StarLighter SYBR Green qPCR Mix是含基因工程酶的qPCR试剂FS-Q1001,FS-Q1002

StarLighter SYBR Green qPCR mix

产品描述

StarLighter SYBR Green qPCR Mix

(Universal)

 

货号 产品名称 规格 价格(元)
FS-Q1001 StarLighter SYBR Green qPCR Mix (Universal) 100rxn×20μl (1ml) 400
FS-Q1002 StarLighter SYBR Green qPCR Mix (Universal) 125rxn×20μl×4 (1.25ml×4) 1800

 

产品简述:

StarLighter SYBR Green qPCR Mix是一款含基因工程酶的qPCR试剂。该基因工程酶可耐受高浓度的SYBR Green I染料,反应体系中加入足够多的SYBR Green I 染料,能够降低荧光信号达到阈值的循环数(Ct值),提高信噪比、线性和灵敏度。StarLighter SYBR Green qPCR Mix扩增特异性强,能有效减少非特异性扩增,数据结果更加可靠。产品能有效扩增复杂模板,能有效应对高GC或高AT的目的片段。同时抗抑制剂干扰能力强。

 

主要应用:

基因表达分析;

低拷贝数基因检测;

基因敲除验证;

基因表达验证;

RNA拷贝数检测(病毒及病菌等检测)。

 

 

技术特点:

扩增特异性强,数据结果可靠;

反应效率高,Ct值提前;

信噪比高,灵敏度高;

GC或高AT的片段扩增效果好;

耐受抑制剂能力强。

 

优异表现:

(1)扩增特异性强,数据结果可靠

  StarLighter SYBR Green qPCR mix

StarLighter SYBR Green qPCR mix

StarLighter SYBR Green qPCR mix

Fig1

以人的cDNA为模板,使用引物ApoE及不同厂家试剂,扩增长度为322bp的片段, GC%=75.5%(高GC),分别得到StarLighter SYBR Green qPCR Mix与各竞品的扩增和熔解曲线图;

qPCR反应后产物的电泳图。

注:SL-StarLighterSYBR Green qPCR Mix,使用此试剂得到非常完美的扩增曲线,荧光信号强,熔解曲线及电泳条带单一、准确。

StarLighter SYBR Green qPCR mix

StarLighter SYBR Green qPCR mix

StarLighter SYBR Green qPCR mix

 

Fig2

以人的cDNA为模板,使用引物TR及不同厂家试剂,扩增长度为219bp的片段, GC%=64%,分别得到StarLighter SYBR Green qPCR Mix与各竞品的扩增和熔解曲线图;

qPCR反应后产物的电泳图。

注:SL-StarLighterSYBR Green qPCR Mix,其余代表不同竞品。使用启衡星试剂得到非常完美的扩增曲线,荧光信号强,熔解曲线及电泳条带单一、准确。

StarLighter SYBR Green qPCR mix

StarLighter SYBR Green qPCR mix

StarLighter SYBR Green qPCR mix

 

Fig3

以人的cDNA为模板,使用引物UBC及不同厂家试剂,扩增长度为123bp的片段, GC%=52.0%(GC 均衡),分别得到StarLighter SYBR Green qPCR Mix与各竞品的扩增和熔解曲线图;

qPCR反应后产物的电泳图。

注:SL-StarLighterSYBR Green qPCR Mix,其余代表不同竞品。使用启衡星试剂得到非常完美的扩增曲线,荧光信号强,熔解曲线及电泳条带单一、准确。

总结Fig1Fig2Fig3如下图(SLStarLighter SYBR Green qPCR Mix):

StarLighter SYBR Green qPCR mixPrimer

 

竞品

ApoE(人,DNAamplicon length=322bp, GC%=75% TR(人,DNAamplicon

 length=219bp, GC%=64.0%

UBC(人,cDNAamplicon length=123bp, GC%=52.0%
特异产物 扩增效率 特异产物 扩增效率 特异产物 扩增效率
TG 149.631% 96.795%
TK 102.101%
VZ 97.196%
AB 98.789%
TY3 98.028% 110.361%
KA 108.63%
SL 105.049% 95.998% 100.374%
YS 99.905%
CW
BR 95.611%
RC 92.762% 97.752%
TY1 96.83%

