M-MulV 反转录酶
#M0253L 50,000 units
#M0253S 10,000 units
特性
RT-PCR
概述
来源
反应条件
热失活:65℃ 20 分钟。
质保声明
无核酸内切酶、外切酶和 RNase 污染。
单位定义
浓度
200,000 units/ml。
MCE抑制剂∣Abcam CST Santa抗体∣蛋白、酶、磁珠
无核酸内切酶、外切酶和 RNase 污染。
200,000 units/ml。
禽骨髓母细胞瘤病毒(AMV)。
无核酸内、外切酶和 RNase 污染。
10,000 units/ml。
200,000 units/ml。
无核酸内、外切酶和 RNase 污染。
15,000 units/ml。
模板置换反转录酶和其相应的反应缓冲液能够在反转录反应中有效地实现模板置换。混合液中含有独特的反转录酶和小鼠 RNase 抑制剂。与竞争对手的反转录酶产品不同,NEB 的产品不需要添加任何添加剂(如 PEG 或甜菜碱)来优化性能,从而简化了反应建立流程。与模板置换寡核苷酸(TSO)搭配使用, 合成的 cDNA 3’端可以选择性地加入已知序列。由此获得的 cDNA 可进行 PCR 扩增,也可作为 5’RACE( cDNA 末端快速扩增)或第二链 cDNA 合成的模板。
以极低起始量模板(单细胞/细胞核或 2 pg 总 RNA)制备 RNA-seq 文库
储存温度(℃) |
浓度 |
|
模板置换反转录缓冲液 |
-20 |
4 X |
注意:#S1316 5´ 末端未磷酸化。
Oligo d(N)n 引物适用于 mRNA 的扩增和测序,能与 mRNA 的 3´ -poly A 尾或带尾的 cDNA 退火。
注意:#S1316 5´ 末端未磷酸化。
注意:#S1316 5´ 末端未磷酸化。
有关该产品特性和应用的上海金畔生物科技有限公司官网,NEB代理,订购热线:18301939375。
Oligo d(N)n 引物适用于 mRNA 的扩增和测序,能与 mRNA 的 3´ -poly A 尾或带尾的 cDNA 退火。
注意:#S1316 5´ 末端未磷酸化。
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Oligo d(N)n 引物适用于 mRNA 的扩增和测序,能与 mRNA 的 3´ -poly A 尾或带尾的 cDNA 退火。
注意:#S1316 5´ 末端未磷酸化。
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表中所描述的连接方法都有过报道,但可能需要进一步优化。
无核酸内切酶、核酸外切酶污染。
T4 多聚核苷酸激酶能够催化 ATP 的 γ-位磷酸基团转移到寡核苷酸链(双链或单链 DNA 或 RNA)的 5´ -羟基末端以及 3´ -单磷酸核苷上。T4 多聚核苷酸激酶(NEB #M0201)还具有 3´ 磷酸酶活性,将 3´ -磷酸基团从寡核苷酸的 3´ 磷酸末端、脱氧 3´ -单磷酸核苷和脱氧 3´ -二磷酸核苷上水解掉。经修饰后的酶(NEB #M0236)具有所有激酶的活性,但是缺失了 3´ 磷酸酶活性。
重组 E. coli 菌株,克隆有 T4 多聚核苷酸激酶基因。
达到最佳酶活力,需要新鲜缓冲液(在旧缓冲液中,由于氧化造成的 DTT 含量减少会降低酶活力)。
放射性标记反应:50 μl 反应体系中,用 1X T4 多聚核苷酸激酶反应缓冲液、50 pmol 的 γ-[32P] ATP 和 20 单位的酶 37℃ 温育 30 分钟可催化 1-50 pmol 的 5´ 末端磷酸化。[33P] ATP 可代替 [32P] ATP 作标记反应。
CTP、GTP、TTP、UTP、dATP 及 dTTP 均可替代 ATP 作为磷酸供体。
DNA 或 RNA 磷酸化反应(放射性和非放射性)操作流程请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。
要提高平齐末端或 5´ 凹陷末端的磷酸化效率,可在加入 T4 多聚核苷酸激酶前,先将 DNA 溶液于 70℃ 加热 5 分钟,然后冰上冷却,并加入 5%(w/v)的 PEG-8,000。
T4 多聚核苷酸激酶需要 ATP 才能发挥活性,但是为了适用于高活力的放射性标记反应,在随酶提供的反应缓冲液中不含 ATP。
