SURE化学感受态细胞,热激法

 SURE化学感受态细胞（热激法）：SURE菌株是Agilent （Stratagene）公司开发，特别设计用于克隆在传统的大肠杆菌菌株中“无法克隆”的某些DNA段。本品是生物就SURE菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率＞5×108 cfu/μg DNA。

SURE Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

SURE；SURE-2；Stbl3；Stable；Direct repeats 正向重复片段；Retroviral sequences 逆转录病毒序列；Stratagene;
货号 产品名称 规格

MF2326-1000UL

 SURE Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

10×100μl
MF2326-5000UL SURE Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl

产品组分：

组分编号 组分名称

货号（规格）
MF2316-1000UL MF2316-5000UL
MF2326-A SURE Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2326-B Control Vector puC19, 10 pg/µl 10μl 10μl

菌株描述

SURE菌株是Agilent (Stratagene)公司开发，特别设计用于克隆在传统的大肠杆菌菌株中“无法克隆”的某些DNA段。SURE菌株破坏了重组酶系统整条通路上的组分，这些组分能催化重组和删除体内的非标准二级和三级结构，包括十字形（由反向重复序列引起）和Z字形的DNA，经常出现在真核生物DNA中，能阻止真核DNA克隆进入传统大肠杆菌菌株中。SURE含限制缺陷（McrA–, McrCB–, McrF–, Mrr–, HsdR–），使其无法对外源DNA进行标记和限制，从而提高外源甲基化DNA的克隆效率。也含内切酶缺陷（endA），和重组缺陷（recB recJ），提高了外源DNA的稳定性。存在于F´因子上的lacIq ZΔM15使菌株适用于蓝白斑。菌株本身含卡那霉素（KanR）和四环素（TetR）特性。

SURE菌株基因型：e14-(McrA-) Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)171 endA1 gyrA96 thi-1 supE44 relA1 lac recB recJ sbcC umuC::Tn5 (Kanr) uvrC [F´ proAB lacIqZΔM15 Tn10 (Tetr)].

产品描述

本品是SURE菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率＞5×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

注意事项

1）   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。

2）   zui号在冰上融化感受态细胞。

3）   进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4）   转化高浓度质粒或高效率连接产物可相应降低zui终用于涂板的菌量。

5）   菌株本身含卡那霉素和四环素特性，携带此两种抗性的质粒不适合克隆到SURE细胞。当携带抗霉素抗性基因（CamR）的质粒转化进入SURE细胞，使用添加100μg/ml氯霉素的LB固体平板来筛选克隆子。SURE细胞本身能耐受＜40μg/ml氯霉素，但对100μg/ml 氯霉素很敏感。

6）   为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到zui低。

7）   采用常规操作流程转化SURE感受态细胞，转化效率可达5×108 cfu/μg DNA。若是对转化效率要求更高，可使用标准操作流程。

8）   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10 pg/μl)，供对照实验用。

9）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

常规操作流程所有操作均在无菌条件的标准下进行

标准操作流程所有操作均在无菌条件的标准下进行

1）   冰上提前预冷14ml BD Falcon聚丙烯圆底离心管， 42℃预热SOC培养基。

2）   从-80℃取出感受态细胞迅速置于冰浴中5min使其完全融化。用手轻弹混匀吸取100 μl细胞到预冷的14ml离心管内。

3）   加1.7μl β-ME（1.42M）到细胞内。β-ME能提高转化效率

4）   轻弹管子。置于冰上孵育10min，每2min轻弹混匀细胞一次。

5）   往细胞内加入0.1-50ng目的DNA，轻弹混匀细胞，冰上静置孵育30min。

6）   42℃热激45s，热激过程的持续性非常重要。冰上静置2min，此过程不要摇动离心管。

1）   向每个离心管中加入900 μl预热的无菌SOC培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，225-250 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

2）   吸取≤200 µl 转化菌液，加到含相应抗生素的LB固体琼脂培养基上（若需要颜色反应，平板含IPTG+ X-gal），用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃过夜培养。注意：若是进行蓝白斑筛选，37℃至少培养17h，使得颜色能生成。另外将平板置于4℃孵育2h，能加强颜色反应。

附表1 固体和液体LB培养基配方

附表2 固体和液体2-YT培养基配方

SURE化学感受态细胞（热激法） SURE化学感受态细胞（热激法）

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