NEB代理,RNA 试剂,cDNA 合成,ProtoScript® II cDNA 第一链合成试剂盒

产品资料 – RNA 试剂 – cDNA 合成

ProtoScript^® II cDNA 第一链合成试剂盒

#E6560L 150 次反应

#E6560S 30 次反应

特性

 提供酶混合液与反应混合液，建立反应更加便捷

 适合各种需求的 PCR

 不同起始量的 RNA 都能高效反转录

 合成至少 10 kb 长度的 cDNA
 2 管装混合液方便使用

概述

ProtoScript II cDNA 第一链合成试剂盒含有两种经过优化的混合液，ProtoScript II 酶混合液与 ProtoScript II 反应混合液。酶混合液含 ProtoScript II 反转录酶和小鼠 RNase 抑制剂；反应混合液含 dNTPs 与经过优化的缓冲液。ProtoScript II 反转录酶是重组的 M-MuLV 反转录酶，降低了 RNase H 活性且提高了热稳定性。与野生型 M-MuLV 反转录酶相比，ProtoScript II 可在更高的温度下合成第一链 cDNA。该酶活性温度高达50℃，且具有特异性高、cDNA 产量高的特点。

该试剂盒还提供两种优化的反转录引物和无核酸酶污染的水。Oligo-dT 引物 [d(T)₂₃VN] 能与 polyA 尾的起始端退火；优化的随机引物混合液能随机并持续性的与整个 RNA 模板配对，包括 mRNA 和无 poly A 尾的 RNA。第一链 cDNA 合成长度可达 10 kb。

ProtoScript II cDNA 第一链合成试剂盒组份

– 10X ProtoScript II 酶混合液

– 2X ProtoScript II 反应混合液

– 随机引物混合液（60 μM）、Oligo d(T)₂₃VN 引物（50 μM）**、无核酸酶污染的水

**Oligo d(T)₂₃ VN 和随机引物混合液包含 1 mM dNTP
如需稳定扩增不同种类的 DNA 模板，推荐使用 OneTaq^® DNA 聚合酶或 Q5^® 超保真 DNA 聚合酶。

NEB代理,RNA 试剂,cDNA 合成,M-MulV 反转录酶,#M0253L

产品资料 – RNA 试剂 – cDNA 合成

M-MulV 反转录酶

#M0253L 50,000 units

#M0253S 10,000 units

特性

 合成 cDNA

 RNA 测序
 RT-PCR

概述

莫洛尼氏鼠白血病病毒（M-MuLV）反转录酶是一种 RNA 介导的 DNA 聚合酶。该酶能以 RNA（合成 cDNA 时）或单链 DNA 做模板由引物起始合成一条互补的 DNA。M-MuLV 反转录酶无 3´→5´ 核酸外切酶活性。

来源

重组 E. coli 菌株，携带有从 M-MuLV 中克隆的反转录酶基因。

反应条件

1X M-MuLV 反转录酶反应缓冲液

[50 mM Tris-HCl (pH 8.3 @ 25℃)，75 mM KCl，3 mM MgCl₂，10 mM DTT]，加入 dNTPs（不随酶提供），37-42℃ 温育。
热失活：65℃ 20 分钟。

质保声明

无核酸内切酶、外切酶和 RNase 污染。

单位定义

1 单位指以 poly(rA) 为模板、oligo(dT) 为引物，在 37℃ 条件下，10 分钟内催化 1 nmol 的 dTTP 掺入形成酸不溶性沉淀物所需要的酶量。

浓度

200,000 units/ml。

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NEB代理,RNA 试剂,cDNA 合成,AMV 反转录酶 #M0277L

产品资料 – RNA 试剂 – cDNA 合成

AMV 反转录酶

#M0277L 1,000 units

#M0277S 200 units

特性

 合成 cDNA

 RNA 测序
 RT-PCR

概述

禽骨髓母细胞瘤病毒（AMV）反转录酶是一种 RNA 介导的 DNA 聚合酶。该酶能以 RNA（合成 cDNA 时）或单链 DNA 为模板从引物开始合成互补的 DNA 链。

来源

禽骨髓母细胞瘤病毒（AMV）。

反应条件

1X AMV 反转录酶反应缓冲液

[50 mM Tris-acetate (pH 8.3 @ 25℃)，75 mM KOAc，8 mM Mg(OAc)₂，10 mM DTT]，加入 dNTPs（不随酶提供），37-42℃ 温育。

质保声明

无核酸内、外切酶和 RNase 污染。

单位定义

1 单位指以 poly(rA) 为模板，oligo(dT) 为引物，37℃ 条件下，10 分钟内催化 1 nmol 的 dTTP 掺入酸不溶性沉淀物中所需要的酶量。

浓度

10,000 units/ml。

贮存注意

解冻后，请立即贮存于-20℃。反复冻融会导致酶失活。长时间贮存可分装后置于 -70℃。

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NEB代理,RNA 试剂,cDNA 合成,

产品资料 – RNA 试剂 – cDNA 合成

ProtoScript® II 反转录酶

#M0368L10,000 units

#M0368S4,000 units

#M0368X40,000 units

特性

 不同起始量的 RNA 均能高效反转录

 提高热稳定性
 合成至少 10 kb 长度的 cDNA

概述

ProtoScript II 反转录酶是一种重组的 M-MuLV 反转录酶，其 RNase H 酶活性降低且热稳定性增加。与野生型 M-MuLV 反转录酶相比， ProtoScript II 可在更高的温度下合成第一链 cDNA。 ProtoScript II 活性温度高达 50℃，且具有特异性高、产量高和合成 cDNA更长的特点，合成 cDNA长度可达 12 kb。本产品曾用名为 M-MuLV 反转录酶（RNase H^–）。

来源

来自重组 E. coli 菌株，携带有突变的 MMuLV 反转录酶（RNase H^–）编码基因，经高度纯化而获得。

反应条件

1X ProtoScript II 反转录酶反应缓冲液

[50 mM Tris-HCl (pH 8.3 @ 25℃)，75 mM KCl，3 mM MgCl₂]，10 mM DTT，200 units ProtoScript II ，0.5 mM dNTPs（不随酶提供）和 5 μM dT₂₃VN（不随酶提供），42℃ 温育 50 分钟。如果使用随机引物建议在室温放置 10 分钟后再进行 42℃ 反应。
热失活：65℃ 20 分钟。

质保声明

通过 RT-PCR 验证，以总 RNA 为模板可合成 9.2 kb 的 cDNA。

单位定义

1 单位指在 50 μl 反应体系中，以 poly(rA) 为模板，以 oligo(dT)₁₈ 为引物，37℃ 条件下，10 分钟内催化 1 nmol 的 dTTP 掺入形成酸不溶性沉淀物所需要的酶量。

浓度

200,000 units/ml。

NEB代理,RNA 试剂,cDNA 合成,WarmStart® RTx 反转录酶,#M0380L

产品资料 – RNA 试剂 – cDNA 合成

WarmStart^® RTx 反转录酶

#M0380L 250 次反应

#M0380S 50 次反应

特性

 RT-LAMP

 cDNA 合成
 要求在室温下建立的 RT 反应

概述

WarmStart^® RTx 反转录酶是一种依赖 RNA 的 DNA 聚合酶，它利用核酸适配体技术，通过共价键作用结合到聚合酶上，从而抑制 RTx 在 40℃ 以下的活性。WarmStart RTx 以 RNA（cDNA 合成）或单链 DNA 作为模板合成互补 DNA 链。RTx 酶适用于扩增反应中 RNA 的检测，特别适用于 LAMP（环介导等温扩增）实验。WarmStart 特性是：特别适用于高通量反应，室温下建立反应，并提高扩增反应的一致性和特异性。RTx 反转录酶包含完整的 RNase H 活性。

来源

重组 E. coli 菌株，携带有基因工程改造的 RTx 基因。

反应条件

25 μl 反应体系中包括：1X 等温扩增反应缓冲液、模板、引物、dNTPs 和 0.25-0.5 μl WarmStart RTx 反转录酶，50-55℃ cDNA 合成或者直接 65℃ 进行一步法 RT-LAMP。
热失活：80℃ 10 分钟。

质保声明

无核酸内、外切酶和 RNase 污染。

单位定义

1 单位指 50 μl 反应体系中，以 poly(rA)•oligo(dT)18 为模板，50℃ 条件下，20 分钟内催化 1 nmol 的 dTTP 掺入酸不溶性物中所需要的酶量。

浓度

15,000 units/ml。

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NEB代理 , RNA 试剂 , cDNA 合成

产品资料 – RNA 试剂 – cDNA 合成

模板置换反转录酶混合液

#M0466L 100 reactions

#M0466S 20 reactions

概述

模板置换反转录酶和其相应的反应缓冲液能够在反转录反应中有效地实现模板置换。混合液中含有独特的反转录酶和小鼠 RNase 抑制剂。与竞争对手的反转录酶产品不同，NEB 的产品不需要添加任何添加剂（如 PEG 或甜菜碱）来优化性能，从而简化了反应建立流程。与模板置换寡核苷酸（TSO）搭配使用，合成的 cDNA 3’端可以选择性地加入已知序列。由此获得的 cDNA 可进行 PCR 扩增，也可作为 5’RACE（ cDNA 末端快速扩增）或第二链 cDNA 合成的模板。

特性

 以极低起始量模板（单细胞/细胞核或 2 pg 总 RNA）制备 RNA-seq 文库

 以最低起始量为 10 ng 的总 RNA 进行 5’RACE

 降低 RNA-seq 或 5’RACE 的背景

 该酶混合液包含小鼠 RNase 抑制剂，不需要额外添加

 兼容各种模板置换寡核苷酸（TSOs）、反转录引物和 DNA 聚合酶,用于扩增全长 cDNA

 与其他的 RNA-seq 方法（例如:Smart-Seq）相比，操作更快捷

模板置换反转录酶混合液中的反转录酶（RT）在其到达 RNA 模板的 5’末端后会添加几个非模板源的核苷酸。这几个非模板源的核苷酸可以与已知序列的模板置换寡核苷酸（TSO）退火，促使反转录酶从 RNA 模板上切换到 TSO 上。得到的 cDNA 含有 3’末端添加有已知序列（TSO 的互补序列）。该特征可用于多种下游应用，例如 cDNA 扩增、5’RACE（cDNA 末端快速扩增）和第二链 cDNA 合成。说明书中有优化的实验流程。

图 1：模板置换流程概览

当到达 RNA 模板的 5’端时，反转录酶会在 cDNA 的 3’端添加几个非模板源的核苷酸。这些非模板源的核苷酸可以与包含已知序列的模板置换引物退火,从而促使反转录酶从 RNA 模板上切换到 TSO 上。所得到的 cDNA 在 3′ 端包含一个通用序列（TSO 的互补序列）

图 2：在单细胞 RNA-seq 实验中,模板置换反转录酶混合液相对于 Smart-seq2 方法的优势

gA.模板置换介导的 cDNA 扩增概述。反转录引物含有 5’接头，它与 TSO 一起在 cDNA 的 5’和 3’末端添加接头。之后可用识别接头序列的引物 PCR 扩增全部反转录产物。

B-D.使用 NEB 模板置换反转录酶混合液或 Smart-seq2 方法(Picelli, S. et al.(2014). Nat. Protoc. 9, 171-81)，用 10 μg Universal Human Reference（UHR） RNA （Agilent）与 ERCC RNA Spike-In Mix I（Thermo Fisher Scientific）生成 cDNA 文库。然后使用 NEBNext® Ultra™ II FS DNA 文库制备试剂盒（NEB＃E7805）将每个 cDNA 文库制成 Illumina 文库，并在 Nextseq 500 上使用 2 x 75 个循环测序。将测序采样 2 x 1.2 M 个 reads（除非另有说明），去掉接头 reads，并且使用 Prinseq 过滤。B.显示的是样品总 reads（Total reads）、去掉接头的 reads（Trimmed reads）和通过 Prinseq 过滤的 reads（Filtered reads）。插图列举了每种方法制备的 cDNA 文库的 Agilent Bioanalyzer 2100 结果。虚线框标注了非特异片段。C.使用 Salmon 将过滤的 reads 与 GENCODE 28 和 ERCC 转录物比对。图中的点表示从每个文库检测到的 TPM（每百万转录数）≥1 的转录物的数量作为测序深度。 D.使用 Hisat 2.0.7 将过滤的读数与 hg19 人参考基因组比对，并使用 Picard SAM / BAM RNA Seq Metrics 工具计算 RNA-seq 指标。该图显示了分布于外显子（红色），rRNA（橙色），内含子（绿色），基因间区域（蓝色）的匹配 reads 和不匹配 reads（灰色）的百分比。

