Benzonase Nuclease 全能核酸酶/广谱核酸酶
酵母重组表达,无细菌内毒素残留,无蛋白酶污染
Benzonase Nuclease 全能核酸酶(广谱核酸酶);粘质沙雷氏菌(Serratia Marcescen);非特异性核酸内切酶;RIPA裂解液;DNA/RNA降解;CAS:9025-65-4;
Benzonase,中文名全能核酸酶,或广谱核酸酶,一种源于粘质沙雷氏菌(Serratia Marcescen,又称为灵杆菌)的非特异性核酸内切酶,由两个完全一样的亚基构成,每个亚基大约30kDa,含有245个氨基酸和两个必需的二硫键。可以切割和降解各种形式的DNA和RNA(单链,双链,线性,环状,或超螺旋形式),生成含有5’-磷酸末端的3-5个寡核苷酸残基片段,并且在很多种操作条件下有效。对核酸碱基序列无特异性要求,可在链内任意核苷酸间进行切割,广泛用于去除生物制品中的核酸。
主要应用:
1、科研研究中,作为培养细胞上清和细胞裂解液去粘度的*酶制剂,去除核酸干扰提高后续蛋白纯化或功能研究;
需求背景:进行重组蛋白纯化或者天然蛋白提取研究中,*步就需要用细胞/组织裂解液如RIPA对其进行裂解释放蛋白,此时往往伴随着大量的基因组DNA被释放出来,很多并不是独立存在的,往往与核蛋白以复合物的形式存在,导致提取物非常粘稠,呈鼻涕状。蛋白提取过程中若不能很好处理这些粘稠基因组,会造成蛋白提取效率的降低极核蛋白的丢失。传统方法有采用超声处理,DNase/RNase消化来降低或消除核酸影响,但由于操作的非标准化,通常难以评估此核酸清除步骤的有效性和数据稳定性。
此时,若在加裂解液的同时加入一定量的Benzonase Nuclease全能核酸酶(广谱核酸酶),可以很好的清除粗提物中的核酸,有效降低粘度见图1,提高后续操作的效率。
图1、细胞裂解液经Benonase处理和未处理的比较图。左管是仅加RIPA裂解液所得的离心产物,可看到鼻涕状粘稠物悬浮在管中;右管事加RIPA裂解液和Benonase共同处理所得的离心产物,可看到上清非常透明。
2、用在生化分析样品制备— — ELISA、色谱分析、双相电泳和足迹分析等过程,使用本品benonase处理含有核酸的蛋白样品,可提高分辨率,以及提高回收率。
3、疫苗工业、蛋白和多糖类制药工业,去除宿主核酸残留,使得疫苗和蛋白类核酸污染显著降低至皮克级别,提供生物功效。
4、防止细胞凝聚(Cell clumping),特别是融化冻存的细胞样品时;
应用优势:Benonase不仅无蛋白酶活性,而且不会对健康细胞的生长造成干扰。
应用背景:全血来源的外周血单个核细胞(PBMCs)在疫苗研究中具有重要的应用价值,比如,定量疫苗诱导的T细胞反应。T细胞反应实验zui初要求新鲜分离的细胞从而达到zui加的检测信号,这给大规模的实验中对样本处理提出严格的操作限制。然而,冻存PBMCs(尤其是从冻存血液中分离出的PBMCs)一旦融化非常容易聚集到一起,影响后续的分析。
应用示例:Smith JG et al.研究显示Benonase(≥50 U/ml)加入PBMC融化缓冲液中有效预防细胞凝聚,从而使得PBMC冷冻保存的应用成为可能。文献来源:Smith JG et al.Development and validation of a gamma interferon ELISPOT assay for quantitation of cellular immune responses to varicella-zoster virus. Clin Diagn Lab Immunol. 2001 Sep;8(5):871-9.
Fig. 2. Comparison of results with frozen PBMCs isolated from freshly collected blood versus blood stored overnight (4°C). SFC represent the adjusted VZV ELISPOT response, i.e., the mean response to VZV antigen for replicate wells minus the mean response to MRC-5 control antigen for replicate wells.