T4 多聚核苷酸激酶经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。
1 单位即 1 个 Richardson 单位,指 37℃条件下,30 分钟内催化 1 nmol 酸不溶性 [32P] 掺入所需要的酶量(1)。
10,000 units/ml。
关于该酶性质和产品应用的上海金畔生物科技有限公司官网,NEB代理,订购热线:18301939375。
携带 T4 RNA 连接酶 1 基因的 E. coli 菌株。
pCp 的连接需要加入终浓度为10%(v/v)的 DMSO。
10,000 或 30,000 units/ml。
10,000 units/ml。
200,000 units/ml。
无核酸内切酶、核酸外切酶污染
50,000 units/ml。
无核酸内切酶和核酸外切酶污染。
2,000 units/ml。
无核酸内切酶和外切酶污染。
5,000 units/ml。
5,000 units/ml。
与 0.1% SDS 一起温育足以失活 RNase HII。
请注意:该产品已停产,库存售完为止,替代产品为M0525
DNA 和 RNA 的去磷酸化
小牛肠碱性磷酸酶(CIP)催化 DNA 和 RNA 5´ 和 3´ 磷酸单脂的去磷酸化反应。另外,CIP 水解核糖和脱氧核糖核苷三磷酸(NTP 和 dNTP)。CIP 在分子生物学研究中应用广泛,如去除 DNA 和 RNA 末端的磷酸基团,用于后续的克隆和探针末端标记。在克隆中,对线性载体去磷酸化,防止自连。该酶可以作用于 5´ 突出端、凹陷端和平末端。CIP 也可以用来降解 PCR 反应中的游离 dNTP,用于制备测序模板和 SNP 分析。
小牛肠粘膜。
小牛肠碱性磷酸酶(CIP)经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。
1 单位指在 1 ml 反应体系中,37℃ 条件下,1 分钟催化 1 μmol 的对硝基苯磷酸盐(PNPP)水解成对硝基苯酚所需的酶量。
10,000 units/ml。
关于该酶性质和产品应用的上海金畔生物科技有限公司官网,NEB代理,订购热线:18301939375。
无核酸内切酶、核酸外切酶污染。
5,000 units/ml。
5´ 去腺苷化酶是由酿酒酵母(S. cerevisiae)的 HNT3基因编码。 NEB 研究显示该蛋白能从 DNA 和 RNA的 5´ 末端去腺苷化,余下 5´ 末端磷酸。它也能切割 AppppA 生成 ATP 和 AMP。未检测出其对 lysylAMP 有作用。
50,000 units/ml。
通用 miRNA 克隆接头
T4 Rnl2tr KQ 是 T4 RNA 连接酶 2,截短型(NEB#M0242)的双点突变体。 K227 的突变降低了赖氨酰腺苷化。由于降低了 T4 Rnl2tr 从接头将腺苷基团转移到 RNA 5´ 磷酸基的活性, K227Q 可以减少 T4 Rnl2tr 非特异性的连接(串联体和环)。在 T4 Rnl2tr K227Q 中进一步突变 R55K,提高了酶的连接活性,使其与野生型 T4 Rnl2tr 连接活性水平一致。
因为不再使用 ATP,而改用预腺苷化接头,同时降低赖氨酰腺苷化酶的活性,所以连接反应的背景可以降至最低。该酶已用于二代测序 Small RNA的文库构建中,优化了接头的连接过程。
200,000 units/ml。
纯化自携带有 RppH 基因的 E. coli 菌株。
10X NEBuffer 2。
5,000 units/ml。
T4 Rnl2tr KQ 是 T4 RNA 连接酶 2,截短型(NEB#M0242)的双点突变体。 K227 的突变降低了赖氨酰腺苷化。由于降低了 T4 Rnl2tr 从接头将腺苷基团转移到 RNA 5´ 磷酸基的活性, K227Q 可以减少 T4 Rnl2tr 非特异性的连接(串联体和环)。在 T4 Rnl2tr K227Q 中进一步突变 R55K,提高了酶的连接活性,使其与野生型 T4 Rnl2tr 连接活性水平一致。
因为不再使用 ATP,而改用预腺苷化接头,同时降低赖氨酰腺苷化酶的活性,所以连接反应的背景可以降至最低。该酶已用于二代测序 Small RNA的文库构建中,优化了接头的连接过程。
