NEB代理 , 蛋白表达和纯化技术,表达系统:酵母,BstXI #R0113L

产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统 :酵母

BstXI

#R0113L 5,000 units

#R0113S 1,000 units

#R0113V 500 units

识别位点

NEB代理 , 蛋白表达和纯化技术 , 表达系统 :酵母

在不同反应缓冲液的活性

NEBuffer 1.1: <10%
NEBuffer 2.1: 50%
NEBuffer 3.1: 100%
CutSmart Buffer: 25%

特性

重组酶、省时酶。

反应条件

NEBuffer 3.1,37℃。
热失活:80℃ 20 分钟。

浓度

10,000 units/ml。

甲基化敏感性

对 dcm 甲基化敏感。

注意事项

甘油浓度 > 5% 条件下可能出现星号活性。

NEB代理 , RNA 试剂 , RNA 合成,#M2081L,Faustovirus 病毒加帽酶FCE

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 合成

Faustovirus 病毒加帽酶(FCE)

#M2081L 2500 units

#M2081S 500 units

产品特性

·Faustovirus 病毒加帽酶(FCE)用于在 RNA 5′末端的三磷酸和二磷酸位置加 m7G-帽(Cap-0)

·有效提高加帽效率,适用于困难加帽底物
·使用更少的酶即可高效加帽
·反应温度范围更宽,更灵活
·平移替代牛痘加帽系统(VCE),几乎无需优化
·Faustovirus 病毒加帽酶(FCE)与mRNA帽结构 2′-O-甲基转移酶协同作用,可一步加帽至 Cap-1 结构
·FCE 无专利费

产品描述

 Faustovirus 病毒加帽酶(FCE)在转录产物 5′末端的三磷酸和二磷酸位置催化加入 N7甲基鸟苷帽(m7G),产生带有 Cap-0 帽的 RNAFCE 是一种单亚基酶,具有给 RNA Cap-0 帽所需的三种酶活:三磷酸酶,鸟嘌呤转移酶,(鸟嘌呤-N7甲基转移酶。真核生物 mRNA 成熟的关键步骤是:添加 Cap-0 帽结构、第一个核苷酸 2′-O-甲基化(Cap-1)和多聚腺苷化加尾(polyA))。Cap-0 结构还增加了 RNA 的稳定性,避免三磷酸化的 RNA 激活天然免疫反应。

FCE 从低温至 55℃ 高温范围内,均能够维持加帽活性。一般情况下,1 µl FCE25 units)可以在 37°C 条件 1 小时内完成>100 µg RNA 的加帽。本产品提供加帽所需的 GTP S-腺苷甲硫氨酸(SAM)。

来源:由大肠杆菌(E. coli)质粒表达 Faustovirus 病毒加帽酶(FCE)编码序列,C-端带有 His-tag

1FCE 提高加帽效率,优化操作流程

 NEB代理 , RNA 试剂 , RNA 合成

A. 分别使用 FCE 和牛痘病毒加帽系统(VCE)在 37℃ 条件下加帽。以含有不同 5´-UTR 序列(如图所示)的 FLuc 转录本(1.77 kb)作为加帽底物(200 μg,相当于约 350 pmol,浓度为 7 μM),分别使用 FCE25 units 相当于 1 pmol,在 50 μl 体系中浓度为 20 nM)或 VCE25 units 相当于 1 pmol,在 50 μl 体系中浓度为 20 nM37℃ 孵育 1 小时。需要注意的是,上述条件低于我们推荐的酶用量,用以展示 FCE VCE 的加帽效率更高,以及在流程优化上的优势。

B. 使用 FCE 分别在 37℃ 和 42℃ 条件下进行 mRNA 加帽。以含有不同 5´-UTR 序列(如图所示)的 FLuc 转录本(1.77 kb)作为加帽底物(200 μg,相当于约 350 pmol,浓度为 7 μM),使用 FCE25 units 相当于 1 pmol,浓度为 20 nM37℃ 孵育 1 小时。需要注意的是,上述条件低于我们推荐的酶用量,用以展示 FCE 在流程优化上的优势。加帽反应体系为 50 μl,含有 0.1 mM SAM0.5 mM GTP、以及用于 FCE 反应的 1X FCE 加帽缓冲液或用于 VCE 反应的 1X 加帽缓冲液。反应结束后,进行靶向 RNase H 切割,并使用 LC-MS 检测 mRNA 加帽效率。

2FCE RNA 加帽反应适用于更宽泛的温度范围

NEB代理 , RNA 试剂 , RNA 合成

分别使用 FCE VCE 15-60℃ 条件下进行 RNA 加帽。20 μl 加帽反应体系中含有:2.5 μM RNA 底物(5´-三磷酸 20mer 3´-FAM)、8 nM 加帽酶、0.1 mM SAM 0.5 mM GTPFCE 加帽反应在 1X FCE 加帽缓冲液中进行,VCE 加帽反应在 1X 加帽缓冲液中进行。所有反应在指定的反应温度下孵育 30 分钟。通过毛细管电泳检测反应产物。

3FCE 可对各种 RNA 进行高效 5’加帽(50 units至少加帽 100 ug RNA

NEB代理 , RNA 试剂 , RNA 合成

上图展示了 FCE 对多种 mRNA 的加帽效果。以含有不同 5´-UTR 序列(如图所示)的 FLuc 转录本(共 1.77 kb)作为加帽底物(200 μg,相当于约 350 pmol,浓度为 3.5 uM),在含有 1X FCE 缓冲液的 100 μl 反应体系中加入 2 μl 的 FCE(50 units 相当于 2 pmol,浓度为 20 nM),37℃ 条件下孵育 1 小时。反应结束后,进行靶向 RNase H 切割,并使用 LC-MS 检测 mRNA 加帽效率。

NEB代理,RNA 试剂,RNA 合成,无机焦磷酸酶Yeast,#M2403L

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 合成

无机焦磷酸酶(Yeast)

#M2403L 50 units

#M2403S 10 units

相关产品

无机焦磷酸酶(大肠杆菌)

特性

 反转录反应中提高 RNA 产量
 增强 DNA 复制能力

概述

无机焦磷酸酶(PPase)催化无机焦磷酸盐水解生成正磷酸盐。
P207–4 + H20 → 2HP04–2 

来源

无机焦磷酸酶(E. coli)纯化自携带 E. coli 无机焦磷酸酶基因的重组 E. coli 菌株。
无机焦磷酸酶(酵母)纯化自重组 E. coli 菌株,携带有从酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)克隆的 ppa 基因和蟾分枝杆菌(Mycobacterium xenopi)GyrA 内含肽的融合基因。由 Biohelix 公司(现在是Quidel 公司的全资子公司)研发,由 New England Biolabs 生产。

质保声明

无机焦磷酸酶经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。

单位定义

1 单位指标准反应条件下每分钟催化无机焦磷酸盐生成 1 μmol 磷酸盐所需的酶量。

浓度

100 units/ml。 

上海金畔生物科技有限公司官网,NEB代理,订购热线:18301939375

有关该产品特性和应用的上海金畔生物科技有限公司官网,NEB代理,订购热线:18301939375。