自新冠病毒流行爆发以来，在国家药品监督管理局的部署下，2020年8月药审中心组织制定了《新型冠状病毒预防用疫苗研发技术指导原则（试行）》等一系列指导原则。原则中指出对于新冠疫苗的生物效价检测，要求进行体液免疫的指标评价，必要时对细胞免疫等其他免疫也进行相关研究，特别是采用新佐剂/新辅料或载体系统的疫苗，如目前市面上的mRNA疫苗、腺病毒载体疫苗等。金畔生物具有完善的抗原、抗体开发和生产平台以及假病毒构建平台，自主研发了新冠抗体ELISA检测试剂盒以及HIV和VSV双系统的新冠假病毒产品，并积极参与了国内各种新冠疫苗技术路线的临床前和临床研究工作，建立起对体液免疫和细胞免疫等的方法学。金畔生物为您提供新冠疫苗评价服务，从临床前到临床“一站式”解决方案，助力疫苗的快速上市！
1. 体液免疫检测
A. 基于新冠假病毒系统的中和活性检测服务
金畔生物新冠假病毒系统基于非复制型慢病毒，具有较高的安全性。该慢病毒外壳插入新冠病毒Spike蛋白，可以高度模拟新冠病毒经细胞表面受体ACE2而侵入细胞的机制；假病毒携带萤火虫荧光素酶报告基因，感染目的细胞的程度与发光信号成正比。
【服务详情】
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样本类型 |
血清、血浆或抗体等样本，由客户自行提供 |
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检测试剂 |
金畔生物提供实验所需HEK293-ACE2稳转细胞系，表达新冠病毒Spike蛋白的假病毒 |
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质控标准品 |
提供的阳性对照(人源化多抗) |
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交付文件 |
项目检测报告及原始数据 |
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检测周期 |
8-10个工作日 |
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服务优势 |
1.技术平台：金畔生物自主研发了HIV和VSV双系统的新冠假病毒产品； 2.突变株种类齐全：WT、Delta、Omicron(包括亚型BA.1、BA.2、BA.3、BA.4/BA.5、BA.2.12.1)等响应速度快； 3.检测能力：检测通量高，已为多家疫苗公司及科研机构提供假病毒中和抗体检测服务，保证结果真实可靠 |
【数据展示】
使用假病毒系统，在P2安全等级实验室条件下，测评具有潜在中和活性的候选抗体，并绘制抑制曲线(图1)。经P3实验室真病毒感染Vero E6的体外中和功能验证，确认候选抗体体外真病毒中和功能活性与本次假病毒试验结果基本一致。
供试品免疫小鼠后，于不同时间点收集血清，检测免疫后小鼠血清中针对WT假病毒毒株的中和抗体水平(图2)。
酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay，简写ELISA)指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。
【服务详情】
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样本类型 |
血清、血浆等样本，由客户自行提供 |
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检测试剂 |
小鼠新型冠状病毒RBD抗体/S抗体(IgG)检测试剂盒 小鼠新型冠状病毒Spike (Delta)抗体(IgG)检测试剂盒 小鼠新型冠状病毒Spike (Omicron)抗体(IgG)检测试剂盒 新型冠状病毒RBD抗体/S抗体(IgG)检测试剂盒 新型冠状病毒RBD抗体/S抗体(IgG)定量检测试剂盒 |
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交付文件 |
项目检测报告及原始数据 |
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检测周期 |
8-10个工作日 |
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服务优势 |
1.技术平台：金畔生物具有完善的抗原、抗体开发和生产平台，自主研发了新冠抗体ELISA检测试剂盒； 2.检测能力：响应速度快，已为多家疫苗企业及科研单位提供抗体检测服务； 3.可针对突变株(Delta、Omicron)进行结合抗体的检测 |
【案例展示】
用ELISA法半定量的方法（起始稀释倍数为500），测定小鼠血清中的新型冠状病毒的S相关IgG抗体。
表1 小鼠血清S IgG抗体滴度检测结果汇总表
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样品编号 Sample Number |
滴度值 Titer Value of Antibody |
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空白组1 |
<500 |
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空白组2 |
<500 |
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低剂量1 |
4500 |
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低剂量2 |
500 |
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高剂量1 |
13500 |
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高剂量2 |
13500 |
(注：表中数据为我司内部研发数据)
试验结果判断：
样本A值≥500，则测试样本为IgG抗体检测阳性。
样本A值<500，则测试样本为IgG抗体检测阴性。
2. 细胞免疫检测
《新型冠状病毒预防用疫苗研发技术指导原则(试行)》指南中明确提出，对于新冠疫苗的生物效价检测，由于对病原体认知有限及不同类型疫苗免疫机制不尽相同，鼓励对细胞免疫水平的生物学活性开展相关研究，特别是采用新佐剂/新辅料或载体系统的疫苗，如目前市面上的mRNA疫苗、腺病毒载体疫苗等。因此细胞免疫检测具有重要意义。
【检测原理】
在以PVDF膜为基质的96孔板中预先包被抗细胞因子的抗体，待检细胞与抗原刺激物共同在板孔中孵育，受到刺激后的待检细胞会产生细胞因子，细胞因子当即就被位于细胞下方的膜上的单克隆抗体所捕获。在洗去细胞之后，被捕获的细胞因子可以与生物素标记的第二抗体结合，然后用酶标亲和素再与生物素结合，进行化学酶联显色就会形成清晰可辨的斑点，一个斑点代表着一个能够产生细胞因子的细胞。根据斑点数目就可以分析分泌该细胞因子的细胞的频率，可直观的展示出细胞免疫的效果。
【服务详情】
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样本类型 |
脾细胞、PBMC等，由客户自行提供 |
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检测指标 |
IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-5、IL-13等常见细胞因子 |
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交付文件 |
项目检测报告 |
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检测周期 |
8-10个工作日 |
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服务优势 |
可提供新冠病毒野生株S蛋白全长肽库；可进行方法学验证 |
【案例展示】
利用野生株S蛋白肽库刺激小鼠脾细胞，检测疫苗免疫后T细胞免疫反应效果，即可通过斑点数监测细胞因子的表达。
图 3
【检测原理】
用抗细胞因子抗体与细胞表面或胞内特定亚群标志组合，即可检测不同细胞亚群细胞因子的分泌情况。不同于传统的细胞表面抗体染色，此方法先对细胞进行固定，以便稳定细胞膜和交联蛋白质，之后破膜处理，使抗体进入细胞内结合胞内细胞因子并显色。利用3激光10色流式细胞仪，检测疫苗免疫后的T细胞免疫，分析Th1和Th2比例。
【服务详情】
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样本类型 |
脾细胞、PBMC等，由客户自行提供 |
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检测指标 |
IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-5、IL-13等常见细胞因子 |
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交付文件 |
项目检测报告 |
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检测周期 |
15-20个工作日 |
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服务优势 |
可提供新冠病毒野生株S蛋白全长肽库 |
【案例展示】
利用ICS技术从单细胞水平上分析不同类型细胞因子的表达和对应细胞因子的细胞类型，用多种荧光标记单克隆抗体可在同一细胞水平上，同时测定多种不同的细胞因子表达情况。
图 4
业务咨询 → 签订合同 → 样品收验 → 实验检测 → 出具报告 → 交付结果