DH5α Electrocompetent cell
大肠杆菌电转感受态细胞
DH5α Electrocompetent Cell 电ji感受态细胞;*0;DH10B;XL1-Blue;1mm电转杯(电ji杯);Biorad 1652083;
货号 | 产品名称 | 规格 | |
MF2381-0250UL | DH5α Electrocompetent cell 大肠杆菌电转感受态细胞 | 5×50μl | |
MF2381-1000UL | DH5α Electrocompetent cell 大肠杆菌电转感受态细胞 | 20×50μl |
菌株描述
DH5α是实验室常用的一种质粒克隆用菌株,其φ80lacZ△M15基因的产物可与载体编码的 β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补,可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。特别适用于高效的质粒DNA克隆并能保证高拷贝质粒的稳定复制。
DH5α菌株基因型: F– φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk–,mk+) supE44λ- thi-1 gyrA96 relA1 phoA
产品描述
本品是大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺制作所得的电ji感受态细胞,只能用于DNA的电ji转化,不能用于热激转化。经pUC19质粒检测转化效率可达1×1010 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。
产品包装
组分编号 | 组分名称 |
货号(规格) |
|
MF2381-0250UL | MF2381-1000UL | ||
MF2381-A | DH5α Electrocompetent cell | 5×50μl | 20×50μl |
MF2381-B | Control Plasmid puC19, 10pg/μl | 10μl | 10μl |
保存与运输条件:
保存:-80℃保存,六个月有效。
运输:干冰运输。
注意事项
1) 感受态细胞保存在-80℃以下,不可反复冻融和放置时间过长,以免降低感受态细胞的转化效率。
- 整个转化操作,严格根据相应温度及无菌条件要求进行。
- 加入DNA的体积不应大于感受态体积的1/10。DNA不纯或存在盐、乙醇、蛋白及缓冲液等污染时,会导致转化效率急剧下降。
- 为确保高转化效率,整个操作过程应尽量轻柔,并保持低温。
5) 电ji感受态细胞加入电ji杯应避免产生气泡,气泡会增加弧光放电风险。
6) 电ji杯里的离子可增加溶液的电导,增大在含有细胞和DNA的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
7) 若转化大质粒或想获得较高转化效率,推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。
8) 对于连接产物转化:在转化前乙醇沉淀DNA后用适量TE缓冲液重悬产物,保证DNA浓度不超过100ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率,增加弧光放电的风险。
9) 混入质粒时应轻柔操作,吸取感受态细胞时不可用孔径过小的枪头(普通200μl枪头应剪去枪头尖0.6cm)。避免用力过猛,以免剪切力过大损伤细胞膜,降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少终用于涂板的菌量。
10) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】
1)将0.1 cm电ji杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净吸水纸上5min,待其沥干水分,正置5min,使乙醇充分挥发干净,立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖,冰中静置5min使其充分降温。
2)取-80℃保存的电ji感受态细胞插入冰中5min,待其完全融化。加入目的DNA(质粒或连接产物),用手拍打管底轻轻混匀,避免产生气泡,立即插入冰中。
【注意】:①若需要测定转化效率,使用1μl 对照质粒 pUC19(10 pg/μl);②对于连接产物,请用乙醇沉淀DNA后加入适量TE buffer(货号:MS3537-500ML)重悬,DNA浓度不要超过100ng/μl,体积不超过5μl/50μl感受态。
3)用200μl枪头将感受态-DNA混合物快速移到电ji杯中,避免产生气泡,盖上杯盖。
4)启动电转仪,设置参数:C=25 μF,PC=200 ohm,V=1800 V(此参数参考Bio-rad,具体使用请参考电转仪推荐步骤来操作),将电ji杯快速放入电转槽中,电ji完成快速插入冰中。
5)2min后从冰中取出电ji杯,放室温,加入700μl不含抗生素的无菌SOC培养基(室温),用1ml枪吹吸电ji杯底部数次混匀后,转移到50ml离心管(比如:BD Falcon 50ml锥形离心管),向离心管中补加SOC培养基至5ml。37℃,225 rpm复苏60min。
6) 5000rpm,1min离心收菌,重悬后取100-200μl涂布到含相应抗生素的SOC平板上(因菌量较大,若全部
涂板请选用直径15cm培养皿2-5个)。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养13-17h。
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