Y190酵母化学感受态细胞

Y190酵母化学感受态细胞：是GAL4系统酵母双杂交用实验菌株，MATa型，能直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过接合（mating）操作进行蛋白相互作用验证或筛库实验。转化标志为trp1，leu2，cyh2。报告基因为lacZ，HIS3，MEL1。

Y190 Chemically Competent Cell

酵母菌化学感受态细胞

产品关键词：

Y190-GAL4酵母单杂交系统；Y1HGold；pGBKT7；pGADT7；Ar Qual；X-α-Gal；Aureobasidin A （AbA）；金担子素；

产品订购：

货号 产品名称 规格 价格（元）
MF2364-1000UL Y190 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 10×100μl 290
MF2364-5000UL Y190 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 50×100μl 1320


产品组分：

组分编号 组分名称 保存

货号（规格）
MF2364-1000UL MF2364-5000UL
MF2364-A Y190 Chemically Competent Cell -80℃ 10×100μl 50×100μl
MF2364-B pGADT7 Control Vector (10ng/μl) -80℃ 10μl   10μl  
MF2364-C Carrier DNA (10μg/μl) -20℃ 100μl  500μl 
MF2364-D PEG/LiAC Solution +4℃ 5ml 25ml


产品描述

Y190是GAL4系统酵母双杂交用实验菌株，MATa型，能直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过接合（mating）操作进行蛋白相互作用验证或筛库实验。转化标志为trp1，leu2，cyh2。报告基因为lacZ，HIS3，MEL1。Y190-GAL4酵母双杂交系统需要两种质粒配套使用，pGB&pACT2或pGBKT7& pGADT7。pGB由或pGBKT7改造而来，筛选标志为Trp，用于表达DNA-BD与诱饵蛋白（bait）的融合蛋白；pACT2和pGADT7的结构和功能类似，筛选标志为Leu，用于表达AD与诱捕蛋白（prey）的融合蛋白。

本品为经特殊工艺制备的Y190酵母菌化学感受态细胞，用pGADT7质粒检测转化效率＞104cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存三个月。

基因型

MATa, ura3-52, his3-200, ade2-101, lys2-801, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, cyhr2, LYS2 : : GAL1 UAS-HIS3TATA–HIS3, MEL1 URA3 : : GAL1UAS-GAL1TATA-lacZ

注意事项

  1. 号在冰上融化感受态细胞。
  2. 转化高浓度质粒可相应减少用于涂板的菌量。同时转化2-3种质粒可适当增加质粒的用量。
  3. Y190对高温敏感，适生长温度为27-30℃，一旦高于31℃，生长速度和转化率都呈指数下降。
  4. 菌落变粉红色并不是污染，而是酵母细胞生长中的一种常见现象。当酵母细胞在平板上培养几天，将平板内的腺嘌呤消耗殆尽，那时酵母试图通过自身代谢途径合成腺嘌呤以供利用。然而，某些菌株ADE2基因被破坏，腺嘌呤合成受阻。且ADE4，5，6，7，8基因均正常。由此，造成中间产物P-ribosylamino imidazole（AIR）在细胞的积累使得菌落变为粉红色。
  5. 酵母菌在缺陷培养基上生长速度比YPDA培养基慢，营养缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板于29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板于29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆；涂SD双缺平板于29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆；
  6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

  1. Carrier DNA于使用前通过加热处理使其变性为单链状态，方法如下：95-100℃ 水浴或金属浴3min，快速插入冰中，静置3min。重复一次。
  2. 取100 µl冰上融化的Y190化学感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒0.5-3 µg，单链Carrier DNA 10 µl，PEG/LiAc 500µl，用枪吹打几次充分混匀，30℃水浴30 min（在15min时翻转6-8次混匀）。
  3. 之后将管子放42℃水浴15 min（在7.5min时翻转6-8次混匀）。
  4. 5000 rpm离心40s弃上清，用400 µl ddH2O重悬沉淀，离心30s弃上清。
  5. 用50 µl ddH2O重悬，涂板，放入29℃培养48-96 h。

Y190酵母化学感受态细胞

Y190酵母化学感受态细胞

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