图 3：模板置换反转录酶混合液在 5’RACE 的实验中操作简单,性能优异

A.模板置换介导的 5’RACE 概述。在模板置换反转录反应后，用反向基因特异性引物和正向 TSO 特异性引物进行 5’RACE PCR。

B.使用 NEB 模板置换反转录酶混合液 5’RACE 方案（左）或 Clontech SMARTer 5’/3’RACE 试剂盒（右）对多种 RNA 靶标的 5’RACE 产物进行琼脂糖凝胶分析。加入 1 μg 的 Jurkat 总 RNA，10 pg 的 8 kb 合成 RNA 和 10 ng 的 ERCC RNA Mix 1，用于评估作为转录物长度和拷贝数的性能。在 NEB 的反应中，反转录引物为 oligo (dT)40 VN，TSO 为 GCTAATCATTGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTACATrGrGrG，TSO 中特异性 PCR 引物用下划线标注。两种方法使用相同的基因特异性 PCR 引物。靶标名称和预期片段长度如图所示。

图 4：模板置换反转录酶混合液在第二链 cDNA 合成中操作简单，且可捕获完整的 5’末端转录产物

A.模板置换介导的第二链 cDNA 合成概述。在反转录反应后，RNA 模板水解，使用 TSO 作为引物延伸合成第二链 cDNA。

B.使用 1 kb 的合成 RNA 作为模板，使用 poly（dT）40 VN 作为第一链 cDNA 合成的反转录引物。使用模板置换介导的方法或 Gubler 在文献中描述的方法—R and Hoffman,BJ.(1983) Gene,25,263-269，对第二链 cDNA 合成进行三个平行实验。所得到的双链 cDNA 产物使用反向引物用 Sanger 法对第二链 cDNA 进行测序。结果显示模板含有转录起始位点（TSS），并标注出了匹配序列。添加到 cDNA 末端的 TSO 序列用灰色标注。未通过 Gubler 和 Hoffman 方法检测到的序列用蓝色标注。不可信读序区用黄色标注。

随产品提供的试剂

	储存温度(℃)	浓度
模板置换反转录缓冲液	-20	4 X

产品类别：

cDNA合成和反转录产品

PCR，qPCR 和扩增技术产品

应用

Oligo d(N)_n 引物适用于 mRNA 的扩增和测序，能与 mRNA 的 3´ -poly A 尾或带尾的 cDNA 退火。

注意：#S1316 5´ 末端未磷酸化。

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NEB代理,RNA 试剂,RNA 连接酶和修饰酶,T4 RNA 连接酶

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 连接酶和修饰酶

已报道的 T4 RNA 连接酶活性和应用

NEB代理 , RNA 试剂 , RNA 连接酶和修饰酶
表中所描述的连接方法都有过报道，但可能需要进一步优化。

NEB代理,RNA 试剂,RNA 连接酶和修饰酶

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 连接酶和修饰酶

RNA 连接酶选择表

NEB代理 , RNA 试剂 , RNA 连接酶和修饰酶

NEB代理,RNA 试剂,RNA 连接酶和修饰酶,5´ DNA 腺苷化试剂盒,#E2610L

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 连接酶和修饰酶

5´ DNA 腺苷化试剂盒

#E2610L 50 次反应

#E2610S 10 次反应

特性

 酶法对 ssDNA 接头进行 5´ 腺苷化，用于二代测序

 单步反应即可完成定量腺苷化

 比目前其它化学和酶学方法更简便

 产物无需纯化

概述

5´ DNA 腺苷化试剂盒能将 DNA 寡核苷酸 5´端腺苷化，试剂盒操作简便高效，反应需要 Mth RNA 连接酶、 ATP 和 5´ -磷酸化的单链 DNA。试剂盒经过优化，无论序列有无 3´ 端终止子，都能够生成腺苷化的 DNA。通常该试剂盒能将 95% 的 pDNA转化成 AppDNA。高效的转化，使得反应无需进行胶回收提纯步骤，因此可增加总产量。

5′ DNA 腺苷化试剂盒组份

– Mth RNA 连接酶（重组酶）

– 5´ DNA 腺苷化缓冲液（10X）
– 1 mM ATP

质保声明

无核酸内切酶、核酸外切酶污染。

注意事项

该酶转化率低，需要约等量摩尔浓度的酶和底物 DNA 相互作用。在二代测序 cDNA文库构建实验中，预腺苷化 DNA 的连接头可用于 RNA 3´ 末端的连接。

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NEB代理,RNA 试剂,RNA 连接酶和修饰酶,T4 多聚核苷酸激酶T4 PNK,#M0201L

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 连接酶和修饰酶

T4 多聚核苷酸激酶（T4 PNK）

#M0201L 2,500 units

#M0201S 500 units

#M0201V 250 units

特性

 DNA 或 RNA 5´ 末端的磷酸化，以便进行连接反应

 DNA 或 RNA 的末端标记，用作探针和进行 DNA 测序

 用 T4 多聚核苷酸激酶（NEB #M0201）除去 3´ 磷酸基团

 T4 多聚核苷酸激酶（3´ 磷酸酶活性缺失）（NEB #M0236）将 3´ 端已经磷酸化的单核苷酸 5´磷酸化，制备pNp 底物，用于添加到 DNA 或RNA的 3´ 端

 用 T4 多聚核苷酸激酶（3´ 磷酸酶活性缺失）（NEB #M0236）对 3´ 端有磷酸基团的寡核苷酸的 5´ 端进行标记

概述

T4 多聚核苷酸激酶能够催化 ATP 的 γ-位磷酸基团转移到寡核苷酸链（双链或单链 DNA 或 RNA）的 5´ -羟基末端以及 3´ -单磷酸核苷上。T4 多聚核苷酸激酶（NEB #M0201）还具有 3´ 磷酸酶活性，将 3´ -磷酸基团从寡核苷酸的 3´ 磷酸末端、脱氧 3´ -单磷酸核苷和脱氧 3´ -二磷酸核苷上水解掉。经修饰后的酶（NEB #M0236）具有所有激酶的活性，但是缺失了 3´ 磷酸酶活性。

来源

重组 E. coli 菌株，克隆有 T4 多聚核苷酸激酶基因。

反应条件

1X T4 多聚核苷酸激酶反应缓冲液

[70 mM Tris-HCl（pH 7.6 @ 25℃），10 mM MgCl₂，5 mM DTT]，37℃ 温育。
热失活：65℃ 加热 20 分钟。

注意事项

达到最佳酶活力，需要新鲜缓冲液（在旧缓冲液中，由于氧化造成的 DTT 含量减少会降低酶活力）。

放射性标记反应：50 μl 反应体系中，用 1X T4 多聚核苷酸激酶反应缓冲液、50 pmol 的 γ-[32P] ATP 和 20 单位的酶 37℃ 温育 30 分钟可催化 1-50 pmol 的 5´ 末端磷酸化。[33P] ATP 可代替 [32P] ATP 作标记反应。

CTP、GTP、TTP、UTP、dATP 及 dTTP 均可替代 ATP 作为磷酸供体。

DNA 或 RNA 磷酸化反应（放射性和非放射性）操作流程请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。

要提高平齐末端或 5´ 凹陷末端的磷酸化效率，可在加入 T4 多聚核苷酸激酶前，先将 DNA 溶液于 70℃ 加热 5 分钟，然后冰上冷却，并加入 5%（w/v）的 PEG-8,000。

T4 多聚核苷酸激酶需要 ATP 才能发挥活性，但是为了适用于高活力的放射性标记反应，在随酶提供的反应缓冲液中不含 ATP。

一般来说，进行激酶反应之后是连接反应。在这种情况下，T4 多聚核苷酸激酶反应在连接酶反应缓冲液中 37℃ 温育 30 分钟即可。反应后的产物可直接进行连接，无需改变缓冲液和进行热失活。如果连接时需要保持其它 DNA 片段的去磷酸化状态，则需要在连接反应前热失活 T4 多聚核苷酸激酶。

质保声明

T4 多聚核苷酸激酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

单位定义

1 单位即 1 个 Richardson 单位，指 37℃条件下，30 分钟内催化 1 nmol 酸不溶性 [³²P] 掺入所需要的酶量（1）。

浓度

10,000 units/ml。

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T4 多聚核苷酸激酶反应

在 50 μl T4 多聚核苷酸激酶反应缓冲液体系中，37℃温育 30 分钟，γ-磷酸基团从 ATP 转移至 d(T)₈的 5´ 羟基末端 [ATP 与 d(T)8 比例是 1:1，量为 50 pmol]，结果显示 20 单位酶量可使超过 90% 的磷酸基团转移。

NEB代理,RNA 试剂,RNA 连接酶和修饰酶,#M0204L T4 RNA 连接酶1,ssRNA 连接酶

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 连接酶和修饰酶

T4 RNA 连接酶 1（ssRNA 连接酶）

#M0204L 5,000 units

#M0204S 1,000 units

特性

 连接单链 RNA 和 DNA

 用 5´ -[³²P] pCp 进行 RNA 3´ 末端标记

 RNA 和 DNA 分子内及分子间的连接

 合成单链寡脱氧核苷酸
 蛋白质中掺入非天然氨基酸

概述

催化 3´ →5´ 磷酸二酯键的形成，使核苷酸的 5´ -磷酸末端和 3´ -羟基末端连接，伴随着 ATP 水解为 AMP 和 PPi。作用底物包括单链 RNA、DNA 及二核苷焦磷酸。

来源

携带 T4 RNA 连接酶 1 基因的 E. coli 菌株。

反应条件

1X T4 RNA 连接酶反应缓冲液[50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25℃)，10 mM MgCl₂，1 mM DTT]，加入 1 mM ATP，37℃ 温育。热失活：65℃ 15 分钟或煮沸 2 分钟。

使用注意事项

pCp 的连接需要加入终浓度为10%（v/v）的 DMSO。

随酶提供试剂

10X T4 RNA 连接酶反应缓冲液
10 mM ATP（NEB #M0204中包含）或 100 mM

ATP（NEB #M0437中包含）

50% PEG 8000

质保声明

无单链 DNA 核酸外切酶、核酸内切酶、RNase 和磷酸酶污染。

单位定义

1 单位指 37℃ 条件下，30 分钟内将 1 nmol 的 5´ -[³²P] rA16 转化成磷酸盐不溶物所需要的酶量。

浓度

10,000 或 30,000 units/ml。

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#M0239L NEB代理,RNA 试剂,RNA 连接酶和修饰酶,T4 RNA 连接酶2,dsRNA 连接酶,

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 连接酶和修饰酶

T4 RNA 连接酶 2（dsRNA 连接酶）

#M0239L 750 units

#M0239S 150 units

特性

 连接粘性末端接头

 连接双链 RNA 中切刻的最佳选择
 可用于 DNA/RNA 杂交链中，RNA 3´ 羟基与 DNA 5´ 磷酸基的连接

概述

T4 RNA连接酶 2，也被称为 T4 Rnl2（gp24.1），同时具有 RNA 链分子间和分子内连接活性。与 T4 RNA 连接酶 1（NEB #M0204）不同的是， T4 RNA 连接酶 2 对双链 RNA 切刻的连接活性要明显高于对单链 RNA 的末端连接。该酶也可用于连接双链结构中 RNA 3´ 羟基和 DNA 5´ 磷酸基的切刻。

来源

纯化自携带 T4 RNA 连接酶 2 基因的重组 E. coli 菌株。

反应条件

1X T4 RNA 连接酶 2 反应缓冲液[50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25℃)，2mM MgCl₂，1 mM DTT，400 μM ATP]，37℃ 温育。

