
(3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
(4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
(12)分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,*终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
(13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。
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