产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统 ：大肠杆菌
pMAL™ 蛋白融合表达系统（停产，有替代）
#E8200S 1 set
停产通知
产品于2020 年 6 月 30 日停产，替代产品为：NEBExpressTM MBP 融合表达及纯化系统（E8201）
单独出售的相关产品
Amylose 树脂
#E8021V 10 ml
#E8021S 15 ml
#E8021L 100 ml
Xa 因子蛋白酶
#P8010V 25 μg
#P8010S 50 μg
#P8010L 250 μg
pMAL-p5X 载体
#N8109S 10 μg
pMAL-c5X 载体
#N8108S 10 μg
特性
超过 75% 的蛋白可获得高效表达，蛋白产量可达 100 mg/L
可在细胞质或周质中表达：在周质或SHuffle® 细胞质中表达均可提高二硫键的形成，促进蛋白折叠
增强可溶性：MBP 融合蛋白增强了蛋白质在大肠杆菌中的可溶性
采用麦芽糖温和洗脱：无去污剂或变性剂对蛋白活性产生影响
采用麦芽糖温和洗脱：无去污剂或变性剂对蛋白活性产生影响
对于产品详细描述和 pMAL-p5X 载体图谱，包括 MCS（多克隆酶切位点），请见目录 386 页。
概述
pMAL 系统是一种高效的蛋白融合表达及纯化系统。pMAL 载体含有编码麦芽糖结合蛋白（maltosebinding protein, MBP）的大肠杆菌 malE 基因，其下游的多克隆位点便于目的基因插入，表达 N 端带有 MBP 的融合蛋白。通过“Ptac”强启动子和 MBP 翻译起始信号使克隆基因获得高效表达，并利用 MBP 对麦芽糖的特异性结合实现融合蛋白的一步亲和纯化（图 1）。
此系统的 pMAL 载体在邻近多克隆位点处含有一段编码特异性蛋白酶识别位点的序列，从而便于纯化后将目的蛋白与 MBP 切割分离，并且目的蛋白不含任何来自载体的氨基酸。为了实现这一目的，多克隆位点中有一限制性内切酶识别位点正好位于特异性蛋白酶识别位点处，同时也是目的基因插入的位点。
pMAL 系列载体可从 1 升的培养液中表达出 100 mg 的融合蛋白。大部分情况下，表达出的融合蛋白是可溶的，因为 MBP 已经被证实可提高大肠杆菌中表达蛋白的可溶性。尽管没有一种表达系统适用于所有克隆基因，但 pMAL 蛋白融合表达和纯化系统经证实：在被检测的已知蛋白中，有超过 75% 能表达出稳定产量。
由于 pMAL-c5X 载体上删除了 malE 信号序列，因此融合蛋白在细胞质中表达。而 pMAL-p5X 载体含有 malE 信号序列，它将引导融合蛋白穿越质膜进入细胞周质。
图 1：pMAL 系统流程示意图。
pMAL 蛋白融合表达和纯化系统组成
– pMAL-c5X, pMAL-p5X
– Amylose 树脂（结合容量 ～6-8 mg/ml 体积）
– Xa 因子蛋白酶
– MBP5（SDS-PAGE 电泳用 marker）
– MBP5-paramyosin-ΔSal
（Xa 因子蛋白酶切割的对照蛋白）
– E. coli ER2523（NEB 表达用感受态细胞）
上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375
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