 

(2)扩增效率高,梯度稀释线性范围好,低拷贝检测灵敏度高

StarLighter SYBR Green qPCR mixStarLighter SYBR Green qPCR mix

StarLighter SYBR Green qPCR mix

Fig4

KAPA Ion Torrent Library Quantification Kit 中浓度为8.3pM 的标准品作为S1,依次5倍稀释得到(S2-S10)为模板,StarLighter SYBR Green qPCR Mix与竞品KP的扩增及熔解曲线图。

StarLighter SYBR Green qPCR Mix,从S1-S10,扩增效率(Eff=100.483%)好,扩增曲线完美,荧光信号强,熔解曲线单一峰,无非特异性扩增。

 

(3)荧光信号强,灵敏度高

StarLighter SYBR Green qPCR mixStarLighter SYBR Green qPCR mix StarLighter SYBR Green qPCR mix StarLighter SYBR Green qPCR mix  StarLighter SYBR Green qPCR mix

Fig5:

使用市面上个品牌的qPCR试剂得到扩增曲线图,上图为去掉ROX后,各品牌的荧光信号值比较,竞品KPStarLighter SYBR Green qPCR Mix的荧光信号强度最高。

 

(4)Ct值提早出现

StarLighter SYBR Green qPCR mixStarLighter SYBR Green qPCR mixStarLighter SYBR Green qPCR mixStarLighter SYBR Green qPCR mix

Fig6

以人DNA为模板,使用引物TR及不同厂家试剂,扩增长度为219bp的片段,GC%=64%;在产物经电泳验证为目的片段的前提下,扩增曲线去Rox校正后,StarLighter SYBR Green qPCR Mix CT值最小(灵敏度最高)。

 

5)高GC或高AT的片段扩增效果好

 StarLighter SYBR Green qPCR mix

Fig7

以人的DNA为模板,使用引物F8-exon10及不同厂家试剂,扩增长度为399bp的片段,GC%=35.6%;从扩增效率上看, StarLighter SYBR Green qPCR Mix Eff=94.365%为最优,竞品TY3Eff=121.91%,竞品KPEff=NA(最高浓度无扩增)。

 StarLighter SYBR Green qPCR mix

Fig8

以人的DNA为模板,使用引物hPRT1及不同厂家试剂,扩增长度为198bp的片段,GC%=35.6%;从扩增效率上看, StarLighter SYBR Green qPCR Mix Eff=100.868%为最优,竞品TY3Eff=94.630%,竞品KPEff=98.334%

 StarLighter SYBR Green qPCR mix

Fig9

以人的DNA为模板,使用引物β-actin及不同厂家试剂,扩增长度为290bp的片段,GC%=61.0%;从扩增效率上看, StarLighter SYBR Green qPCR Mix Eff=102.101%为最优,竞品TY3Eff=110.787%,竞品KPEff= NA(最高浓度无扩增)。

 StarLighter SYBR Green qPCR mix

Fig10

以人的DNA为模板,使用引物ApoE及不同厂家试剂,扩增长度为322bp的片段,GC%=75.5%;从扩增效率上看, StarLighter SYBR Green qPCR Mix Eff=101.307%为最优,竞品TY3Eff=150.097%,竞品KPEff= NA(最高浓度无扩增)。

 

6)耐受抑制剂能力强

StarLighter SYBR Green qPCR mixStarLighter SYBR Green qPCR mixStarLighter SYBR Green qPCR mixStarLighter SYBR Green qPCR mixStarLighter SYBR Green qPCR mixStarLighter SYBR Green qPCR mixStarLighter SYBR Green qPCR mix StarLighter SYBR Green qPCR mix

Fig11

以人的DNA为模板,使用引物F8-exon10及不同厂家试剂,扩增长度为393bp的片段,GC%=35.6%;从扩增效率上看, StarLighter SYBR Green qPCR Mix Eff=94.365%为最优,竞品TY3Eff=121.91%,竞品KPEff= NA(最高浓度无扩增)。