质保声明

无单链和双链 DNA 核酸内切酶、外切酶、 RNase 以及磷酸酶污染

单位定义

1 单位指 20 μl 反应体系中， 37℃ 条件下， 30 分钟完全连接 0.4 μg 的 23-mer 和 17-mer RNA等摩尔混合物所需的酶量。

浓度

10,000 units/ml。

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NEB代理,RNA 试剂,RNA 连接酶和修饰酶,T4 RNA 连接酶2截短型,#M0242L

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 连接酶和修饰酶

T4 RNA 连接酶 2，截短型

#M0242L 10,000 units

#M0242S 2,000 units

特性

 将预腺苷化的 DNA 或 RNA 序列标签连接到任何 RNA 3´ 末端

 将单链腺苷化引物连接至小 RNA 上，用于 cDNA 文库构建
 将单链腺苷化引物连接至 RNA 上，用于链特异 cDNA 文库构建

概述

T4 RNA 连接酶 2，截短型（T4 Rnl2 截短型）可特异性地将 5´ 端预腺苷化的 DNA 或 RNA连接到 RNA 3´ 末端。该酶连接时不需要 ATP，但需要预腺苷化底物。 T4 Rnl2 截短型的表达来自E. coli 质粒，该质粒编码 T4 RNA 连接酶 2 基因的前 249 个氨基酸。与全长的 T4 RNA 连接酶 2 不同， T4 Rnl2 截短型不能将底物的 5´ 末端腺苷化，因此无法将 RNA 或 DNA 的 5´ 磷酸末端连接到 RNA的 3´ 端。该酶即 Rnl2（1-249），可用于 microRNA 克隆中接头连接的优化，因为此酶只能利用腺苷化的引物，因此可以降低连接背景。

来源

携带 T4 RNA 连接酶 2，截短型基因的重组 E. coli 菌株。

反应条件

1X T4 RNA 连接酶反应缓冲液[50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25℃)，10 mM MgCl₂，1 mM DTT]，25℃ 温育。热失活：65℃ 20 分钟。

随酶提供的试剂

10X T4 RNA 连接酶反应缓冲液
50% PEG 8000

质保声明

无单链和双链 DNA 核酸内切酶、外切酶、 RNase 以及磷酸酶的污染。

单位定义

200 单位指 20 μl 反应体系中， 25℃ 条件下， 1 小时将 80% 的 31-mer RNA 连接到预腺苷化 17-mer DNA 末端[miRNA 通用性克隆接头（NEB#S1315） ]末端所需的酶量。

浓度

200,000 units/ml。

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NEB代理 , RNA 试剂 , RNA 连接酶和修饰酶,RNase If

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 连接酶和修饰酶

RNase If

#M0243L25,000 units

#M0243S5,000 units

特性

 重组酶

 去除 DNA 和蛋白质制备过程中的 RNA

 降解单链 RNA 生成单、二或三核苷酸
 用于核糖核酸酶保护试验

概述

核糖核酸酶 I_f（RNase I_f）是一种 RNA 核酸内切酶，能够切割所有 RNA 二核苷酸键，产生 5´ 羟基和 2´ , 3´ 环状单核苷酸。该酶对单链 RNA 的活性比双链 RNA 高。重组 RNase I_f是 RNase I（来源于E. coli）与麦芽糖结合蛋白的融合蛋白，与野生型RNase I 具有相同活性。

来源

重组 E. coli 菌株，携带来自 E. coli 的 RNase I 基因（rna）及编码麦芽糖结合蛋白（MBP）的基因。

反应条件

1X NEBuffer 3

[100 mM NaCl，50 mM Tris-HCl，10 mM MgCl₂，1 mM DTT (pH 7.9 @ 25℃) ]，37℃ 温育。
热失活：70℃ 20 分钟。

使用注意事项

RNase I_f不能降解 DNA。降解单链 RNA 的能力比降解双链 RNA 的能力强。

质保声明

无核酸内切酶、核酸外切酶污染

单位定义

1 单位指 10 μl 反应体系中，37℃ 条件下，15 分钟完全降解 1 pmol 合成的 33-mer ssRNA 所需的酶量。反应在 1X NEBuffer 3 中进行，20% 丙烯酰胺凝胶电泳（40:1 Bis），SYBR^® Gold 染色后观察结果。

浓度

50,000 units/ml。

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NEB代理 , RNA 试剂 , RNA 连接酶和修饰酶,ShortCut® RNase III,#M0245L

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 连接酶和修饰酶

ShortCut^® RNase III

#M0245L 1,000 units

#M0245S 200 units

特性

 为 RNA 干扰研究提供 siRNA

 基因沉默

 靶标确认
 去除 dsRNAs

概述

ShortCut RNase III 能将较长双链 RNA 切割成一组大小不同的由 18-25 bp 组成的小片段干扰RNA（siRNA），更适合用于哺乳动物细胞的 RNA干扰实验。用 1.5 个单位（1 μl）的 ShortCut RNase III 能够将 1 μg 的 dsRNA 完全切割成 siRNA。

来源

重组 E. coli 菌株，克隆表达融合有麦芽糖结合蛋白（MBP）的 E. coli RNase III 基因（rnc）。

反应条件

1X ShortCut RNase III 反应缓冲液 [50 mM Tris-HCl， 50 mM NaCl， 1 mM DTT（pH 7.5 @ 25℃）]。补加 20 mM MnCl₂（随产品提供），37℃ 温育。

质保声明

无核酸内切酶和核酸外切酶污染。

单位定义

1 单位指 50 μl 的反应体系中，37℃ 条件下，20 分钟将 1 μg dsRNA 切割成 siRNA 所需要的酶量。

浓度

2,000 units/ml。

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ShortCut RNase III 的优势

 制备适合任何基因靶点的有效 siRNA

 异源 siRNA 可以确保沉默靶基因

 从 DNA 模板到转染只需要一天
 避免了使用合成 siRNA 需反复摸索实验条件的问题

NEB代理 , RNA 试剂 , RNA 连接酶和修饰酶

图：使用 ShortCut RNase III 制备的 siRNA：A) 不同单位数量的 ShortCut RNase III 与 2 μg 500 bp 的 dsRNA 孵育 20 分钟。B) 用 ShortCut RNase III 消化 dsRNA 片段（1 kb 和 175 bp）。消化产物通过 20% TBE 聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析。

NEB代理,RNA 试剂,RNA 连接酶和修饰酶,#M0265L,核酸外切酶 T

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 连接酶和修饰酶

核酸外切酶 T

#M0265L 1,250 units

#M0265S 250 units

特性

 去除 DNA 或 RNA 3´ 突出末端生成平末端

概述

核酸外切酶 T（Exo T），又称为 RNase T，是一种单链 RNA 或 DNA 特异性核酸酶，该酶需要游离的 3´ 末端，以 3´ →5´ 方向去除核苷酸。核酸外切酶 T 对于 DNA 的活性比 RNA 高十倍。核酸外切酶 T 可用于含有 3´ 突出末端的 RNA 或 DNA 的末端平滑化。

来源

核酸外切酶 T 与麦芽糖结合蛋白（MBP）进行 C-端融合后，过表达并纯化。随后用 Factor Xa 蛋白酶从核酸外切酶 T 上切除 MBP，最后纯化去除 Xa 因子和 MBP。从 MBP 上切割的核酸外切酶 T 在 N 端多出一个氨基酸，且 Phe 替换了 Met（即 Glu-Phe-Exo T 而非 Met- Exo T）。

反应条件

1X NEBuffer 4

[50 mM KAc，20 mM Tris-Ac，10 mM Mg (Ac)₂，1 mM DTT (pH 7.9 @ 25℃) ]，25℃ 温育。
热失活：65℃ 20 分钟。

质保声明

无核酸内切酶和外切酶污染。

单位定义

1 单位指 100 μl 反应体系中，25℃ 条件下，30 分钟从 1 nmol [³H]-标记的多聚胸腺嘧啶生成 0.1 nmol TCA 可溶性核苷酸所需要的酶量。

浓度

5,000 units/ml。

使用注意事项

Exo T 对 DNA 和 RNA 的反应效率不同，DNA 是 RNA 的 100 倍。对于 RNA，在标准反应条件下，完全消化 1.0 pmol rA20 需要 1 单位 Exo T，反应结果通过凝胶电泳检测。

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NEB代理 , RNA 试剂 , RNA 连接酶和修饰酶

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 连接酶和修饰酶

RNase HII

#M0288L 1,250 units

#M0288S 250 units

特性

 对掺入有 rNTP 的聚合酶产物进行切刻

 与 T7 核酸内切酶 I 联合使用时，在掺入有 rNTP 的区域位点处产生双链断裂

 降解冈崎片段或其它 RNA-DNA 杂交链中的 RNA 部分

概述

核糖核酸酶 HII（RNase HII）为核糖核酸内切酶，适用于在双链 DNA 内部切刻核糖核酸的 5´ 末端，产生 5´ 磷酸和 3´ 羟基末端。RNase HII 还可以在冈崎片段的 RNA 部分进行多处切刻切割。

来源

重组 E. coli 菌株，该菌株携带来自 E. coli 用 Factor Xa 蛋白酶将 RNase HII 从融合蛋白中切割分离，然后再进行纯化去除 MBP 和 Factor Xa 蛋白酶。从 MBP 中切割下来的 RNase HII 在其 N 端多出四个氨基酸（Ile-Ser-Glu-Phe）。

反应条件

1X ThermoPol 反应缓冲液[10 mM KCl，20 mM Tris-HCl，10 mM (NH₄)₂SO₄，2 mM MgSO₄，0.1% Triton X-100 (pH 8.8 @ 25℃) ]，37℃ 温育。

质保声明

无核酸内切酶、核酸外切酶和 RNase 污染。

单位定义

1 单位指 1X ThermoPol 反应体系中，37℃ 条件下，30 分钟产生与切刻切割 100 pmol 合成的双链 RNA 底物产生相同的荧光信号所需的酶量。该合成的双链底物在荧光/淬火基团对的淬火基团附近含有单个核糖核苷。

浓度

5,000 units/ml。

注意事项

与 0.1% SDS 一起温育足以失活 RNase HII。

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NEB代理,RNA 试剂,RNA 连接酶和修饰酶,小牛肠碱性磷酸酶CIP,#M0290L

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 连接酶和修饰酶

小牛肠碱性磷酸酶（CIP）(停产有替代)

#M0290L 5,000 units

#M0290S 1,000 units

停产通知

请注意：该产品已停产，库存售完为止，替代产品为M0525

特性

 DNA 和 RNA 的去磷酸化

 克隆载体去磷酸化，防止载体自连

 测序或 SNP 分析前除去 PCR 反应中dNTP 和焦磷酸盐

 T4 PNK 标记 5´ DNA 末端前的去磷酸化

概述

小牛肠碱性磷酸酶（CIP）催化 DNA 和 RNA 5´ 和 3´ 磷酸单脂的去磷酸化反应。另外，CIP 水解核糖和脱氧核糖核苷三磷酸（NTP 和 dNTP）。CIP 在分子生物学研究中应用广泛，如去除 DNA 和 RNA 末端的磷酸基团，用于后续的克隆和探针末端标记。在克隆中，对线性载体去磷酸化，防止自连。该酶可以作用于 5´ 突出端、凹陷端和平末端。CIP 也可以用来降解 PCR 反应中的游离 dNTP，用于制备测序模板和 SNP 分析。

来源

小牛肠粘膜。

反应条件

1X 反应缓冲液
[50 mM KAc, 20 mM Tris-Ac, 10 mM Mg(Ac)₂, 100 μg/ml BSA (pH 7.9 @ 25℃)]，37℃ 温育。

质保声明

小牛肠碱性磷酸酶（CIP）经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。

单位定义

1 单位指在 1 ml 反应体系中，37℃ 条件下，1 分钟催化 1 μmol 的对硝基苯磷酸盐（PNPP）水解成对硝基苯酚所需的酶量。

浓度

10,000 units/ml。

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NEB代理 , RNA 试剂 , RNA 连接酶和修饰酶,RNase H,#M0297L