重组 E. coli 菌株,携带有 MBP 融合表达的质粒,该质粒克隆有含编码 T4 RNA 连接酶 2 的前249 个氨基酸序列。 T4 Rnl2tr K227Q 是将 227 位的赖氨酸突变为谷氨酸。 T4 Rnl2tr KQ 分别在 55 和 位置进行了突变,精氨酸突变为赖氨酸、赖氨酸突变为谷氨酰胺。
10X T4 RNA 连接酶反应缓冲液
50% PEG 8000
无单链和双链 DNA 核酸内切酶、外切酶、 RNase 以及磷酸酶的污染。
200 单位指 10 μl 反应体系中,25℃ 条件下,1 小时能将 80% 的 31-mer RNA 连接到预腺苷化 17-mer DNA 末端 [miRNA 通用克隆接头(NEB #S1315)] 所需的酶量。单位活性检测条件请登陆 www.neb-china.com 或 www.neb.com。
200,000 units/ml。
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催化 3´ →5´ 磷酸二酯键的形成,使核苷酸的 5´ -磷酸末端和 3´ -羟基末端连接,伴随着 ATP 水解为 AMP 和 PPi。作用底物包括单链 RNA、DNA 及二核苷焦磷酸。
携带 T4 RNA 连接酶 1 基因的 E. coli 菌株。
pCp 的连接需要加入终浓度为10%(v/v)的 DMSO。
10X T4 RNA 连接酶反应缓冲液
10 mM ATP(NEB #M0204中包含)或 100 mM ATP(NEB #M0437中包含)50% PEG 8000
无单链 DNA 核酸外切酶、核酸内切酶、RNase 和磷酸酶污染。
1 单位指 37℃ 条件下,30 分钟内将 1 nmol 的 5´ -[32P] rA16 转化成磷酸盐不溶物所需要的酶量。
10,000 或 30,000 units/ml。
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连接单链 RNA 或单链 DNA 的 3´ -磷酸基团或 2´ ,3´ -环磷酸基团连接到单链 RNA 的 5´ -羟基上
含有匹配末端的单链 RNA 环化
来源于 E. coli 的 RtcB 连接酶能将单链线性RNA 分子中的 3´ -磷酸基或 2´ , 3´ -环磷酸基团与另一个 RNA 分子的 5´ -羟基进行连接。连接反应需有 GTP 和 MnCl2 的参与,并在反应过程中会形成反应中间体-鸟苷酸。如底物末端含有 2´ , 3´ -环磷酸基团,需先行水解成 3´ -磷酸基,然后再通过 GMP 进行 3´ 末端活化和连接。
重组 E. coli 菌株,携带有 His 标签的 RtcB 连接酶基因。
1X RtcB 反应缓冲液 [50 mM Tris-HCl (pH8.3 @ 2℃), 75 mM KCl, 3 mM MgCl2, 10 mM DTT],补加0.1 mM GTP 和 1 mM MnCl2。 37℃ 温育。
无单链和双链 DNA 核酸内切酶、外切酶、 RNase 以及磷酸酶的污染。
15 μM
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耐热 RNaseH 特异性识别并切割 RNA-DNA 杂交体中 RNA 序列的磷酸二酯键,同时保持DNA 序列完整。这种热稳定的核酸酶具有与大肠杆菌 RNaseH 相同的酶学性质,但在更高的温度下具有活性。
Sce PUS1 用于在体外将单链 RNA 中尿嘧啶转化为假尿嘧啶
Sce PUS1 是一款独立的酶,不需要 RNA 向导或辅助因子即可修饰 RNA
使用 Sce PUS1 对特定序列进行假尿苷修饰可以替代通过 RNA 聚合酶随机掺入修饰核苷酸的方法
该酶是创新酶(Enzyme for Innovation, EFI)。创新酶工程由 NEB 发起,旨在为科研界提供独一无二的酶,从而为新的创新应用的发现创造条件。这些酶均具有独特的功能和特性。
Sce 假尿嘧啶合成酶 I(Sce PUS1)可将单链 RNA 中尿嘧啶转化为假尿嘧啶,对单链 RNA 中尿嘧啶的转化率高于双链 RNA。最佳底物为≥15 nt无特殊结构的 RNA。
NudC 是 NUDIX 焦磷酸酶家族中的一员,可高效水解带 NAD+ 帽 和 NADH 帽的 RNA,生成连接可用的带 5′ 单磷酸末端的 RNA(NAD+ 脱帽或去除 NAD)(1)。研究表明:nudC 基因的缺失增加了大肠杆菌中 NAD+ 帽化 RNA 的比例(2)。