以天根磁珠法血液基因组提取试剂盒提取的DNA为模板,原始模板浓度为100ng/μl,使用10mM Tris(含0.05%吐温-20)稀释2倍后作为S1,之后依次使用同样稀释液按梯度稀释10倍分别得到S2S3S4StarLighter SYBR Green qPCR Mix扩增效率符合要求,竞品TY3及竞品KPS1模板扩增均受到不同程度的抑制。StarLighter SYBR Green qPCR mix 

 StarLighter SYBR Green qPCR mix

Fig12

以人的DNA为模板,使用引物ApoE及不同厂家试剂,扩增长度为322bp的片段,GC%=75.5%;从扩增效率上看, StarLighter SYBR Green qPCR Mix Eff=101.307%为最优,竞品TY3Eff=150.097%,竞品KPEff= NA(最高浓度无扩增)。

以天根磁珠法血液基因组提取试剂盒提取的DNA为模板,原始模板浓度为100ng/μl,使用10mM Tris(含0.05%吐温-20)稀释2倍后作为S1,之后依次使用同样稀释液按梯度稀释10倍分别得到S2S3S4StarLighter SYBR Green qPCR Mix扩增效率符合要求,竞品TY3及竞品KPS1模板扩增均受到不同程度的抑制。

7)保存稳定性

7.14℃保存稳定性

 

StarLighter SYBR Green qPCR mix

 

 

 

 

Fig13

以人的DNA为模板,使用引物UBC,扩增长度为123bp的片段,GC%=52%;从扩增曲线上可以看出,4℃储存最多达39天时,未见明显信号强度降低和Ct值延迟。

7.2、常温与37℃保存稳定性

 

StarLighter SYBR Green qPCR mix

Fig14

以人的DNA为模板,使用引物UBC,扩增长度为123bp的片段,GC%=52%;从扩增曲线上可以看出,常温或37℃储存最多达8天时,未见明显信号强度降低和Ct值延迟。

 7.3、冻融稳定性

 StarLighter SYBR Green qPCR mix

Fig15

以人的DNA为模板,使用引物UBC,扩增长度为123bp的片段,GC%=52%;从扩增曲线上可以看出,冻融次数最多达35次,未见明显信号强度降低和Ct值延迟。

 7.17.27.3实验结果均出自ABI7500 Fast机器,使用Fast模式,程序为95℃5min40cycles95℃30sec60℃45sec),加熔解曲线。

 7.4、不同机型/程序稳定性

1)使用ABI QuantStudio6 Flex

StarLighter SYBR Green qPCR mix

Fig16

如上图,使用引物ApoE,扩增长度为322bp的片段, GC%=75.5%;扩增体系与反应程序同7.17.27.3,默认升温1.9℃/s,降温1.6℃/s。从扩增及熔解曲线上可以看出,扩增产物特异性很好,Eff=99%.

2)使用ABI 7500 FAST STANDARD 模式

StarLighter SYBR Green qPCR mix

Fig17:                                                        

如上图,使用引物TR,扩增长度为219bp的片段, GC%=64%;        

从扩增及熔解曲线上可以看出,扩增产物特异性很好,Eff=103%.

StarLighter SYBR Green qPCR mix

Fig18

如上图,使用引物hPRT1,扩增长度为198bp的片段, GC%=37%

从扩增及熔解曲线上可以看出,扩增产物特异性很好,Eff=95%

 

定量反应(体系、程序参数)

1)推荐反应体系

组分  10 µl /rxn  20 µl /rxn 终浓度
H2OPCR级) 补至10µl 补至20µl  N/A
2× SYBR qPCR Ready Mix 5μl 10μl 1x
10 µM 正向引物    0.3 μl  0.6 μl 300 nM  
10 µM 反向引物    0.3 μl  0.6 μl 300 nM  
cDNA模板 <50ng/μl <50ng/μl 根据需要
RoX 0.2μl 0.4μl 50/500nM(根据仪器需要)

 

2)推荐反应程序

步骤 温度 时间 循环
酶激活 95℃ 5 min
变性 95℃ 30 sec 40 cycles
退火/延伸 数据采集 60℃ ≥20 sec(根据仪器和扩增产物长度;若采用三步法,20sec退火后,72℃延伸1sec
熔解曲线 根据仪器要求

 

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