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 连接酶和修饰酶

RNase H

#M0297L 1,250 units

#M0297S 250 units

特性

 重组酶

 除去杂交到 poly(dT) 上的 mRNA poly(A)
 在 cDNA 第二链合成时除去 mRNA

概述

核糖核酸酶 H（RNase H）是一种核糖核酸内切酶，它能够特异性地水解杂交到 DNA 链上的 RNA 磷酸二酯键。该酶不能消化单链或双链DNA。

来源

重组 E. coli 菌株，携带有从 E. coli 中克隆的 RNase H（rnh）基因。

反应条件

1X RNase H 反应缓冲液 [75 mM KCl，50 mM Tris-HCl (pH 8.3 @ 25℃)，3 mM MgCl₂ 和 10 mM DTT]，37℃ 温育。热失活：65℃ 20 分钟。

质保声明

无核酸内切酶、核酸外切酶污染。

单位定义

1 单位指 50 μl 反应体系中， 37℃ 条件下， 20 分钟从 20 pmol荧光标记的 50 bp RNA-DNA杂交链中水解生成 1 nmol 核苷酸所需的酶量。

浓度

5,000 units/ml。

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NEB代理,RNA 试剂,RNA 连接酶和修饰酶,5´ 去腺苷化酶#M0331S

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 连接酶和修饰酶

5´ 去腺苷化酶

#M0331S 2,500 units

特性

 DNA 和 RNA 5´ 末端的去腺苷化

 Aprataxin 依赖的 DNA 修复检测

 分析双核苷四磷酸

概述

酵母 5´ 去腺苷化酶是组氨酸三聚体（HIT）家族中的一员，属于组氨酸三聚体核苷结合蛋白（Hint）的分支。它是 aprataxin 在酵母中的直系同源物。人 aprataxin 的突变会导致神经系统疾病，如共济失调伴眼动失用症 I。通过从 DNA 的 5´ 末端去除 AMP（AMP-DNA 水解酶活性），人源 5´ 去腺苷化酶可以去除未连接中间体，它还可以通过去除 3´ -磷酸和 3´ -磷酸乙醇酸修复 DNA 的 3´ 末端损伤。人 aprataxin 作用于小分子，如核苷多磷酸双腺苷四磷酸（AppppA）和 lysyl-AMP。

5´ 去腺苷化酶是由酿酒酵母（S. cerevisiae）的 HNT3基因编码。 NEB 研究显示该蛋白能从 DNA 和 RNA的 5´ 末端去腺苷化，余下 5´ 末端磷酸。它也能切割 AppppA 生成 ATP 和 AMP。未检测出其对 lysylAMP 有作用。

来源

从携带编码酿酒酵母 5´ 去腺苷化酶质粒的 E. coli 菌株中纯化而得。

反应条件

20 μl 反应体系：1X NEBuffer 2 [50 mM NaCl，10 mM Tris-HCl，10 mM MgCl₂，1 mM DTT (pH 7.9 @ 25℃) ]，5–50 pmol 腺苷化 DNA (AMPDNA)，30℃ 温育。

热失活：70℃ 20 分钟。

单位定义

1 单位指 30℃ 条件下，10 分钟从 5´ 腺苷化 DNA 寡聚体中去除 10 pmol AMP 所需的酶量。

浓度

50,000 units/ml。

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NEB代理,RNA 试剂,RNA 连接酶和修饰酶,

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 连接酶和修饰酶

T4 RNA 连接酶 2,截短型 K227Q

#M0351L10,000 units

#M0351S2,000 units

特性

 将预腺苷化的 DNA 或 RNA 序列标签连接到任何 RNA 3´ 末端

 将腺苷化单链引物连接至小 RNA 上，用于 cDNA 文库构建
 将腺苷化单链引物连接至 RNA 上，用于链特异性 cDNA 文库构建

概述

T4 RNA 连接酶 2，截短型 KQ（T4 Rnl2tr KQ）能特异性将 5´ 末端预腺苷化的 DNA 或 RNA 连接到RNA 的 3´ OH 末端。反应无需 ATP，但需预腺苷化接头。

因为不再使用 ATP，而改用预腺苷化接头，同时降低赖氨酰腺苷化酶的活性，所以连接反应的背景可以降至最低。该酶已用于二代测序 Small RNA的文库构建中，优化了接头的连接过程。

来源

重组 E. coli 菌株，携带有 MBP 融合表达的质粒，该质粒克隆有含编码 T4 RNA 连接酶 2 的前249 个氨基酸序列。 T4 Rnl2tr K227Q 是将 227 位的赖氨酸突变为谷氨酸。 T4 Rnl2tr KQ 分别在 55 和位置进行了突变，精氨酸突变为赖氨酸、赖氨酸突变为谷氨酰胺。

反应条件

1X T4 RNA 连接酶反应缓冲液[50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25℃)，10 mM MgCl₂，1 mM DTT]，25℃ 温育。
热失活：65℃ 20 分钟。

随酶提供的试剂

10X T4 RNA 连接酶反应缓冲液
50% PEG 8000

质保声明

无单链和双链 DNA 核酸内切酶、外切酶、 RNase 以及磷酸酶的污染。

单位定义

200 单位指 20 μl 反应体系中， 25℃ 条件下， 1 小时能将 80% 的 31-mer RNA 连接到预腺苷化 17-mer DNA 末端 [miRNA 通用克隆接头（NEB#S1315）] 所需的酶量。单位活性检测条件请登陆 www.neb-china.com 或 www.neb.com。

浓度

200,000 units/ml。

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NEB代理 , RNA 试剂 , RNA 连接酶和修饰酶,#M0356S

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 连接酶和修饰酶

RNA 5´ 焦磷酸水解酶（RppH）

#M0356S 200 units

特性

 将 5´ 三磷酸 RNA 转化为单磷酸 RNA

 制备用于连接的 5´ 磷酸 RNA
 分析 RNA 5´ 末端修饰

概述

细菌 RNA 5´ 焦磷酸水解酶（RppH）能从 5´末端三磷酸化的 RNA 中去除焦磷酸盐产生 5´ 单磷酸 RNA。 RppH 蛋白又叫 NudH/YgdP，可以将二腺苷五磷酸 (diadenosine penta-phosphate) 分解成 ADP和 ATP。

来源

纯化自携带有 RppH 基因的 E. coli 菌株。

反应条件

1X NEBuffer 2 [10 mM Tris-HCl，50 mM NaCl，1 mM DTT，10 mM MgCl₂，( pH 7.9 @ 25℃ ) ]，37℃ 温育。

随酶提供的试剂

10X NEBuffer 2。

单位定义

1 单位指 37℃ 条件下，30 分钟内将 1 μg 300-mer RNA 转录产物转化成 XRN-1 可消化的 RNA 所需要的酶量。

浓度

5,000 units/ml。

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NEB代理,RNA 试剂,RNA 连接酶和修饰酶,T4 RNA 连接酶 2截短型 KQ

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 连接酶和修饰酶

T4 RNA 连接酶 2截短型 KQ

#M0373L 10,000 units

#M0373S 2,000 units

特性

 将预腺苷化的 DNA 或 RNA 序列标签连接到任何 RNA 3´ 末端

 将腺苷化单链引物连接至小 RNA 上，用于 cDNA 文库构建
 将腺苷化单链引物连接至 RNA 上，用于链特异性 cDNA 文库构建

概述

T4 RNA 连接酶 2，截短型 KQ（T4 Rnl2tr KQ）能特异性将 5´ 末端预腺苷化的 DNA 或 RNA 连接到RNA 的 3´ OH 末端。反应无需 ATP，但需预腺苷化接头。

T4 Rnl2tr KQ 是 T4 RNA 连接酶 2，截短型（NEB#M0242）的双点突变体。 K227 的突变降低了赖氨酰腺苷化。由于降低了 T4 Rnl2tr 从接头将腺苷基团转移到 RNA 5´ 磷酸基的活性， K227Q 可以减少 T4 Rnl2tr 非特异性的连接（串联体和环）。在 T4 Rnl2tr K227Q 中进一步突变 R55K，提高了酶的连接活性，使其与野生型 T4 Rnl2tr 连接活性水平一致。
因为不再使用 ATP，而改用预腺苷化接头，同时降低赖氨酰腺苷化酶的活性，所以连接反应的背景可以降至最低。该酶已用于二代测序 Small RNA的文库构建中，优化了接头的连接过程。

来源

反应条件

1X T4 RNA 连接酶反应缓冲液[50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25℃)，10 mM MgCl₂，1 mM DTT]，25℃ 温育。
热失活：65℃ 20 分钟。

随酶提供的试剂

10X T4 RNA 连接酶反应缓冲液
50% PEG 8000

质保声明

无单链和双链 DNA 核酸内切酶、外切酶、 RNase 以及磷酸酶的污染。

单位定义

200 单位指 10 μl 反应体系中，25℃ 条件下，1 小时能将 80% 的 31-mer RNA 连接到预腺苷化 17-mer DNA 末端 [miRNA 通用克隆接头（NEB #S1315）] 所需的酶量。单位活性检测条件请登陆 www.neb-china.com 或 www.neb.com。

浓度

200,000 units/ml。

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NEB代理,RNA 试剂,RNA 连接酶和修饰酶,#M043M,T4 RNA 连接酶 1

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 连接酶和修饰酶

T4 RNA 连接酶 1（ssRNA 连接酶）（高浓度） #M043M 5,000 units

特性

 连接单链 RNA 和 DNA

 用 5´ -[³²P] pCp 进行 RNA 3´ 末端标记

 RNA 和 DNA 分子内及分子间的连接

 合成单链寡脱氧核苷酸
 蛋白质中掺入非天然氨基酸

概述

来源

携带 T4 RNA 连接酶 1 基因的 E. coli 菌株。

反应条件

1X T4 RNA 连接酶反应缓冲液[50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25℃)，10 mM MgCl₂，1 mM DTT]，加入 1 mM ATP，37℃ 温育。热失活：65℃ 15 分钟或煮沸 2 分钟。

使用注意事项

pCp 的连接需要加入终浓度为10%（v/v）的 DMSO。

随酶提供试剂

10X T4 RNA 连接酶反应缓冲液
10 mM ATP（NEB #M0204中包含）或 100 mM ATP（NEB #M0437中包含）50% PEG 8000

质保声明

无单链 DNA 核酸外切酶、核酸内切酶、RNase 和磷酸酶污染。

单位定义

1 单位指 37℃ 条件下，30 分钟内将 1 nmol 的 5´ -[³²P] rA16 转化成磷酸盐不溶物所需要的酶量。

浓度

10,000 或 30,000 units/ml。

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NEB代理 , RNA 试剂 , RNA 连接酶和修饰酶,#M0458S,RtcB 连接酶

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 连接酶和修饰酶

RtcB 连接酶

#M0458S 25 次反应

特性

连接单链 RNA 或单链 DNA 的 3´ -磷酸基团或 2´ ,3´ -环磷酸基团连接到单链 RNA 的 5´ -羟基上

 含有匹配末端的单链 RNA 环化

概述

来源于 E. coli 的 RtcB 连接酶能将单链线性RNA 分子中的 3´ -磷酸基或 2´ , 3´ -环磷酸基团与另一个 RNA 分子的 5´ -羟基进行连接。连接反应需有 GTP 和 MnCl2 的参与，并在反应过程中会形成反应中间体-鸟苷酸。如底物末端含有 2´ , 3´ -环磷酸基团，需先行水解成 3´ -磷酸基，然后再通过 GMP 进行 3´ 末端活化和连接。

来源

重组 E. coli 菌株，携带有 His 标签的 RtcB 连接酶基因。

反应条件

1X RtcB 反应缓冲液 [50 mM Tris-HCl (pH8.3 @ 2℃), 75 mM KCl, 3 mM MgCl2, 10 mM DTT]，补加0.1 mM GTP 和 1 mM MnCl2。 37℃ 温育。

质保声明

无单链和双链 DNA 核酸内切酶、外切酶、 RNase 以及磷酸酶的污染。

浓度

15 μM

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NEB代理,RNA 试剂,RNA 连接酶和修饰酶,耐热 RNase H,#M0523S