1. Frick D.N. and Bessman M.J. (1995). J. Biol. Chem. 270, 1529-1534.
2. Cahová, H. et al. (2015). Nature. 519, 374-377.
3. Höfer K. et al. (2016). Nat Chem Biol. 12, 730-734.
4. Vvedenskaya I.O., et al (2018). Mol Cell. 70, 553-564.e9.
无核酸内切酶、核酸外切酶和 RNase 污染。
40,000 units/ml。
携带有鼠源 RNase 抑制剂基因的 E. coli 菌株。
无核酸内切酶、核酸外切酶和 RNase 污染。
40,000 units/ml。
氧钒核糖核苷复合物是通过 Berger 改良方法将四种 rNTP 的等摩尔混合物与氧化钒 IV 混合而成(1)。每一批复合物都要经过氧化钒 V 成分以及 RNase 活性抑制的检测。
该产品已停产,推荐替代产品为 NEBNext Ultra II RNA 文库制备试剂盒(NEB#E7760)或 NEBNext Ultra II RNA 文库制备试剂盒 – 含纯化磁珠(NEB#E7770)。
– RNA Sample Preparation
– Second Strand Synthesis of cDNA
The NEBNext Ultra II Non-Directional RNA Second Strand Synthesis Module has been optimized to generate double-stranded cDNA from first-strand cDNA, as part of the NEBNext non-directional RNA library preparation workflow.
The NEBNext Ultra II Non-Directional RNA Second Strand Synthesis Module is Designed for Use with the
Following:
– NEBNext Ultra II RNA First Strand Synthesis Module (NEB #E7771)
– NEBNext Ultra II End Repair/dA-Tailing Module (NEB #E7546)
– NEBNext Ultra II Ligation Module (NEB #E7595)
– NEBNext Ultra™ II Q5® Master Mix (NEB #M0544)
– NEBNext® Oligos for Illumina® (NEB #E7335, #E7500, #E7710, #E7730, #E6609, #E7600,
#E7535, #E7350)
NEBNext® Second Strand Synthesis Enzyme Mix
NEBNext® Second Strand Synthesis Reaction Buffer
The NEBNext® Magnesium RNA Fragmentation Module has been optimized to fragment RNA into small
pieces by incubation with Magnesium ions at 94˚C. Fragment size is controlled by incubation time (Figure 1), and the reaction is ended by the addition of NEBNext Fragmentation Stop Solution.
