Y1HGold Chemically Competent Cell
酵母菌化学感受态细胞
产品关键词:
GAL4-AbA酵母单杂交系统;Y1HGold;pAbAi;pGADT7;Ar Qual;X-α-Gal ;Aureobasidin A (AbA);金担子素;
产品订购:
货号 | 产品名称 | 规格 | 价格(元) |
MF2362-1000UL | Y1HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 | 10×100μl | 290 |
MF2362-5000UL | Y1HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 | 50×100μl | 1320 |
产品组分:
组分编号 | 组分名称 | 保存 |
货号(规格) |
|
MF2362-1000UL | MF2362-5000UL | |||
MF2362-A | Y1HGold Competent Cell | -80℃ | 10×100μl | 50×100μl |
MF2362-B | pGADT7 Control Vector (10ng/μl) | -80℃ | 10μl | 10μl |
MF2362-C | Carrier DNA (5μg/μl) | -20℃ | 100μl | 500μl |
MF2362-D | PEG/LiAC Solution | +4℃ | 5ml | 25ml |
产品描述
酵母单杂交是在酵母双杂交的基础上发展起来,不同于双杂交用来研究蛋白–蛋白间的相互作用,单杂交主要用于研究蛋白和DNA的相互作用。
Y1HGold是Clontech GAL4-AbA酵母单杂交系统用的菌株,MATα型,能直接转化质粒进行文库筛选。
Y1HGold-GAL4酵母单杂交系统需要两种质粒配套使用,分别为pAbAi和pGADT7。前者筛选标志为Ura,用于表达pBait-AbAi构建子(通过将bait-DNA 单拷贝或串联重复序列克隆到pAbAi载体所得);后者筛选标志为Leu,用于表达GAL4 AD与诱捕蛋白(prey)的融合蛋白。Y1HGold-GAL4酵母单杂交系统的工作原理在于:基因组整合有pBait-AbAi的酵母报告菌株,当诱捕蛋白(prey)结合到诱饵序列(bait-DNA),GAL4 AD会激活AUR1-C报告基因的表达,这一表达使得细胞能够在含筛选抗生素金担子素(Aureobasidin A,AbA)的培养基上生长。与传统的营养缺陷报告基因相比,AUR1-C(AbAr)在很低浓度(100-200 ng/ml)下即可以有效杀死非抗性克隆,大大降低背景克隆生长。这一优势也可降低酵母单杂交假阳性发生的概率。
本品为经特殊工艺制备的Y1HGold酵母菌化学感受态细胞,用pGADT7质粒检测转化效率>104cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存三个月。
基因型
MATα, ura3-52, his3-200, ade2-101, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, met-, MEL1
使用方法
- 取100 µl冰上融化的Y1HGold化学感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒2-5 µg,Carrier DNA (95-100℃ 孵育5 min,快速冰浴。重复一次。)10 µl,PEG/LiAc 500µl,用枪吹打几次充分混匀,30℃水浴30 min(在15min时翻转6-8次混匀)。
- 之后将管子放42℃水浴15 min(在7.5min时翻转6-8次混匀)。
- 5000 rpm离心40s弃上清,用400 µl ddH2O重悬沉淀,离心30s弃上清。
- 用50 µl ddH2O重悬,涂板,放入恒温培养箱29℃培养48-96 h。
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