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 连接酶和修饰酶

耐热 RNase H

#M0523S 250 units

特性

NEB代理 , RNA 试剂 , RNA 连接酶和修饰酶

概述

耐热 RNaseH 特异性识别并切割 RNA-DNA 杂交体中 RNA 序列的磷酸二酯键，同时保持DNA 序列完整。这种热稳定的核酸酶具有与大肠杆菌 RNaseH 相同的酶学性质，但在更高的温度下具有活性。

反应条件：1X RNase H 反应缓冲液，50℃ 温育。

单位定义：1 单位指 50 μl 反应体系中，50℃ 条件下，20 分钟从 40 pmol荧光标记的 25 bp RNA-DNA 杂交链中水解得到 1 nmol 核糖核苷酸所需的酶量。单位活性检测条件请登陆。

浓度：5,000 units/ml

NEB代理,RNA 试剂,RNA 连接酶和修饰酶,Sce 假尿嘧啶合成酶 I,#M0526S

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 连接酶和修饰酶

Sce 假尿嘧啶合成酶 I

#M0526S 5,000 pmol

特性

Sce PUS1 用于在体外将单链 RNA 中尿嘧啶转化为假尿嘧啶

Sce PUS1 是一款独立的酶，不需要 RNA 向导或辅助因子即可修饰 RNA

使用 Sce PUS1 对特定序列进行假尿苷修饰可以替代通过 RNA 聚合酶随机掺入修饰核苷酸的方法

产品说明

该酶是创新酶（Enzyme for Innovation, EFI）。创新酶工程由 NEB 发起，旨在为科研界提供独一无二的酶，从而为新的创新应用的发现创造条件。这些酶均具有独特的功能和特性。

Sce 假尿嘧啶合成酶 I（Sce PUS1）可将单链 RNA 中尿嘧啶转化为假尿嘧啶，对单链 RNA 中尿嘧啶的转化率高于双链 RNA。最佳底物为≥15 nt无特殊结构的 RNA。

NEB代理 , RNA 试剂 , RNA 连接酶和修饰酶

NEB代理 , RNA 试剂 , RNA 连接酶和修饰酶,NudC 焦磷酸酶,#M0607S

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 连接酶和修饰酶

NudC 焦磷酸酶

#M0607S 250 pmol

特性

·对含 ADP 的、非经典启动核苷酸，如 NAD⁺ 和 NADH 进行脱帽，生成可连接的 5′ 末端为单磷酸的基团

·水解 NADH 生成 AMP 和还原型烟酰胺单磷酸核苷（NMNH）；水解 NAD⁺产生 AMP和烟酰胺单磷酸核苷（NMN⁺）

·水解二磷酸二核苷酸和含有 ADP 基团的代谢辅助因子，如 AppA、FAD、辅酶 A 等

·当 NAD⁺ 是 RNA 的 5’ 启动核苷酸时，可用于 NAD⁺ 脱帽或去除 NAD

·适用于基于连接方法的研究，如 5’ RACE 和 RNA 测序，以检测和鉴定含有非经典启动核苷酸的RNA

该酶是一种创新酶（EFI，Enzyme for Innovation）。EFI 是由 NEB 发起的一个项目，旨在为科学界提供独特的酶，以期发现新应用。这类酶既有趣又特别。

概述

NudC 是 NUDIX 焦磷酸酶家族中的一员，可高效水解带 NAD⁺ 帽和 NADH 帽的 RNA，生成连接可用的带 5′ 单磷酸末端的 RNA（NAD⁺ 脱帽或去除 NAD）^（1）。研究表明：nudC 基因的缺失增加了大肠杆菌中 NAD⁺ 帽化 RNA 的比例^（2）。

该酶还能以不同的效率水解含 ADP 基团的小分子，如 NADH、NAD⁺、AppA、ADP-核糖、ADP-葡萄糖和代谢辅助因子，如 FAD、辅酶 A 和乙酰辅酶 A^{（3 和未发表结果）}。由于其对各种二核苷酸和代谢辅因子的活性，该酶有望通过对帽的焦磷酸化水解作用和核苷酸产物的分析，来识别带有非经典帽结构的 RNA，或使用基于 5′ 连接的方法（如 RNA 测序或 5′ RACE^（4））来识别带有 5′ 单磷酸末端的 RNA。

随酶提供的试剂

NEBuffer™ 3.1

100 mM DTT

浓度

10 µM

单位定义

在 1X NEBuffer 3.1 和 5 mM DTT 的反应条件中，加入 1 µM NudC，37℃ 温育 30 分钟，能将 200 µM 或更多 NAD⁺ 水解成 NMN⁺ 和 AMP。

反应条件

1X NEBuffer™ 3.1，补加 5 mM DTT，37℃ 温育。

热失活

65℃ 加热 10 分钟。

储存温度

-20℃

质保声明

NudC 焦磷酸酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理

1. Frick D.N. and Bessman M.J. (1995). J. Biol. Chem. 270, 1529-1534.

2. Cahová, H. et al. (2015). Nature. 519, 374-377.

3. Höfer K. et al. (2016). Nat Chem Biol. 12, 730-734.

4. Vvedenskaya I.O., et al (2018). Mol Cell. 70, 553-564.e9.

NEB代理,RNA 试剂,RNase 抑制,#M0307L,人胎盘 RNase 抑制剂

产品资料 – RNA 试剂 – RNase 抑制

人胎盘 RNase 抑制剂

#M0307L 10,000 units

#M0307S 2,000 units

特性

 抑制常见的真核 RNase

 与 Taq 聚合酶、AMV 或 M-MuLV 反转录酶兼容

 在较宽的 pH 范围内均有活性（pH 5-8）

 适用于 cDNA 合成反应
 体外转录/翻译

概述

RNase 抑制剂是重组人胎盘蛋白质，可以特异性地抑制 RNase A、B、C 活性，但对 RNase 1、RNase T1、S1 核酸酶、RNase H 和来源于曲霉属的 RNase 无效。此外，与下列聚合酶共同使用时，未观察到其抑制聚合酶的活性，如：Taq DNA 聚合酶、AMV 或 M-MuLV 反转录酶和噬菌体 RNA 聚合酶（SP6、T7 或 T3）。

RNase 抑制剂的分子量为 50 kDa，通过非共价键以 1:1 的比例与 RNase 结合而抑制其酶活，结合常数大于 10¹⁴。

来源

重组 E. coli 菌株，含有来源于人胎盘的 RNase 抑制剂基因。

质保声明

无核酸内切酶、核酸外切酶和 RNase 污染。

单位定义

1 单位指抑制 5 ng RNase A 50% 活性所需的 RNase 抑制剂的用量。活性测定是通过抑制 RNase A 对胞嘧啶 2´，3´ -环单磷酸盐的水解来进行的。

浓度

40,000 units/ml。

上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375

有关该产品特性和应用的上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375。

NEB代理,RNA 试剂,RNase 抑制,小鼠 RNase 抑制剂,#M0314L

产品资料 – RNA 试剂 – RNase 抑制

小鼠 RNase 抑制剂

#M0314L 15,000 units

#M0314S 3,000 units

特性

 抑制常见真核 RNase

 与 Taq 聚合酶、AMV 或 M-MuLV 反转录酶兼容

 适用于 cDNA 合成和 RT-PCR

 体外转录 / 翻译
 酶催化的 RNA 标记反应

相比起人源和猪源 RNase 抑制剂，小鼠 RNase 抑制剂在抗氧化能力上有显著提升。

概述

小鼠 RNase 抑制剂是鼠源重组蛋白，分子量为 50 kDa，可以特异性抑制 RNase A、B 和 C 活性。它与 RNase 以 1:1 的比例高效非共价结合从而抑制其活性。但对 RNase 1、RNase T1、S1 核酸酶、RNase H 或来源于曲霉属的 RNase 无效。此外，与下列聚合酶共同使用时，该抑制剂不会抑制聚合酶的活性，如：Taq DNA 聚合酶、AMV 或 M-MuLV 反转录酶或噬菌体 RNA 聚合酶（SP6、T7 或 T3）。

重组小鼠 RNase 抑制剂不含有半胱氨酸。已证实，人源中的半胱氨酸对氧化非常敏感并导致抑制剂失活。因此，小鼠 RNase 抑制剂与人/猪 RNase 抑制剂相比，抗氧化能力显著提高，且在 DTT 浓度较低（＜1 mM）时更稳定。这使其在不适宜高浓度 DTT 的反应中更具优势，如实时 RT-PCR。

来源

携带有鼠源 RNase 抑制剂基因的 E. coli 菌株。

质保声明

无核酸内切酶、核酸外切酶和 RNase 污染。

单位定义

1 单位指抑制 5 ng RNase A 50% 活性所需要的小鼠 RNase 抑制剂的量。活性测定是通过抑制 RNase A 对胞嘧啶 2´，3´ -环单磷酸盐的水解来进行。

浓度

40,000 units/ml。

上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375

有关该产品特性和应用的上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375。

NEB代理 , RNA 试剂 , RNase 抑制,#S1402S氧钒核糖核苷复合物

产品资料 – RNA 试剂 – RNase 抑制

氧钒核糖核苷复合物

#S1402S 10 ml (200 mM)

NEB代理,RNA 试剂,二代测序 RNA 文库制备试剂,NEBNext Ultra II RNA 第二链合成模块

产品资料 – RNA 试剂 – 二代测序 RNA 文库制备试剂

NEBNext Ultra II RNA 第二链合成模块

#E6111L100 次反应

#E6111S20 次反应

应用

– RNA Sample Preparation
– Second Strand Synthesis of cDNA

概述

The NEBNext Ultra II Non-Directional RNA Second Strand Synthesis Module has been optimized to generate double-stranded cDNA from first-strand cDNA, as part of the NEBNext non-directional RNA library preparation workflow.

The NEBNext Ultra II Non-Directional RNA Second Strand Synthesis Module is Designed for Use with the

Following:

– NEBNext Ultra II RNA First Strand Synthesis Module (NEB #E7771)

– NEBNext Ultra II End Repair/dA-Tailing Module (NEB #E7546)

– NEBNext Ultra II Ligation Module (NEB #E7595)

– NEBNext Ultra™ II Q5^® Master Mix (NEB #M0544)

– NEBNext^® Oligos for Illumina^® (NEB #E7335, #E7500, #E7710, #E7730, #E6609, #E7600,

#E7535, #E7350)

随酶提供的试剂

NEBNext^® Second Strand Synthesis Enzyme Mix

NEBNext^® Second Strand Synthesis Reaction Buffer

NEBNext RNA 文库制备试剂 — 订购信息

NEB代理 , RNA 试剂 , 二代测序 RNA 文库制备试剂

NEB代理,RNA 试剂,NEBNext RNA Mg++ 片段化模块#E6150S

产品资料 – RNA 试剂 – 二代测序 RNA 文库制备试剂

NEBNext RNA Mg⁺⁺ 片段化模块

#E6150S 200 次反应

概述

The NEBNext® Magnesium RNA Fragmentation Module has been optimized to fragment RNA into small

pieces by incubation with Magnesium ions at 94˚C. Fragment size is controlled by incubation time (Figure 1), and the reaction is ended by the addition of NEBNext Fragmentation Stop Solution.