NEBNext® RNA Fragmentation Buffer
NEBNext RNA Fragmentation Stop Solution
NEBNext Small RNA 多样本文库制备试剂盒 2
ssDNA 接头腺苷酸化的客户,请选用 5´ DNA 腺苷化试剂盒
NEBNext Small RNA 多样本文库制备试剂盒 1
NEBNext Small RNA 多样本文库制备试剂盒 2
ssDNA 接头腺苷酸化的客户,请选用 5´ DNA 腺苷化试剂盒
每个试剂盒都通过对基因组 DNA、ChIP DNA 和 mRNA 进行文库构建,并在 Illumina 平台测序进行验证。
提高连接效率
极大降低接头二聚体
增加文库产量
增加样品识别特异性 (双端检索)
大量单端检索/可用检索
提供检索表和样本示例表
每个试剂盒都通过对基因组 DNA、ChIP DNA 和 mRNA 进行文库构建,并在 Illumina 平台测序进行验证。
– Accurate retention of transcript strand of origin information
– Utilizes dUTP-based methodology
– Low input amounts (as low as 10ng purified mRNA or ribosomal-depleted RNA, or 100ng Total RNA)
– Fast workflow (4.5 – 5 hours), with minimal hands-on time
– Robust, reliable performance
– Ultra high fidelity amplification with minimized GC bias
The NEBNext® Ultra™ Directional RNA Library Prep Kit for Illumina® contains reagents for preparation of strand-specific RNA libraries for Illumina sequencing. Please note that adaptors, primers, rRNA depletion
reagents and poly(A) mRNA isolation reagents are not included in the kit and are available separately.
Ultra Directional RNA Library Preparation for Illumina
NEBNext Poly(A) mRNA 磁性分离模块可以从分离的总 RNA 中提取完整的 poly(A)+ RNA。这个技术的原理是将 Oligod(T)25 与 1 μm 顺磁性磁珠偶联后,以此为固相支持物直接结合 poly(A)+ RNA。利用此方法可以进行多个样本的分离,也适用于自动化高通量分离。此外,磁性分离技术可得到较小体积的完整 RNA 洗脱液,不需要再从洗脱液中沉淀 poly(A)+ RNA。因此在 1 小时内就能分离得到体现原始样品中 mRNA分布特性的完整 poly(A)+ RNA。
每个试剂盒都通过对基因组 DNA、ChIP DNA 和 mRNA 进行文库构建,并在 Illumina 平台测序进行验证。
– Low input amounts (as low as 10ng total RNA, purified mRNA or ribosomal-depleted RNA)
– Fast workflow (5 – 5.5 hours), with minimal hands-on time
– Robust, reliable performance
– Ultra high fidelity amplification with minimized GC bias
The NEBNext® Ultra™ RNA Library Prep Kit for Illumina® contains reagents for preparation of non-directional RNA libraries for Illumina sequencing. Please note that adaptors, primers, rRNA depletion reagents and poly(A) mRNA isolation reagents are not included in the kit and are available separately.
Ultra Non-directional RNA Library Preparation for Illumina
ssDNA 接头腺苷酸化的客户,请选用 5´ DNA 腺苷化试剂盒
每个试剂盒都通过对基因组 DNA、ChIP DNA 和 mRNA 进行文库构建,并在 Illumina 平台测序进行验证。
NEBNext Ultra II RNA 定向文库制备试剂盒
NEBNext Ultra II RNA 定向文库制备试剂盒 – 含纯化磁珠
NEBNext Ultra II RNA 文库制备试剂盒
NEBNext Ultra II RNA 文库制备试剂盒 – 含纯化磁珠
在您的 RNA 测序实验中,是否对灵敏度和特异性有更高的要求?您的测序反应中是否有起始 RNA样本量非常低的情况?为了应对这些挑战,我们的二代测序 RNA 文库制备试剂盒在流程的每一步上都进行了配方的优化,使文库产量得到成倍的增长、起始样本量要求更低、PCR 循环数更少。这些试剂盒工作流程经过改进,更加适合于自动化操作。既有定向(链特异性,使用“dUTP 方法”)文库制备,又有非定向文库制备,还可提供 SPRISelect 磁珠进行片段筛选和纯化。
NEBNext Ultra II RNA 定向文库制备试剂盒
NEBNext Ultra II RNA 定向文库制备试剂盒 – 含纯化磁珠
NEBNext Ultra II RNA 文库制备试剂盒
NEBNext Ultra II RNA 文库制备试剂盒 – 含纯化磁珠
在您的 RNA 测序实验中,是否对灵敏度和特异性有更高的要求?您的测序反应中是否有起始 RNA样本量非常低的情况?为了应对这些挑战,我们的二代测序 RNA 文库制备试剂盒在流程的每一步上都进行了配方的优化,使文库产量得到成倍的增长、起始样本量要求更低、PCR 循环数更少。这些试剂盒工作流程经过改进,更加适合于自动化操作。既有定向(链特异性,使用“dUTP 方法”)文库制备,又有非定向文库制备,还可提供 SPRISelect 磁珠进行片段筛选和纯化。
在免疫沉淀实验流程中富集经 m6A修饰的 RNA
经富集的 RNA 可直接用于 NGS 或RT-qPCR
有关该产品特性和应用的上海金畔生物科技有限公司官网,NEB代理,订购热线:18301939375。
N6-甲基腺苷抗体是由 Cell Signaling Technology, Inc.生产,由 New England Bio-labs, Inc. 销售。
产品于 2020年 1 月 2 日停产.
