Nitric Oxide (NO) 一氧化氮；NO含量检测；分光光度计检测；Griess reagent；Carboxy-PTIO 一氧化氮清除剂；DAF-FM DA；
产品信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | |
| Nitric Oxide Colorimetric Assay Kit
一氧化氮检测试剂盒（显色法） |
MX4731-500T | 500T |
一氧化氮（Nitric Oxide, NO）是一种活性基，在许多关键生理功能中发挥重要作用。一氧化氮，一氧化氮合酶（NOS）催化精氨酸的氧化产物，参与宿主防御和发育、调节蛋白活化、以及与功能生物分子之间的直接共价相互作用。一氧化氮生成后迅速代谢生成亚硝酸盐（Nitrite）和硝酸盐（Nitrate），两种首要的、稳定的和非挥发性的裂解产物，通过对这两种产物的测定能间接反映样本内的一氧化氮水平。
本一氧化氮检测试剂盒（Nitric Oxide Colorimetric Assay Kit）利用经典的Griess reagent，对亚硝酸盐进行定量测定。本试剂盒以亚硝酸钠为标准品，通过优化的检测体系，检测下限达1μM，且在1~100μM范围内具有好的的线性关系。本试剂盒不仅能检测细胞、组织或培养液中的一氧化氮含量，还能检测血清、血浆或尿液中的一氧化氮含量。
| 组分编号 | 组分名称 | 规格 | 保存方式 |
| MX4731-A | 1M NaNO2 | 1ml | 2-8℃避光保存 |
| MX4731-B | Griess Reagent I | 25mL | 2-8℃避光保存 |
| MX4731-C | Griess Reagent II | 25mL | 2-8℃避光保存 |
保存与运输方法
保存：2-8℃避光保存，至少4个月稳定。
运输：冰袋运输。
保存与运输方法
保存：-20℃干燥保存，至少1年有效。
运输：冰袋运输。
注意事项
- 本试剂盒内的组分若保存不当发生颜色变化或沉淀，说明溶液已经失效，请勿再用。
- 当检测细胞或组织一氧化氮含量，不建议使用RIPA裂解液，因其可能在后续实验中产生沉淀，影响测试。建议使用免疫印迹及免疫沉淀用裂解液（不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂）（货号：MP1508-100ML）。
- 本试剂盒仅测定的是亚硝酸盐含量，不能检测硝酸盐，反映的并非总一氧化氮含量，只能在很大程度上反映一氧化氮的相对量，适合不需要精确定量的实验。若需要测定总一氧化氮含量，请选择总一氧化氮检测试剂盒（显色法）（货号：MX4732-50T），此试剂盒利用硝酸盐还原酶将硝酸盐还原为亚硝酸盐，然后利用Griess reagent测定亚硝酸盐，进而反映总一氧化氮水平。
- 本试剂盒对人体有害，请注意适当防护，避免直接接触人体或吸入体内。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
操作步骤
【注意】本试剂盒可用于培养液中的一氧化氮测定，培养液内的酚红和10%血清对测定无明显干扰。
【注意】本试剂盒可用于血清中的一氧化氮测定。当只需粗略计算，可直接用水稀释标准品，从而计算出血样中一氧化氮含量。当需精确计算，如果待测的正常血清是常见血清，能从文献查阅到一氧化氮浓度，那么用此已经一氧化氮浓度的正常血清稀释标准品，这样能得到比较精确的一氧化氮浓度。或使用已知浓度的人或其他动物血清来稀释标准品也可达到目的。或参考文献进行血清中一氧化氮浓度的测定。
【注意】样品中存在的一些内在成分可能会干扰测定，导致OD值和灵敏度降低。干扰程度依次顺序：尿液>血清>血浆>培养基。
- 需要设备
96孔酶标仪或可见光分光光度计，加波长540nm，或在520~560nm下测定，灵敏度可能会降低。
- 准备步骤
2.1 实验前将试剂从冰箱取出回温至室温。
2.2 标准品准备：每次测量均新做标准曲线，用待测样品所用溶液来稀释标准品，使得浓度在1~100μM内。
比如：当样品为细胞培养液上清，细胞培养液为DMEM+10% FBS，则用DMEM+10% FBS稀释标准品。标准品的浓度通常可取0，1，2，5，10，20，40，60，80，100μM。
2.3 样品准备：a）当样品为培养液上清，可直接取样。如果存在沉淀物，则需离心后取上清；b）当样品为组织或细胞，可快速冻融裂解，然后离心沉淀取上清，体积不足50μl，可用双蒸水、超纯水或0.9% NaCl稀释（相应的标准品也需用双蒸水、超纯水或0.9% NaCl稀释）。细胞或组织也可用免疫印迹及免疫沉淀用裂解液（不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂）来裂解，同样的，标准品需用裂解液稀释。
三、测定步骤
3.1 取50μl标准品或样品，加入96孔板内，做好标记；
3.2 每孔加入提前回至室温的50μl Griess reagent I；
3.3 每孔加入提前回至室温的50μl Griess reagent II；
3.4 室温避光孵育5min；
3.5 在540nm（或520~560nm）测定吸光度。需在30min内测完，以防褪色降低灵敏度。
3.6 以标准品浓度为横坐标，吸光度OD值为纵坐标绘制标准曲线，获得横纵坐标之间的函数关系式。之后将样品OD值代入公式来计算一氧化氮浓度。
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| 货号 | 名称 | 规格 |
| MP1508-100ML | 免疫印迹及免疫沉淀用裂解液（不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂） | 100ml |
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| MX4714-100MG | 2,3-Diaminonaphthalene (DAN), Suitable for fluorescence 2,3-二氨基萘 | 100mg |
| MX4715-100MG | 1,2-Diaminoanthraquinone (DAA, DAQ) 1,2-二氨基蒽醌 | 100mg |
一氧化氮检测试剂盒（显色法）
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