StarLighter SYBR Green qPCR mix
StarLighter SYBR Green qPCR Mix
(Universal)
货号 | 产品名称 | 规格 | 价格(元) |
FS-Q1001 | StarLighter SYBR Green qPCR Mix (Universal) | 100rxn×20μl (1ml) | 400 |
FS-Q1002 | StarLighter SYBR Green qPCR Mix (Universal) | 125rxn×20μl×4 (1.25ml×4) | 1800 |
产品简述:
StarLighter SYBR Green qPCR Mix是一款含基因工程酶的qPCR试剂。该基因工程酶可耐受高浓度的SYBR Green I染料,反应体系中加入足够多的SYBR Green I 染料,能够降低荧光信号达到阈值的循环数(Ct值),提高信噪比、线性和灵敏度。StarLighter SYBR Green qPCR Mix扩增特异性强,能有效减少非特异性扩增,数据结果更加可靠。产品能有效扩增复杂模板,能有效应对高GC或高AT的目的片段。同时抗抑制剂干扰能力强。
主要应用:
基因表达分析;
低拷贝数基因检测;
基因敲除验证;
基因表达验证;
RNA拷贝数检测(病毒及病菌等检测)。
技术特点:
扩增特异性强,数据结果可靠;
反应效率高,Ct值提前;
信噪比高,灵敏度高;
高GC或高AT的片段扩增效果好;
耐受抑制剂能力强。
优异表现:
(1)扩增特异性强,数据结果可靠
Fig1:
以人的cDNA为模板,使用引物ApoE及不同厂家试剂,扩增长度为322bp的片段, GC%=75.5%(高GC),分别得到StarLighter SYBR Green qPCR Mix与各竞品的扩增和熔解曲线图;
为qPCR反应后产物的电泳图。
注:SL-StarLighterSYBR Green qPCR Mix,使用此试剂得到非常完美的扩增曲线,荧光信号强,熔解曲线及电泳条带单一、准确。
Fig2:
以人的cDNA为模板,使用引物TR及不同厂家试剂,扩增长度为219bp的片段, GC%=64%,分别得到StarLighter SYBR Green qPCR Mix与各竞品的扩增和熔解曲线图;
为qPCR反应后产物的电泳图。
注:SL-StarLighterSYBR Green qPCR Mix,其余代表不同竞品。使用启衡星试剂得到非常完美的扩增曲线,荧光信号强,熔解曲线及电泳条带单一、准确。
Fig3:
以人的cDNA为模板,使用引物UBC及不同厂家试剂,扩增长度为123bp的片段, GC%=52.0%(GC 均衡),分别得到StarLighter SYBR Green qPCR Mix与各竞品的扩增和熔解曲线图;
为qPCR反应后产物的电泳图。
注:SL-StarLighterSYBR Green qPCR Mix,其余代表不同竞品。使用启衡星试剂得到非常完美的扩增曲线,荧光信号强,熔解曲线及电泳条带单一、准确。
总结Fig1、Fig2、Fig3如下图(SL为StarLighter SYBR Green qPCR Mix):
Primer
竞品 |
ApoE(人,DNA,amplicon length=322bp, GC%=75%) | TR(人,DNA,amplicon
length=219bp, GC%=64.0%) |
UBC(人,cDNA,amplicon length=123bp, GC%=52.0%) | |||
特异产物 | 扩增效率 | 特异产物 | 扩增效率 | 特异产物 | 扩增效率 | |
TG | √ | 149.631% | √ | 96.795% | ||
TK | √ | 102.101% | ||||
VZ | √ | 97.196% | ||||
AB | √ | 98.789% | ||||
TY3 | √ | 98.028% | √ | 110.361% | ||
KA | √ | 108.63% | ||||
SL | √ | 105.049% | √ | 95.998% | √ | 100.374% |
YS | √ | 99.905% | ||||
CW | ||||||
BR | √ | 95.611% | ||||
RC | √ | 92.762% | √ | 97.752% | ||
TY1 | √ | 96.83% |
(2)扩增效率高,梯度稀释线性范围好,低拷贝检测灵敏度高
Fig4:
以KAPA Ion Torrent Library Quantification Kit 中浓度为8.3pM 的标准品作为S1,依次5倍稀释得到(S2-S10)为模板,StarLighter SYBR Green qPCR Mix与竞品KP的扩增及熔解曲线图。
StarLighter SYBR Green qPCR Mix,从S1-S10,扩增效率(Eff=100.483%)好,扩增曲线完美,荧光信号强,熔解曲线单一峰,无非特异性扩增。
(3)荧光信号强,灵敏度高
Fig5:
使用市面上个品牌的qPCR试剂得到扩增曲线图,上图为去掉ROX后,各品牌的荧光信号值比较,竞品KP与StarLighter SYBR Green qPCR Mix的荧光信号强度最高。
(4)Ct值提早出现
Fig6:
以人DNA为模板,使用引物TR及不同厂家试剂,扩增长度为219bp的片段,GC%=64%;在产物经电泳验证为目的片段的前提下,扩增曲线去Rox校正后,StarLighter SYBR Green qPCR Mix CT值最小(灵敏度最高)。
(5)高GC或高AT的片段扩增效果好
Fig7:
以人的DNA为模板,使用引物F8-exon10及不同厂家试剂,扩增长度为399bp的片段,GC%=35.6%;从扩增效率上看, StarLighter SYBR Green qPCR Mix ,Eff=94.365%为最优,竞品TY3,Eff=121.91%,竞品KP,Eff=NA(最高浓度无扩增)。
Fig8:
以人的DNA为模板,使用引物hPRT1及不同厂家试剂,扩增长度为198bp的片段,GC%=35.6%;从扩增效率上看, StarLighter SYBR Green qPCR Mix ,Eff=100.868%为最优,竞品TY3,Eff=94.630%,竞品KP,Eff=98.334%。
Fig9:
以人的DNA为模板,使用引物β-actin及不同厂家试剂,扩增长度为290bp的片段,GC%=61.0%;从扩增效率上看, StarLighter SYBR Green qPCR Mix ,Eff=102.101%为最优,竞品TY3,Eff=110.787%,竞品KP,Eff= NA(最高浓度无扩增)。
Fig10:
以人的DNA为模板,使用引物ApoE及不同厂家试剂,扩增长度为322bp的片段,GC%=75.5%;从扩增效率上看, StarLighter SYBR Green qPCR Mix ,Eff=101.307%为最优,竞品TY3,Eff=150.097%,竞品KP,Eff= NA(最高浓度无扩增)。
(6)耐受抑制剂能力强
Fig11:
以人的DNA为模板,使用引物F8-exon10及不同厂家试剂,扩增长度为393bp的片段,GC%=35.6%;从扩增效率上看, StarLighter SYBR Green qPCR Mix ,Eff=94.365%为最优,竞品TY3,Eff=121.91%,竞品KP,Eff= NA(最高浓度无扩增)。
以天根磁珠法血液基因组提取试剂盒提取的DNA为模板,原始模板浓度为100ng/μl,使用10mM Tris(含0.05%吐温-20)稀释2倍后作为S1,之后依次使用同样稀释液按梯度稀释10倍分别得到S2、S3、S4。StarLighter SYBR Green qPCR Mix扩增效率符合要求,竞品TY3及竞品KP的S1模板扩增均受到不同程度的抑制。
Fig12:
以人的DNA为模板,使用引物ApoE及不同厂家试剂,扩增长度为322bp的片段,GC%=75.5%;从扩增效率上看, StarLighter SYBR Green qPCR Mix ,Eff=101.307%为最优,竞品TY3,Eff=150.097%,竞品KP,Eff= NA(最高浓度无扩增)。
以天根磁珠法血液基因组提取试剂盒提取的DNA为模板,原始模板浓度为100ng/μl,使用10mM Tris(含0.05%吐温-20)稀释2倍后作为S1,之后依次使用同样稀释液按梯度稀释10倍分别得到S2、S3、S4。StarLighter SYBR Green qPCR Mix扩增效率符合要求,竞品TY3及竞品KP的S1模板扩增均受到不同程度的抑制。
(7)保存稳定性
7.1、4℃保存稳定性
Fig13:
以人的DNA为模板,使用引物UBC,扩增长度为123bp的片段,GC%=52%;从扩增曲线上可以看出,4℃储存最多达39天时,未见明显信号强度降低和Ct值延迟。
7.2、常温与37℃保存稳定性
Fig14:
以人的DNA为模板,使用引物UBC,扩增长度为123bp的片段,GC%=52%;从扩增曲线上可以看出,常温或37℃储存最多达8天时,未见明显信号强度降低和Ct值延迟。
7.3、冻融稳定性
Fig15:
以人的DNA为模板,使用引物UBC,扩增长度为123bp的片段,GC%=52%;从扩增曲线上可以看出,冻融次数最多达35次,未见明显信号强度降低和Ct值延迟。
7.1、7.2、7.3实验结果均出自ABI7500 Fast机器,使用Fast模式,程序为95℃、5min,40cycles(95℃、30sec,60℃、45sec),加熔解曲线。
7.4、不同机型/程序稳定性
(1)使用ABI QuantStudio6 Flex
Fig16:
如上图,使用引物ApoE,扩增长度为322bp的片段, GC%=75.5%;扩增体系与反应程序同7.1、7.2、7.3,默认升温1.9℃/s,降温1.6℃/s。从扩增及熔解曲线上可以看出,扩增产物特异性很好,Eff=99%.
(2)使用ABI 7500 FAST STANDARD 模式
Fig17:
如上图,使用引物TR,扩增长度为219bp的片段, GC%=64%;
从扩增及熔解曲线上可以看出,扩增产物特异性很好,Eff=103%.
Fig18:
如上图,使用引物hPRT1,扩增长度为198bp的片段, GC%=37%;
从扩增及熔解曲线上可以看出,扩增产物特异性很好,Eff=95%
定量反应(体系、程序参数)
(1)推荐反应体系
组分 | 10 µl /rxn | 20 µl /rxn | 终浓度 |
H2O(PCR级) | 补至10µl | 补至20µl | N/A |
2× SYBR qPCR Ready Mix | 5μl | 10μl | 1x |
10 µM 正向引物 | 0.3 μl | 0.6 μl | 300 nM |
10 µM 反向引物 | 0.3 μl | 0.6 μl | 300 nM |
cDNA模板 | (<50ng/μl) | (<50ng/μl) | 根据需要 |
RoX | 0.2μl | 0.4μl | 50/500nM(根据仪器需要) |
(2)推荐反应程序
步骤 | 温度 | 时间 | 循环 |
酶激活 | 95℃ | 5 min | |
变性 | 95℃ | 30 sec | 40 cycles |
退火/延伸 数据采集 | 60℃ | ≥20 sec(根据仪器和扩增产物长度;若采用三步法,20sec退火后,72℃延伸1sec) | |
熔解曲线 | 根据仪器要求 |