67 kDa。
10,000 units/ml。
产品于 2020 年 3 月 31 日停产。纯化带有 poly A 的mRNA 时,建议替代产品为:Oligo d(T)25 磁珠(NEB#S1419S); NGS 应用时,建议替代产品为:NEBNext Poly(A) mRNA 磁性分离模块(NEB#E7490)。
> 400 A260 units/g。
96 孔微孔板磁性分离架
1 μm 的无孔超顺磁性微粒。
1 mg Oligo d(T)25 磁珠能结合 10 μg poly(A)+ RNA。
有关该产品特性和应用的上海金畔生物科技有限公司官网,NEB代理,订购热线:18301939375。
直径 1 μm 的无孔超顺磁性微粒。
6 孔磁性分离架
#S1506S 6 孔 (1.5 ml)
12 孔磁性分离架
#S1509S 12 孔 (1.5 ml)
NEB 的 mRNA 磁性分离试剂盒可用于从细胞或组织中分离完整的 poly(A)+ RNA,此过程不需要酚和其它有机溶剂。该技术的原理是将 Oligo d(T)25 与 1 μm 顺磁性磁珠耦联后,以此为固相支持物直接结合 poly(A)+ RNA。利用此方法可以进行多个样本的分离,也适用于自动化高通量分离。此外,磁性分离技术可得到较小体积的完整 RNA 洗脱液,不需要再从洗脱液中沉淀 poly(A)+ 转录物。因此在 1 小时内就能分离得到体现原始样品中 mRNA 分布特性的完整 poly(A)+ RNA。Oligo d(T)25 磁珠可再生 3 次,实验者可选择将分离到的 mRNA 洗脱下来或直接以结合于 mRNA 上的 dT DNA 为引物来进行 cDNA 第一链合成。
产品于 2020 年 3 月 31 日停产。纯化带有 poly A 的mRNA 时,建议替代产品为:Oligo d(T)25 磁珠(NEB#S1419S); NGS 应用时,建议替代产品为:NEBNext Poly(A) mRNA 磁性分离模块(NEB#E7490)。
NEB 提供 17-9,000 个碱基的一系列 RNA Marker 和Ladder。ssRNA Ladder 作为 RNA 分子量标准适用于变性或非变性胶,两种 ssRNA Ladder 均随产品附带 2X 上样缓冲液,并提供双倍浓度的片段作为参考条带。microRNA Marker 为即用型,溶于变性缓冲液中,是聚丙烯酰胺凝胶或 Northern blot 中分子量 marker 的最佳选择,用 SYBR-Gold(Molecular Probes 公司)染色可获得最佳效果,同时附带的还有 3´ 生物素标记的 21-mer 寡核苷酸探针,它同样可被 [γ-32P] ATP 和 T4 PNK 标记(NEB #M0201)。dsRNA Ladder 在非变性聚丙烯酰胺和琼脂糖凝胶电泳中均适合作为 dsRNA 和 RNAi 分析的分子量标准。
低分子量 ssRNA Ladder 和 dsRNA Ladder 的浓度均为 500 μg/ml;ssRNA Ladder 的浓度为 2,000 μg/ml;MicroRNA Marker 浓度为 12 ng/μl。
NEB 提供分子量大小从 17-9,000 个碱基的一系列 RNA Ladders 和 Markers。低分子量 ssRNA Ladder 适用于变性和非变性凝胶电泳中 RNA 分子量标准。两种 ssRNA Ladder 均提供 2X 上样缓冲液,亮度加倍的条带可作为参照带。microRNA Marker 已溶于即用型变性上样液中,可用作变性聚丙烯酰胺凝胶和 Northern 杂交中分子量标准,使用 SYBR-Gold 染料染色效果最佳。随 Marker 提供 3´ – 生物素标记的 21-mer 寡核苷酸探针,可以用 γ-32P- ATP 和 T4 PNK 标记(NEB #M0201)进行标记。dsRNA Ladder 适用于变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖电泳,作为 dsRNA 和 RNAi 分析的分子量标准。
低分子量 ssRNA Ladder 和 dsRNA Ladder 的浓度均为 500 μg/ml;ssRNA Ladder 的浓度为 2,000 μg/ml;MicroRNA Marker 浓度为 12 ng/μl。