NEB代理 , RNA 试剂 , 二代测序 RNA 文库制备试剂

随酶提供试剂

NEBNext® RNA Fragmentation Buffer

NEBNext RNA Fragmentation Stop Solution

NEBNext RNA 文库制备试剂 — 订购信息

NEB代理 , RNA 试剂 , 二代测序 RNA 文库制备试剂

NEB代理,RNA 试剂,二代测序 RNA 文库制备试剂,#E7300L

产品资料 – RNA 试剂 – 二代测序 RNA 文库制备试剂

NEBNext Small RNA 多样本文库制备试剂盒 1

#E7300L 96 次反应

#E7300S 24 次反应

NEBNext Small RNA 文库制备试剂盒其它产品

NEBNext Small RNA 多样本文库制备试剂盒 2

NEBNext Small RNA 多样本文库制备试剂盒 (检索引物 1-48)

NEBNext Small RNA 单样本文库制备试剂盒（与多样本兼容）

概述

Small RNA 建库流程经过创新性优化，在保证制备高产量和多样性的文库的同时，能够最大限度的减少

接头二聚体的形成。接头和引物都包含在试剂盒中，并且可以实现多样本的建库。多样本建库试剂盒

包含检索引物，且兼容自备检索引物。

除了每种组份都经过严格的质量监控以外，NEBNext Small RNA 试剂盒还都经过构建 Small RNA 文库，再在 Illumina 测序平台测序进行验证。NEBNext 试剂盒里面，各个组份的批号也都被保留下来。大多数的组份都以预混液的形式提供，从而减少了试剂盒里面的管数，也减少了移液操作的步骤。

NEBNext Small RNA 单样本文库制备试剂盒-与多样本兼容

#E7330L 96 次反应

#E7330S 24 次反应

NEBNext Small RNA 文库制备试剂盒其它产品

NEBNext Small RNA 多样本文库制备试剂盒 1

NEBNext Small RNA 多样本文库制备试剂盒 2

NEBNext Small RNA 多样本文库制备试剂盒 (检索引物 1-48)

概述

Small RNA 建库流程经过创新性优化，在保证制备高产量和多样性的文库的同时，能够最大限度的减少

接头二聚体的形成。接头和引物都包含在试剂盒中，并且可以实现多样本的建库。多样本建库试剂盒

包含检索引物，且兼容自备检索引物。

NEBNext 多样本接头引物试剂盒 1（12种检索引物） #E7335L96 次反应

#E7335S24 次反应

产品特点

·提高连接效率

·极大降低接头二聚体

·增加文库产量

·增加样品识别特异性（双端检索）

·大量单端检索/可用检索

· 提供检索表和样本示例表

概述

NEBNext 接头是为 DNA、ChIP DNA 和 RNA（不包括 Small RNA）文库构建而设计的，能够确保接头的高效连接及文库的高产量，并且最大限度的减少接头二聚体的形成。NEBNext 接头包含一个特殊的发卡环状结构，能够更高效的和经末端修复的带 dA 尾的 DNA 结合。环状结构包含一个 U，当 U 被 USER 酶（由 UDG 和内切酶 VIII 组合而成）切掉后，环状结构打开，使它可以成为 PCR 的反应底物。检索序列通过 PCR 引入文库，从而实现了多样本的制备。NEBNext 接头引物不仅能够用于 NEBNext 产品，也可以用于其它的兼容 Illumina 标准平台的文库制备法。

提供单端和双端检索引物。同时也提供用于重亚硫酸盐测序的甲基化接头。

功能验证

每个试剂盒都通过对基因组 DNA、ChIP DNA 和 mRNA 进行文库构建，并在 Illumina 平台测序进行验证。

NEB代理,RNA 试剂,NEBNext 单样本接头引物试剂盒,#E7350L

产品资料 – RNA 试剂 – 二代测序 RNA 文库制备试剂

NEBNext 单样本接头引物试剂盒（已停产）

#E7350L 60 次反应

#E7350S 12 次反应

产品特点

 提高连接效率

 极大降低接头二聚体

 增加文库产量

 增加样品识别特异性（双端检索）

 大量单端检索/可用检索

 提供检索表和样本示例表

概述

提供单端和双端检索引物。同时也提供用于重亚硫酸盐测序的甲基化接头。

功能验证

每个试剂盒都通过对基因组 DNA、ChIP DNA 和 mRNA 进行文库构建，并在 Illumina 平台测序进行验证。

NEB代理,RNA 试剂,NEBNext RNA 定向文库制备试剂盒,#E7420L

产品资料 – RNA 试剂 – 二代测序 RNA 文库制备试剂

NEBNext RNA 定向文库制备试剂盒 #E7420L 96 次反应

产品特点

– Accurate retention of transcript strand of origin information

– Utilizes dUTP-based methodology

– Low input amounts (as low as 10ng purified mRNA or ribosomal-depleted RNA, or 100ng Total RNA)

– Fast workflow (4.5 – 5 hours), with minimal hands-on time

– Robust, reliable performance

– Ultra high fidelity amplification with minimized GC bias

概述

The NEBNext® Ultra™ Directional RNA Library Prep Kit for Illumina® contains reagents for preparation of strand-specific RNA libraries for Illumina sequencing. Please note that adaptors, primers, rRNA depletion

reagents and poly(A) mRNA isolation reagents are not included in the kit and are available separately.

Ultra Directional RNA Library Preparation for Illumina

NEB代理 , RNA 试剂 , 二代测序 RNA 文库制备试剂

NEBNext RNA 文库制备试剂 — 订购信息

NEB代理 , RNA 试剂 , 二代测序 RNA 文库制备试剂

适用于所有平台的试剂

NEB代理,RNA 试剂,#E7490L,NEBNext Poly(A) mRNA 磁性分离模块

产品资料 – RNA 试剂 – 二代测序 RNA 文库制备试剂

NEBNext Poly(A) mRNA 磁性分离模块

#E7490L 96 次反应

#E7490S 24 次反应

概述

NEBNext Poly(A) mRNA 磁性分离模块可以从分离的总 RNA 中提取完整的 poly(A)⁺ RNA。这个技术的原理是将 Oligod(T)₂₅ 与 1 μm 顺磁性磁珠偶联后，以此为固相支持物直接结合 poly(A)⁺ RNA。利用此方法可以进行多个样本的分离，也适用于自动化高通量分离。此外，磁性分离技术可得到较小体积的完整 RNA 洗脱液，不需要再从洗脱液中沉淀 poly(A)+ RNA。因此在 1 小时内就能分离得到体现原始样品中 mRNA分布特性的完整 poly(A)⁺ RNA。

mRNA 磁性分离模块包括

– NEBNext Oligo d(T)₂₅ 磁珠

– NEBNext RNA 结合缓冲液（2X）

– NEBNext 洗脱缓冲液

– 无核酸酶污染的水
– NEBNext Tris 缓冲液

NEBNext RNA 文库制备试剂——订购信息

NEB代理 , RNA 试剂 , 二代测序 RNA 文库制备试剂

NEB代理,RNA 试剂,#E7500L,NEBNext 多样本接头引物试剂盒2

产品资料 – RNA 试剂 – 二代测序 RNA 文库制备试剂

NEBNext 多样本接头引物试剂盒 2（12 种检索引物） #E7500L 96 次反应

#E7500S 24 次反应

产品特点

·提高连接效率

·极大降低接头二聚体

·增加文库产量

·增加样品识别特异性（双端检索）

·大量单端检索/可用检索

·提供检索表和样本示例表

概述

提供单端和双端检索引物。同时也提供用于重亚硫酸盐测序的甲基化接头。

功能验证

每个试剂盒都通过对基因组 DNA、ChIP DNA 和 mRNA 进行文库构建，并在 Illumina 平台测序进行验证。

NEB代理,RNA 试剂,NEBNext RNA 文库制备试剂盒#E7530L

产品资料 – RNA 试剂 – 二代测序 RNA 文库制备试剂

NEBNext RNA 文库制备试剂盒

#E7530L 96 次反应

#E7530S24 次反应

产品特点

– Low input amounts (as low as 10ng total RNA, purified mRNA or ribosomal-depleted RNA)

– Fast workflow (5 – 5.5 hours), with minimal hands-on time

– Robust, reliable performance

– Ultra high fidelity amplification with minimized GC bias

概述

The NEBNext® Ultra™ RNA Library Prep Kit for Illumina® contains reagents for preparation of non-directional RNA libraries for Illumina sequencing. Please note that adaptors, primers, rRNA depletion reagents and poly(A) mRNA isolation reagents are not included in the kit and are available separately.

Ultra Non-directional RNA Library Preparation for Illumina

NEBNext RNA 文库制备试剂 — 订购信息

NEB代理 , RNA 试剂 , 二代测序 RNA 文库制备试剂

适用于所有平台的试剂

NEB代理 , RNA 试剂 , 二代测序 RNA 文库制备试剂

NEB代理,RNA 试剂,NEBNext Small RNA 多样本文库制备试剂盒2,#E7580L

产品资料 – RNA 试剂 – 二代测序 RNA 文库制备试剂

NEBNext Small RNA 多样本文库制备试剂盒 2

#E7580L 96 次反应

#E7580S 24 次反应

NEBNext Small RNA 文库制备试剂盒其它产品

NEBNext Small RNA 多样本文库制备试剂盒 1

NEBNext Small RNA 多样本文库制备试剂盒 (检索引物 1-48)

NEBNext Small RNA 单样本文库制备试剂盒（与多样本兼容）

概述

Small RNA 建库流程经过创新性优化，在保证制备高产量和多样性的文库的同时，能够最大限度的减少

接头二聚体的形成。接头和引物都包含在试剂盒中，并且可以实现多样本的建库。多样本建库试剂盒

包含检索引物，且兼容自备检索引物。

NEBNext 多样本接头引物试剂盒 1（双端检索引物,8×12种)

#E7600S 96 次反应

产品特点

·提高连接效率

·极大降低接头二聚体

·增加文库产量

·增加样品识别特异性（双端检索）

·大量单端检索/可用检索

·提供检索表和样本示例表

概述

提供单端和双端检索引物。同时也提供用于重亚硫酸盐测序的甲基化接头。

功能验证

每个试剂盒都通过对基因组 DNA、ChIP DNA 和 mRNA 进行文库构建，并在 Illumina 平台测序进行验证。

NEB代理,NEBNext Ultra II RNA 定向文库制备试剂盒#E7760L

产品资料 – RNA 试剂 – 二代测序 RNA 文库制备试剂

NEBNext Ultra II RNA 定向文库制备试剂盒

#E7760L 96次反应

#E7760S 24次反应

概述

在您的 RNA 测序实验中，是否对灵敏度和特异性有更高的要求？您的测序反应中是否有起始 RNA样本量非常低的情况？为了应对这些挑战，我们的二代测序 RNA 文库制备试剂盒在流程的每一步上都进行了配方的优化，使文库产量得到成倍的增长、起始样本量要求更低、PCR 循环数更少。这些试剂盒工作流程经过改进，更加适合于自动化操作。既有定向（链特异性，使用“dUTP 方法”）文库制备，又有非定向文库制备，还可提供 SPRISelect 磁珠进行片段筛选和纯化。

NEB代理 , RNA 试剂 , 二代测序 RNA 文库制备试剂

NEB代理,RNA 试剂,NEBNext Ultra II RNA文库制备试剂盒,#E7775L

产品资料 – RNA 试剂 – 二代测序 RNA 文库制备试剂

NEBNext Ultra II RNA文库制备试剂盒 – 含纯化磁珠 #E7775L 96次反应

#E7775S 24次反应

概述

NEB代理 , RNA 试剂 , 二代测序 RNA 文库制备试剂

NEB代理,RNA 试剂,RNA 分离和检测,EpiMark® N6-甲基化腺嘌呤富集试剂盒

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 分离和检测

EpiMark^® N6-甲基化腺嘌呤富集试剂盒

#E1610S 20次反应

特性

 在免疫沉淀实验流程中富集经 m6A修饰的 RNA
 经富集的 RNA 可直接用于 NGS 或RT-qPCR

概述

EpiMark^® N6-甲基腺嘌呤富集试剂盒包含一个 N6-甲基腺苷（m6A）兔源单克隆抗体。试剂盒中含有2个对照 RNA，一个含有 m6A 修饰（Gaussia 荧光素酶），另一个不含 m6A 修饰 (Cypridina 荧光素酶)用于监测富集和消耗程度。其中，Gluc RNA 对照在转录过程中需 20% 的 m6ATP 和 80% 的 ATP。

该试剂盒可用在免疫沉淀实验流程中富集经 m6A 修饰的 RNA，可用于 NGS 或 RT-qPCR 等下游实验。在片段化的 RNA 样本中，经修饰的 RNA 可与 N6-甲基腺苷抗体结合，从而被于抗体结合的 Protein G 磁珠富集。再经多轮洗涤与纯化步骤后，富集的 RNA 洗脱于无核酸酶水中，可用于进一步的分析。

EpiMark N6-甲基化腺嘌呤富集试剂盒组分：

– N6-甲基腺苷抗体

– m6A 修饰的对照 RNA （100nM）

– 无修饰的对照 RNA（100 nM）

上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375

有关该产品特性和应用的上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375。

N6-甲基腺苷抗体是由 Cell Signaling Technology, Inc.生产，由 New England Bio-labs, Inc. 销售。

NEB代理,RNA 试剂,RNA 分离和检测,p19 siRNA结合蛋白#M0310S

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 分离和检测

p19 siRNA结合蛋白（停产）

#M0310S 1,000 units

停产通知

产品于 2020年 1 月 2 日停产.