产品优势:
1、酵母重组表达,无细菌内毒素残留。大部分商业化的Benonase都是大肠杆菌重组表达,由于自身菌株特性,不管纯化方法如何,或多或少都会受细菌内毒素影响。
2、无蛋白酶残留,不会对蛋白本身造成干扰,影响测试结果准确性。
3、比活力高≥1.0×106U/mg蛋白活性单位定义:在37℃,pH8.0反应条件,2.625ml反应体系中,30min内使△A260吸收值变化1.0(相当于完全消化37μg鲑鱼精DNA成为寡核苷酸)所用的酶量定义为一个活性单位(U)
4、提供两种纯度的产品:≥ 90%(SDS-PAGE),以及≥ 99%(SDS-PAGE),前者满足zui基本的科研应用,价格更经济实惠;后者满足生物制品要求。
5、酶活性值:≥250 U/μL。对于小体积制备物,可用稀释缓冲液20mM Tris-Cl pH8.0, 2mM MgCl2, 2mM NaCl稀释到一定浓度,再加入体系中。稀释后溶液可4℃保存几天维持稳定。
6、液体酶形式提供,使用更方便。直接加入裂解液共同使用即可。
产品订购:
货号 | 产品名称 | 规格 | CAS NO. | ||
MP1509-25KU | Benzonase Nuclease 全能核酸酶 | 25KU | 9025-65-4 | ||
MP1509-50KU | Benzonase Nuclease 全能核酸酶 | 50KU | 9025-65-4 | ||
MP1509-100KU | Benzonase Nuclease 全能核酸酶 | 100KU | 9025-65-4 |
精品,能大量供货,且能提供冻干粉特殊包装,咨询。
我司提供的Benzonase,比Merck、Sigma同等类型的产品性价比高很多,且基本有现货,见下:
品牌/名称 | 货号 | 规格 | 浓度 | |
Merck(Benzonase Nuclease,纯度>90%,E. Coli) | 70746-3 | 10KU | 25 U/μL | |
Merck(Benzonase Nuclease,纯度>90%,E. Coli) | 71205-3 | 25KU | 250 U/μL | |
Sigma(Benzonase Nuclease,纯度>90%,E. Coli) | E1014 | 5KU | ≥250 U/μL | |
Sigma(Benzonase Nuclease,纯度>90%,E. Coli) | E1014 | 25KU | ≥250 U/μL |
注:Benzonase is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
相关产品:
货号 | 产品名称 | 规格 | ||
MP1501-100ML | RIPA Lysis Buffer (Strong) RIPA裂解液(强) | 100ml | ||
MP1502-100ML | RIPA Lysis Buffer (Medium) RIPA裂解液(中) | 100ml | ||
MP1503-100ML | RIPA Lysis Buffer (Weak) RIPA裂解液(弱) | 100ml | ||
MP1504-100ML | Lysis Buffer for WB/IP Assays 免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液 |
100ml | ||
MP1505-100ML | NP-40 Lysis Buffer NP-40裂解液 | 100ml | ||
MP1506-100ML | SDS Lysis Buffer SDS裂解液 | 100ml |
常见问题(FAQs):
问1:在实验的哪一步加入Benzonase全能核酸酶? |
问2:如何稀释Benzonase全能核酸酶? |
问3:Benzonase全能核酸酶是否无蛋白酶活性? |
问4:Benzonase全能核酸酶是否安全? |
问5:为什么Benzonase全能核酸酶不工作?什么会抑制其活性? |
问6:发现Benzonase全能核酸酶活性丧失,为什么? |
问7:一不小心将Benzonase全能核酸酶置于工作台上整周,是否能继续使用? |
问8:如何抑制Benzonase全能核酸酶活性? |
问9:如何去除体系中的Benzonase全能核酸酶? |
问10:Benzonase全能核酸酶与蛋白酶抑制剂cocktail兼容吗? |
Benzonase 全能核酸酶/广谱核酸酶 蛋白抽提
Benzonase 全能核酸酶/广谱核酸酶 蛋白抽提
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