NEB 提供 17-9,000 个碱基的一系列 RNA Marker 和Ladder。ssRNA Ladder 作为 RNA 分子量标准适用于变性或非变性胶,两种 ssRNA Ladder 均随产品附带 2X 上样缓冲液,并提供双倍浓度的片段作为参考条带。microRNA Marker 为即用型,溶于变性缓冲液中,是聚丙烯酰胺凝胶或 Northern blot 中分子量 marker 的最佳选择,用 SYBR-Gold(Molecular Probes 公司)染色可获得最佳效果,同时附带的还有 3´ 生物素标记的 21-mer 寡核苷酸探针,它同样可被 [γ-32P] ATP 和 T4 PNK 标记(NEB #M0201)。dsRNA Ladder 在非变性聚丙烯酰胺和琼脂糖凝胶电泳中均适合作为 dsRNA 和 RNAi 分析的分子量标准。
低分子量 ssRNA Ladder 和 dsRNA Ladder 的浓度为 500 μg/ml;ssRNA Ladder 的浓度为 2,000 ug/ml;MicroRNA Marker 浓度为 12 ng/μl。
T4 RNA 连接酶 2,截短型 KQ
(1) Lau et al. (2001) Science, 294, 858–856.
产品名称 | RNA清洁珠 |
---|---|
英文名称 | RNA Clean Beads |
运输条件 | 冰袋运输 |
产品描述
该磁珠适用于RNA片段快速分选和回收。磁珠经过磁性分离和乙醇清洗,低盐洗脱缓冲液或无核酸酶水洗脱的高纯度RNA片段不含有核苷酸、引物、酶和盐等污染物,可被直接用于下游应用,例如:测序、杂交、RT-PCR反应等,并可应用于手动或自动液体操作设备。
产品特点
1、回收率可达80%以上;
2、操作快速简单,20min即可完成整个操作流程,无需离心。
使用建议
1. RNA回收效率低或者没有?
1)RNA发生降解。操作过程要严格的确保无RNase的污染。
2)样本质量低。
3)洗脱效率低。80%乙醇需现用现配,放置时间过久,可能由于乙醇挥发,造成浓度降低,影响洗脱效果;
4)洗脱溶液孵育时间过短。磁珠应于洗脱液中按规定时间孵育,常规为5 min;
5)磁珠过度干燥。切勿室温干燥磁珠大于10 min,过度干燥将降低洗脱效率。
2. 纯化RNA中有磁珠残留?
1)磁珠分离时间过短或磁力器磁力较弱。增加分离时间或选用磁力强的磁力器,确保磁珠被磁力器全部吸附;
2)洗脱步骤中,吸取上清速度过快。缓慢吸取上清,注意切勿吸取磁珠。
3. 如何检测回收后RNA的纯度?
可以通过测定A260/A280的比值来评估。
保存条件
4℃保存。
Product Description
The magnetic beads are suitable for rapid sorting and recovery of RNA fragments. Magnetic beads are magnetically separated and washed with ethanol. The high-purity RNA fragments eluted with low-salt elution buffer or nuclease-free water do not contain contaminants such as nucleotides, primers, enzymes, and salts, and can be directly used in downstream applications. For example: sequencing, hybridization, RT-PCR reaction, etc., and can be applied to manual or automatic liquid handling equipment.
Features
1. The recovery rate can reach more than 80%;
2. The operation is fast and simple, and the entire operation process can be completed in 20 minutes without centrifugation.
