Plant Protoplast Transformation Kit (PEG-Mediated)
植物原生质体转化试剂盒（PEG法）
Plant Protoplast 植物原生质体；PEG-mediated protoplast transformation 聚乙二醇介导的原生质体转化；Yakult Honsha；Cellulase R-10 纤维素酶R-10；Macerozyme R-10 离析酶R-10；二乙酸荧光素 (FDA) 原生质体活力检测；
产品信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | |
| Plant Protoplast Transformation Kit (PEG-Mediated) | MX7381-20T | 20T |
产品描述
原生质体（Protoplast）是指植物细胞去掉细胞壁后的裸露部分，体外培养条件下，具有以下功能：1）具全能型，可再生细胞壁，进行连续的细胞分裂且能再生成完整植株的能力；2）具摄取外源大分子、细胞器，以及细菌、病毒的能力，从而原生质体是进行遗传操作，基因转移的良好材料；3）通过同种和异种植物的原生质体融合，可产生异核体，实现体细胞杂交，从而培育出具有抗病原或更高产量的新品种。
原生质体（Protoplast）的制备主流的技术是酶解法，因其具有消化温柔，操作简单，且良好维持原生质体完整性的特点。工作原理是根据植物细胞壁的结构特征选择合适的酶进行处理，植物细胞壁主要由多糖（纤维素、半纤维素、果胶等）以及少量的蛋白和脂质构成。因此，通过使用纤维素酶、离析酶、半纤维素酶、果胶酶等复合酶来降解细胞壁，即可得到原生质体。
原生质体（Protoplast）的转化方法很多，主要有PEG介导转化法、电机穿孔转化法、脂质体介导转化法、农杆菌共培养转化法等。
本试剂盒是PEG介导的原生质体转化法，操作简单和便捷。试剂盒含有植物原生质体制备（不包含消化酶）和植物转化需要的所有试剂，按照单次10ml酶液体系来算，可做20次。
试剂盒组分
| 组分编号 | 组分名称 | 规格（20T） | 储存方法 |
| MX7381-A | Solution A-Enzyme solution buffer (2×) 溶液A | 100ml | -20℃保存 |
| MX7381-B | Solution B–W5 solution 溶液B | 200ml | -20℃保存 |
| MX7381-C | Solution C–MMG solution溶液C | 25ml | -20℃保存 |
| MX7381-D | Solution D–Transformation solution溶液D | 2.5ml | -20℃保存 |
| MX7381-E | Solution E–WI solution溶液E | 25ml | -20℃保存 |
| MX7381-F | Solution F–Reduced reagent溶液F | 1ml | RT保存 |
| MX7381-G | Solution G–BSA solution (50mg/ml) | 5ml | -20℃保存 |
使用方法
- 需要准备材料
- 离析酶R-10（比如，Cat#：MX7351-1G）
- 纤维素酶R-10（比如，Cat#：MX7352-1G）
- 70μm细胞筛网（比如，Cat#：352350, BD Bioscience）
- 平头镊子
- 一次性刀片
- 1.5ml离心管
- 50ml离心管
- 恒温加热水浴锅
- 原生质体分离
2.1 按照以下表格体系，配制即用型酶溶液：【注意：此溶液现配现用】
| 组分 | 10ml配制量 | 50ml配制量 |
| 溶液A (2×酶溶解液) | 5ml | 50ml |
| 离析酶R-10 | 40mg | 200mg |
| 纤维素酶R-10 | 150mg | 750mg |
| 溶液F（还原剂） | 5 μl | 25μl |
| 溶液G（50mg/ml BSA） | 0.2ml | 1ml |
| 无菌水 | 定容到10ml | 定容到50ml |
2.2 取生长状态良好的叶片切成0.5-1mm的小条，按照20个叶片加10ml即用型酶溶液的比例迅速将切好的叶片小条浸泡于即用型酶溶液内，室温避光酶解3h。
【注意】：酶解时间与叶片类型、叶片生长状态有关，请根据实际实验进行调整。酶溶液变为绿色表明原生质体已经分离，显微镜镜检确定是否分离。
2.3 酶解后加入10ml溶液B，轻柔混匀。
2.4 用70μm细胞筛网过滤步骤2.3获得的溶液，去除未消化的叶片和杂质，收集滤液到50ml离心管内。
2.5 滤液于100×g，室温离心2min，吸掉上清。
2.6 加1ml溶液B重悬原生质体，冰浴30min，使得原生质体自然沉淀到底部。
2.7 小心吸掉上清，不要触动原生质体沉淀。将沉淀重悬于1ml溶液C，即得到原生质体溶液。
- 原生质体转化
- 原生质体培养和收集
植物原生质体转化试剂盒 植物细胞培养
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