特性

 与 siRNA 结合效率高
 可通过几丁质磁珠亲和纯化 siRNA

概述

p19 siRNA 结合蛋白分子量为 19 kDa，来自于植物香石竹意大利环斑病毒（CIRV）。该蛋白与 siRNA 具有纳摩尔级的亲和力，和 3´ 末端有 2 个核苷酸突出、5´ 末端是磷酸基的 21 nt siRNA 结合力高于其它片段。该蛋白是以二聚体的形式与 siRNA 结合，结合力取决 RNA 片段大小，而与 RNA 序列无关。如果 siRNA 的长度增加 4 个碱基，则与蛋白的亲和力会下降约 100 倍。当 p19 siRNA 结合蛋白在植物体内表达时，能抑制 RNAi 作用。

来源

p19 siRNA 结合蛋白以融合蛋白的形式在大肠杆菌中克隆和表达。其 N 末端带有 MBP（麦芽糖结合蛋白），C 末端带有 CBD（几丁质结合蛋白）。

质保声明

无 DNase、RNase 和磷酸酶污染。产品经纯化，琼脂糖凝胶电泳后 EB 染色检测，无 DNA 或 RNA 污染。

单位定义

1 单位指 25℃ 条件下，1 小时内结合 10 ng 的 siRNA 所需要的蛋白量。

分子量

67 kDa。

浓度

10,000 units/ml。

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有关该产品特性和应用的上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375。

NEB代理,RNA 试剂,RNA 分离和检测,Oligo d(T)25 纤维素珠

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 分离和检测

Oligo d(T)₂₅ 纤维素珠（停产，有替代） #S1408S 250 mg

停产通知

产品于 2020 年 3 月 31 日停产。纯化带有 poly A 的mRNA 时，建议替代产品为：Oligo d(T)25 磁珠（NEB＃S1419S）； NGS 应用时，建议替代产品为：NEBNext Poly(A) mRNA 磁性分离模块（NEB＃E7490）。

概述

该产品是能用于从 Poly A 区域中分离 mRNA 的亲和基质。这种基质包含有与纤维素珠共价交联的 Oligo (dT)₂₅。

支持介质

用分光光度计来测定每克纤维素结合的 poly rA (M.W.＞100,000) 的量。

结合容量

＞ 400 A₂₆₀ units/g。

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NEB代理,RNA 试剂,RNA 分离和检测,Oligo d(T)25 磁珠,#S1419S

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 分离和检测

Oligo d(T)25 磁珠

#S1419S 25 mg

概述

该产品是用于从细胞裂解液和组织中小规模分离 mRNA 的亲和基质。此分离是通过共价偶联的 Oligo d(T)₂₅ 与大部分真核生物 mRNA 中携带的 ploy(A) 区域杂交实现的。既可用于细胞裂解后 mRNA 的直接分离，也可用于从先分离得到的总 RNA 中进行第二轮纯化。磁珠分离技术还能放大体系并将分离后的 mRNA 终体积进行调整，从而得到较小体积的完整 RNA 洗脱液，不需要再从洗脱液中沉淀分离的 mRNA。磁珠能再生 3 次，实验者可选择将分离到的 mRNA 洗脱或直接以结合 mRNA 上的 d(T)₂₅ DNA 为引物来进行 cDNA 第一链合成。

支持介质

1 μm 的无孔超顺磁性微粒。

结合容量

1 mg Oligo d(T)₂₅磁珠能结合 10 μg poly(A)⁺ RNA。

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NEB代理 , RNA 试剂 , RNA 分离和检测,链霉亲和素磁珠

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 分离和检测

链霉亲和素磁珠

#S1420S5 ml (20 mg)

概述

链霉亲和素磁珠由 1 μm 超顺磁微粒与高纯度链霉亲和素共价结合而成。磁珠可用于捕获生物素标记的底物，包括抗原、抗体和核酸。由于生物素-链霉亲和素的相互作用力很强，并且链霉亲和素的非特异性结合率很低，被捕获的底物作为配体可完全满足后续实验要求，包括 mRNA 的分离和一抗、二抗的获得。

磁珠存储于 0.1% 的 BSA、0.05% 的 Tween-20 和 0.05% 的 NaN₃ 磷酸缓冲液（PBS）（pH 7.4）中，形成 4 mg/ml 的悬浮液。

支持介质

直径 1 μm 的无孔超顺磁性微粒。

结合容量

1 mg 磁珠可结合 1000 pmol 以上的游离生物素和 500 pmol 以上的单链 25 bp 生物素标记的寡核苷酸。

上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375

有关该产品特性和应用的上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375。

NEB代理,RNA 试剂,RNA 分离和检测,mRNA 磁性分离试剂盒

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 分离和检测

mRNA 磁性分离试剂盒

#S1550S 25 次分离反应

可单独出售的组份

Oligo d(T)₂₅ 磁珠

#S1419S 25 mg

特性

 适用于自动化、高通量分离

 无需有机溶剂

 无需从洗脱液中沉淀 poly(A)+ 转录物

 1 小时内即可获得完整 poly(A)+ RNA
 无基因组 DNA 污染

概述

NEB 的 mRNA 磁性分离试剂盒可用于从细胞或组织中分离完整的 poly(A)⁺ RNA，此过程不需要酚和其它有机溶剂。该技术的原理是将 Oligo d(T)₂₅与 1 μm 顺磁性磁珠耦联后，以此为固相支持物直接结合 poly(A)⁺ RNA。利用此方法可以进行多个样本的分离，也适用于自动化高通量分离。此外，磁性分离技术可得到较小体积的完整 RNA 洗脱液，不需要再从洗脱液中沉淀 poly(A)⁺转录物。因此在 1 小时内就能分离得到体现原始样品中 mRNA 分布特性的完整 poly(A)⁺RNA。Oligo d(T)₂₅ 磁珠可再生 3 次，实验者可选择将分离到的 mRNA 洗脱下来或直接以结合于 mRNA 上的 dT DNA 为引物来进行 cDNA 第一链合成。

NEB代理 , RNA 试剂 , RNA 分离和检测

分离 poly(A)⁺ RNA 分离试验显示分离结果一致性好，分离范围宽：将细胞数递减的 HEPG2 细胞（ 5 X 10⁵ – 1 X 10³），直接在微量滴定板上进行裂解/结合，然后加入磁珠分离 mRNA。使用 ProtoScript M-MuLV 第一链 cDNA 合成试剂盒（NEB #E6300），以 oligo(dT) 为引物将 mRNA 的十分之一反转录成 cDNA，并使用特异引物 qPCR 检测低丰度的管家基因；肽基脯氨酰异构酶。

mRNA 磁性分离试剂盒包括

– Oligo d(T)₂₅磁珠

– 裂解/结合缓冲液
– 洗涤缓冲液 I、 II 、III 和洗脱缓冲液

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NEB代理,RNA 试剂,polyA Spin™ mRNA 分离试剂盒,#S1560S

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 分离和检测

polyA Spin™ mRNA 分离试剂盒（停产，有替代）

#S1560S 8 次分离反应

停产通知

polyA Spin 试剂盒组份

– 预装的 Oligo d(T)₂₅ －纤维素珠柱

– 无菌微量离心回收管
– 洗涤缓冲液、洗脱缓冲液、糖原、NaCl 和 NaOAc

概述

PolyA Spin™ mRNA 分离试剂盒能快速、简便地从真核细胞总 RNA 中分离全长 poly(A)⁺ mRNA。poly(A)⁺ RNA 通过离心柱进行亲和层析，离心柱是用 NEB 的 Oligo(dT)₂₅-纤维素珠（NEB #S1408）预先填充。该纤维素珠具有较强结合容量和超强结合力，是亲和层析 ploy(A)⁺ RNA 的最佳选择，仅40 分钟即可从多种真核细胞裂解液或样本（包括真菌、植物及动物组织）的总 RNA中获得完整的 mRNA。

该试剂盒提供的试剂可满足分离、沉淀8 个样品中的 poly(A)⁺ RNA，每个样品总 RNA 的量可高达 1 mg。分离得到的 RNA 可用于体外翻译实验、cDNA 文库制备、Northern 杂交、消减杂交或差异显示等。

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NEB代理,RNA 试剂,RNA Marker 和 Ladder,RNA 上样染料

产品资料 – RNA 试剂 – RNA Marker 和 Ladder

RNA 上样染料（2X）

#B0363S 4 ml

概述

RNA 上样染料为 2X 预混液，适用于变性和非变性聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）/琼脂糖凝胶。

质保声明

无 DNA 核酸内切酶、外切酶及 RNase 污染。

RNA 上样染料组成

1X RNA 上样染料：

47.5% 甲酰胺，0.01% SDS，0.01% 溴酚蓝，0.005% 氟代二甲苯和 0.5 mM EDTA。

NEB代理 , RNA 试剂 , RNA Marker 和 Ladder,ssRNA Ladder

产品资料 – RNA 试剂 – RNA Marker 和 Ladder

ssRNA Ladder

#N0362S 25 gel lanes

概述

NEB 提供 17-9,000 个碱基的一系列 RNA Marker 和Ladder。ssRNA Ladder 作为 RNA 分子量标准适用于变性或非变性胶，两种 ssRNA Ladder 均随产品附带 2X 上样缓冲液，并提供双倍浓度的片段作为参考条带。microRNA Marker 为即用型，溶于变性缓冲液中，是聚丙烯酰胺凝胶或 Northern blot 中分子量 marker 的最佳选择，用 SYBR-Gold（Molecular Probes 公司）染色可获得最佳效果，同时附带的还有 3´ 生物素标记的 21-mer 寡核苷酸探针，它同样可被 [γ-32P] ATP 和 T4 PNK 标记（NEB #M0201）。dsRNA Ladder 在非变性聚丙烯酰胺和琼脂糖凝胶电泳中均适合作为 dsRNA 和 RNAi 分析的分子量标准。

NEB代理 , RNA 试剂 , RNA Marker 和 Ladder

浓度

低分子量 ssRNA Ladder 和 dsRNA Ladder 的浓度均为 500 μg/ml；ssRNA Ladder 的浓度为 2,000 μg/ml；MicroRNA Marker 浓度为 12 ng/μl。

NEB代理,RNA 试剂,RNA Marker 和 Ladder,dsRNA Ladder #N0363S

产品资料 – RNA 试剂 – RNA Marker 和 Ladder

dsRNA Ladder

#N0363S 25 gel lanes

概述

NEB 提供分子量大小从 17-9,000 个碱基的一系列 RNA Ladders 和 Markers。低分子量 ssRNA Ladder 适用于变性和非变性凝胶电泳中 RNA 分子量标准。两种 ssRNA Ladder 均提供 2X 上样缓冲液，亮度加倍的条带可作为参照带。microRNA Marker 已溶于即用型变性上样液中，可用作变性聚丙烯酰胺凝胶和 Northern 杂交中分子量标准，使用 SYBR-Gold 染料染色效果最佳。随 Marker 提供 3´ – 生物素标记的 21-mer 寡核苷酸探针，可以用 γ-32P- ATP 和 T4 PNK 标记（NEB #M0201）进行标记。dsRNA Ladder 适用于变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖电泳，作为 dsRNA 和 RNAi 分析的分子量标准。

NEB代理 , RNA 试剂 , RNA Marker 和 Ladder

浓度

低分子量 ssRNA Ladder 和 dsRNA Ladder 的浓度均为 500 μg/ml；ssRNA Ladder 的浓度为 2,000 μg/ml；MicroRNA Marker 浓度为 12 ng/μl。