Recommendations
1. Inefficient or no RNA recovery?
1) RNA is degraded. The operation process should be strictly ensured that there is no RNase contamination.
2) The sample quality is low.
3) The elution efficiency is low. 80% ethanol needs to be used and prepared immediately. If it is stored for a long time, the concentration may decrease due to the volatilization of ethanol, which will affect the elution effect;
4) The incubation time of the elution solution is too short. The magnetic beads should be incubated in the eluent for a specified time, usually 5 min;
5) Magnetic beads are over-dried. Do not dry the beads at room temperature for more than 10 minutes, as excessive drying will reduce the elution efficiency.
2. Are there magnetic beads remaining in the purified RNA?
1) The separation time of the magnetic beads is too short or the magnetic force of the magnetizer is weak. Increase the separation time or choose a magnetizer with strong magnetic force to ensure that the magnetic beads are all adsorbed by the magnetizer;
2) During the elution step, the supernatant was aspirated too fast. Aspirate the supernatant slowly, taking care not to aspirate the beads.
3. How to check the purity of recovered RNA?
It can be assessed by measuring the ratio of A260/A280.
Storage Conditions
Store at 4°C.
储存温度 | 2-8°C储存 |
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品牌 | 金畔生物 |
Ribonuclease A (RNase A) from Bovine Pancreas
核糖核酸酶A,来源于牛胰腺
Ribonuclease 3’-pyrimidinooligonucleotidohydrolase 核糖核酸3′-嘧啶寡核苷酸水解酶; Ribonuclease I 核糖核酸酶 I;Pancreatic ribonuclease胰核糖核酸酶;Ribonuclease A (RNase A) from Bovine Pancreas;EC No: 3.1.27.5;CAS NO:9001-99-4;
产品描述
核糖核酸酶A,英文名Ribonuclease A,缩写RNase A,常常用在质粒DNA或基因组DNA制备过程中去除RNA,此制备过程中DNase酶活性的存在与否是需要重视的污染之一,可采用水浴煮沸这种传统方法来灭活DNase活性。也可以用来去除蛋白样品中的RNA污染。另外,RNase A还可用于RNA序列分析,RNA酶保护分析等实验。
产品特性
保存与运输方法
保存:-20℃干燥冻存,3年稳定。
运输:冰袋运输。
使用方法
【注意】:此为RNase A储存液配制的常用方法之一,也可以根据实验室传统的方法,或者参考文献资料使
用其他方法制备储存液(如直接溶于10mM Tris-HCl, pH 7.4)。
【注意】:在中性条件下煮沸RNase A溶液,会有RNase沉淀形成;在更低的pH下将其煮沸,如有沉淀可以观察到,可能由于蛋白杂质存在造成。煮沸之后若发现沉淀,可通过高速离心(13,000 rpm)去除杂质,然后分装冻存。
【注意】:本品应用非常广泛,具体的使用方法和工作浓度请根据实验经验或参考文献来调整。
RNase A常用在质粒DNA制备中去除RNA污染,在此应用中,可直接加入DNase-free RNase A储存液,使其终浓度为10μg/ml。
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格 |
Ribonuclease A (RNase A) from Bovine Pancreas 核糖核酸酶A,来源于牛胰腺 | MF0203-100MG | 100mg | -20ºC | 340 |
MF0203-500MG | 500mg | -20ºC | 1450 | |
MF0203-1000MG | 1g | -20ºC | 2300 |
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Pronase E 链霉蛋白酶E | MF0206-100MG | 100mg | -20ºC | 300 |
Pronase E 链霉蛋白酶E | MF0206-250MG | 250mg | -20ºC | 650 |
Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas 脱氧核糖核酸酶I,来源于牛胰腺 | MF0401-15KU | 15KU | -20ºC | 380 |
Proteinase K, Molecular Biology Grade
蛋白酶K |
MF0201-100MG | 100mg | +4ºC | 165 |
MF0201-500MG | 500mg | +4ºC | 700 | |
MF0201-1000MG | 1g | +4ºC | 1200 |
注意事项
Ribonuclease A (RNase A) 核糖核
Ribonuclease A (RNase A) 核糖核