Y1HGold酵母化学感受态细胞

Y1HGold酵母化学感受态细胞是Clontech GAL4-AbA酵母单杂交系统用的菌株,MATα型,能直接转化质粒进行文库筛选。Y1HGold-GAL4酵母单杂交系统需要两种质粒配套使用,分别为pAbAi和pGADT7。

Y1HGold Chemically Competent Cell 

酵母菌化学感受态细胞

产品关键词:

GAL4-AbA酵母单杂交系统Y1HGoldpAbAipGADT7Ar QualX-α-Gal Aureobasidin A AbA);金担子素;

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货号 产品名称 规格 价格(元)
MF2362-1000UL Y1HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 10×100μl 290
MF2362-5000UL Y1HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 50×100μl 1320


产品组分:

组分编号 组分名称 保存

货号(规格)

MF2362-1000UL MF2362-5000UL
MF2362-A Y1HGold Competent Cell -80 10×100μl 50×100μl
MF2362-B pGADT7 Control Vector (10ng/μl) -80 10μl   10μl  
MF2362-C Carrier DNA (5μg/μl) -20 100μl  500μl 
MF2362-D PEG/LiAC Solution +4 5ml 25ml


产品描述

酵母单杂交是在酵母双杂交的基础上发展起来,不同于双杂交用来研究蛋白蛋白间的相互作用,单杂交主要用于研究蛋白和DNA的相互作用。

Y1HGoldClontech GAL4-AbA酵母单杂交系统用的菌株,MATα型,能直接转化质粒进行文库筛选。

Y1HGold-GAL4酵母单杂交系统需要两种质粒配套使用,分别为pAbAipGADT7。前者筛选标志为Ura,用于表达pBait-AbAi构建子(通过将bait-DNA 单拷贝或串联重复序列克隆到pAbAi载体所得);后者筛选标志为Leu,用于表达GAL4 AD与诱捕蛋白(prey)的融合蛋白。Y1HGold-GAL4酵母单杂交系统的工作原理在于:基因组整合有pBait-AbAi的酵母报告菌株,当诱捕蛋白(prey)结合到诱饵序列(bait-DNA),GAL4 AD会激活AUR1-C报告基因的表达,这一表达使得细胞能够在含筛选抗生素金担子素(Aureobasidin AAbA)的培养基上生长。与传统的营养缺陷报告基因相比,AUR1-CAbAr)在很低浓度(100-200 ng/ml)下即可以有效杀死非抗性克隆,大大降低背景克隆生长。这一优势也可降低酵母单杂交假阳性发生的概率。

本品为经特殊工艺制备的Y1HGold酵母菌化学感受态细胞,用pGADT7质粒检测转化效率>104cfu/μg DNA。且在-80能稳定保存三个月。

基因型

MATα, ura3-52, his3-200, ade2-101, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, met-, MEL1

使用方法

  1. 100 µl冰上融化的Y1HGold化学感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒2-5 µgCarrier DNA 95-100 孵育5 min,快速冰浴。重复一次。)10 µlPEG/LiAc 500µl,用枪吹打几次充分混匀,30水浴30 min(在15min时翻转6-8次混匀)。
  2. 之后将管子放42水浴15 min(在7.5min时翻转6-8次混匀)。
  3. 5000 rpm离心40s弃上清,用400 µl ddH2O重悬沉淀,离心30s弃上清。
  4. 50 µl ddH2O重悬,涂板,放入恒温培养箱29培养48-96 h

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