NEB代理,RNA 试剂,RNA Marker 和 Ladder,#N0364S

产品资料 – RNA 试剂 – RNA Marker 和 Ladder

低分子量 ssRNA Ladder

#N0364S 100 gel lanes

产品概述

• 分子量范围：50 bp – 1,000 bp

• 与变性聚丙烯酰胺-尿素凝胶、变性琼脂糖凝胶和非变性琼脂糖凝胶兼容

• 易于识别的参照带（300 bp）

低分子量 ssRNA Ladder 由 6 组 RNA 分子组成，这些 RNA 分子由 6 组线性 DNA 模板体外转录制备。RNA 的分子量大小分别为 1000、500、300、150、80 和 50 bp，其中 300 bp 条带作为参照带，有双倍的亮度。这个产品适用于作为变性聚丙烯酰胺-尿素凝胶、变性或非变性琼脂糖凝胶的 ssRNA 分子量标准。

使用建议

该产品不用于精确定量 ssRNA 的质量。

变性琼脂糖凝胶 VS 非变形琼脂糖凝胶

通常的做法是在完全变性的琼脂糖凝胶上进行 RNA 电泳，如含甲醛琼脂糖凝胶（1）。然而，在许多情况下，可能在非变性琼脂糖凝胶上进行 RNA 电泳，以获取相应数据。实际工作中，RNA 电泳需要至少 3 个小时，这期间 RNA 样品在变性缓冲液中一直处于变性状态（2，3）。使用非变性琼脂糖凝胶可以避免有毒化学品相关的问题，以及对甲醛凝胶染色和印迹时遇到的困难。

样品制备

低分子量 ssRNA Ladder 也兼容基于甲醛的上样缓冲液。

1 µg/lane，2.0% TBE 琼脂糖凝胶

产品组分与保存条件

组分名称保存温度（°C）体积浓度

低分子量 ssRNA Ladder -20 1 x 0.05 ml 不适用

2X RNA 上样缓冲液 -20 1 x 1 ml 1 x 1 ml

保存缓冲液

20 mM 柠檬酸钠

1 mM EDTA

pH 6 @ 25°C

NEB代理,RNA 试剂,RNA Marker 和 Ladder,microRNA Marker#N2102S

产品资料 – RNA 试剂 – RNA Marker 和 Ladder

microRNA Marker

#N2102S 100 gel lanes

概述

NEB代理 , RNA 试剂 , RNA Marker 和 Ladder

浓度

低分子量 ssRNA Ladder 和 dsRNA Ladder 的浓度为 500 μg/ml；ssRNA Ladder 的浓度为 2,000 ug/ml；MicroRNA Marker 浓度为 12 ng/μl。

NEB代理 , RNA 试剂 , RNA Marker 和 Ladder,miRNA 通用克隆接头

产品资料 – RNA 试剂 – RNA Marker 和 Ladder

miRNA 通用克隆接头

#S1315S0 83 nmol

概述

5zz端腺苷化、3´ 端封闭的寡核糖核苷酸可用于 Bartel 方法中短片段 RNA 分子的克隆（1）。RNA 连接酶可以识别“活化”的腺苷化寡核糖核苷酸，无需 ATP，即可将其 5´ 端与第二条单链 RNA 的 3´ 端 OH 共价连接。利用此 5´ 端腺苷化、3´ 端封闭的寡核糖核苷酸，加入 T4 RNA 连接酶 2，截短型、T4 RNA 连接酶 2，截短型 K227Q 或 T4 RNA 连接酶 1（有/无 ATP），只能与核酸混合物中的目的寡核苷酸连接。

腺苷化的 DNA 寡核苷酸序列是：

5´ -rAppCTGTAGGCACCATCAAT-NH₂ 3´ 。

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(1) Lau et al. (2001) Science, 294, 858–856.

RNA清洁珠

基本信息

产品名称	RNA清洁珠
英文名称	RNA Clean Beads
运输条件	冰袋运输

一般描述

产品描述

该磁珠适用于RNA片段快速分选和回收。磁珠经过磁性分离和乙醇清洗，低盐洗脱缓冲液或无核酸酶水洗脱的高纯度RNA片段不含有核苷酸、引物、酶和盐等污染物，可被直接用于下游应用，例如：测序、杂交、RT-PCR反应等，并可应用于手动或自动液体操作设备。

产品特点

1、回收率可达80%以上；

2、操作快速简单，20min即可完成整个操作流程，无需离心。

使用建议

1. RNA回收效率低或者没有？

1）RNA发生降解。操作过程要严格的确保无RNase的污染。

2）样本质量低。

3）洗脱效率低。80%乙醇需现用现配，放置时间过久，可能由于乙醇挥发，造成浓度降低，影响洗脱效果；

4）洗脱溶液孵育时间过短。磁珠应于洗脱液中按规定时间孵育，常规为5 min；

5）磁珠过度干燥。切勿室温干燥磁珠大于10 min，过度干燥将降低洗脱效率。

2. 纯化RNA中有磁珠残留？

1）磁珠分离时间过短或磁力器磁力较弱。增加分离时间或选用磁力强的磁力器，确保磁珠被磁力器全部吸附；

2）洗脱步骤中，吸取上清速度过快。缓慢吸取上清，注意切勿吸取磁珠。

3. 如何检测回收后RNA的纯度？

可以通过测定A260/A280的比值来评估。

保存条件

4℃保存。

Product Description

The magnetic beads are suitable for rapid sorting and recovery of RNA fragments. Magnetic beads are magnetically separated and washed with ethanol. The high-purity RNA fragments eluted with low-salt elution buffer or nuclease-free water do not contain contaminants such as nucleotides, primers, enzymes, and salts, and can be directly used in downstream applications. For example: sequencing, hybridization, RT-PCR reaction, etc., and can be applied to manual or automatic liquid handling equipment.

Features

1. The recovery rate can reach more than 80%;

2. The operation is fast and simple, and the entire operation process can be completed in 20 minutes without centrifugation.

Recommendations

1. Inefficient or no RNA recovery?

1) RNA is degraded. The operation process should be strictly ensured that there is no RNase contamination.

2) The sample quality is low.

3) The elution efficiency is low. 80% ethanol needs to be used and prepared immediately. If it is stored for a long time, the concentration may decrease due to the volatilization of ethanol, which will affect the elution effect;

4) The incubation time of the elution solution is too short. The magnetic beads should be incubated in the eluent for a specified time, usually 5 min;

5) Magnetic beads are over-dried. Do not dry the beads at room temperature for more than 10 minutes, as excessive drying will reduce the elution efficiency.

2. Are there magnetic beads remaining in the purified RNA?

1) The separation time of the magnetic beads is too short or the magnetic force of the magnetizer is weak. Increase the separation time or choose a magnetizer with strong magnetic force to ensure that the magnetic beads are all adsorbed by the magnetizer;

2) During the elution step, the supernatant was aspirated too fast. Aspirate the supernatant slowly, taking care not to aspirate the beads.

3. How to check the purity of recovered RNA?

It can be assessed by measuring the ratio of A260/A280.

Storage Conditions

Store at 4°C.

储存温度	2-8°C储存
品牌	金畔生物

Ribonuclease A,RNase A核糖核酸酶,RNA酶

Ribonuclease A （RNase A）核糖核酸酶，缩写RNase A，常常用在质粒DNA或基因组DNA制备过程中去除RNA，此制备过程中DNase酶活性的存在与否是需要重视的污染之一，可采用水浴煮沸这种传统方法来灭活DNase活性。也可以用来去除蛋白样品中的RNA污染。另外，RNase A还可用于RNA序列分析，RNA酶保护分析等实验

Ribonuclease A (RNase A) from Bovine Pancreas

核糖核酸酶A，来源于牛胰腺

Ribonuclease 3’-pyrimidinooligonucleotidohydrolase 核糖核酸3′-嘧啶寡核苷酸水解酶； Ribonuclease I 核糖核酸酶 I；Pancreatic ribonuclease胰核糖核酸酶；Ribonuclease A (RNase A) from Bovine Pancreas；EC No: 3.1.27.5；CAS NO：9001-99-4；

产品描述

核糖核酸酶A，英文名Ribonuclease A，缩写RNase A，CAS NO：9001-99-4，一种核糖核酸内切酶（endoribonuclease），特异性识别嘧啶类核苷酸3’-核糖磷酸基团，如序列pG-pG-pC-pA-pG经切割产生pG-pG-pCp 和A-PG，当切割单链RNA时活性zui高，推荐工作浓度为1-100μg/ml，兼容于各种反应体系。低盐浓度（0-100mM NaCl），可切割单链RNA，双链RNA，以及RNA-DNA杂交形成的RNA链。高盐浓度（≥0.3M），RNase A仅特异性切割单链RNA。RNase A不会水解DNA，因DNA缺少形成环形中间体必需的2’-OH。

核糖核酸酶A，英文名Ribonuclease A，缩写RNase A，常常用在质粒DNA或基因组DNA制备过程中去除RNA，此制备过程中DNase酶活性的存在与否是需要重视的污染之一，可采用水浴煮沸这种传统方法来灭活DNase活性。也可以用来去除蛋白样品中的RNA污染。另外，RNase A还可用于RNA序列分析，RNA酶保护分析等实验。

产品特性

1） CAS NO：9001-99-4

2）来源：牛胰腺

3）比活力：≥50 Kunitz units/mg

4） zuiJIA工作pH：7.6（pH 6.0-10.0有活性）

5） zuiJIA工作温度：60℃（15-70℃有活性）

6）激活剂：钠盐、钾盐等

7）抑制剂：核酸酶抑制剂（RNase inhibitor）

8）稳定性：RNase在加热和去污剂条件下都很稳定。RNase A溶液可耐受温度高达100℃。于此高温下，pH 2.0-4.5范围内溶液稳定性zui高。

9）溶解性：溶于水（10mg/ml）

保存与运输方法

保存：-20℃干燥冻存，3年稳定。

运输：冰袋运输。

使用方法

储存液制备

【注意】：此为RNase A储存液配制的常用方法之一，也可以根据实验室传统的方法，或者参考文献资料使

用其他方法制备储存液（如直接溶于10mM Tris-HCl, pH 7.4）。

取适量RNase A溶解于10mM醋酸钠（pH 5.2），配制成10mg/ml RNase A 储存液；
100℃加热15min，之后冷却到室温，然后加入1/10体积的1M Tris-HCl（pH 7.4），调其pH至7.4（例如，5ml 10mg/ml的RNase 储存液加入500μl 1M Tris-HCl, pH7.4）；
分装成单次用量于-20℃冻存，可稳定保存1年。

【注意】：在中性条件下煮沸RNase A溶液，会有RNase沉淀形成；在更低的pH下将其煮沸，如有沉淀可以观察到，可能由于蛋白杂质存在造成。煮沸之后若发现沉淀，可通过高速离心（13,000 rpm）去除杂质，然后分装冻存。

使用浓度

【注意】：本品应用非常广泛，具体的使用方法和工作浓度请根据实验经验或参考文献来调整。

RNase A常用在质粒DNA制备中去除RNA污染，在此应用中，可直接加入DNase-free RNase A储存液，使其终浓度为10μg/ml。

产品名称	产品编号	规格	储存	价格
Ribonuclease A (RNase A) from Bovine Pancreas 核糖核酸酶A，来源于牛胰腺	MF0203-100MG	100mg	-20ºC	340
	MF0203-500MG	500mg	-20ºC	1450
	MF0203-1000MG	1g	-20ºC	2300

相关产品：

产品名称	产品编号	规格	储存	价格
Pronase E 链霉蛋白酶E	MF0206-100MG	100mg	-20ºC	300
Pronase E 链霉蛋白酶E	MF0206-250MG	250mg	-20ºC	650
Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas 脱氧核糖核酸酶I，来源于牛胰腺	MF0401-15KU	15KU	-20ºC	380
Proteinase K, Molecular Biology Grade 蛋白酶K	MF0201-100MG	100mg	+4ºC	165
	MF0201-500MG	500mg	+4ºC	700
	MF0201-1000MG	1g	+4ºC	1200

注意事项

RNase A会吸附到玻璃表面，操作中尽量避免此种情况导致的损失。可将配制好的溶液装入塑料离心管。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

Ribonuclease A （RNase A）核糖核

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