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Dojindo,碱性磷酸酶标记试剂盒-NH2/3/LK12,NH2 反应性 ALP 是该试剂盒的组成部分

碱性磷酸酶标记试剂盒-NH2主要用于制备碱性磷酸酶标记的IgG用于酶免疫分析（EIA）和制备碱性磷酸酶标记的抗原用于竞争性EIA。 NH2 反应性 ALP 是该试剂盒的组成部分，可与蛋白质或其他分子的氨基反应（图 1-15）。 该试剂盒包含标记过程所需的所有试剂，包括存储缓冲液。 NH2 反应性 ALP 无需任何激活过程即可与靶分子形成共价键。 当碱性磷酸酶标记的 IgG 用于 EIA 时，NH2 反应性 ALP 的标记效率高到足以消除标记后的任何纯化过程。 如果标记后需要高纯度偶联物，只需使用亲和柱或凝胶渗透柱即可。 标记小分子时，可以使用该套件中包含的过滤管去除多余的分子。

Fig. 1 IgG labeling reaction of NH2-reactive alkaline phosphatase

Precaution♦ The molecular weight of the protein to be labeled with this kit should be greater than 50,000.♦ The molecular weight of the small amine compound to be labeled with this kit should be smaller than 5,000.♦ IgG or alkaline phosphatase-conjugated IgG is always on the membrane of the filtration tube during the labeling process.♦ If the IgG solution contains other proteins with molecular weight larger than 10,000, such as BSA or gelatin, purify the IgG solution prior to labeling alkaline phosphatase with this kit. IgG solution can be purified by IgG Purification Kits (not included in this kit).♦ If the IgG solution contains small insoluble materials, centrifuge the solution and use the supernatant for the labeling.

1. B. Pandey, A.V. Demchenko, K.J. Stine, “Nanoporous gold as a solid support for protein immobilization and development of an electrochemical immunoassay for prostate specific antigen and carcinoembryonic antigen”, Microchim Acta., 2012, 179, (1-2), 71.2. M. Watanabe, I. Takemasa, N. Kaneko, Y. Yokoyama, E. Matsuo, S. Iwasa, M. Mori, N. Matsuura, M. Monden, and O. Nishimura, “Clinical significance of circulating galectins as colorectal cancer markers”, Oncol. Rep.., 2011, 25, (5), 1217.3. Y. Matsumae, Y. Takahashi, H. Shiku and T. Matsue, “Quantitative Real‐Time Monitoring of Antibody‐Induced Internalization of Epidermal Growth Factor Receptor on Single Living Mammalian Cells Using Scanning Electrochemical Microscopy”, ChemElectroChem., 2018, 5, (20), 3096.

Western blotting

Fig. 2 Western blotting of Alkaline phosphatase-conjugated antibody prepared by Alkaline phosphatase Labeling Kit-NH2.1: antigen 50 ng2: antigen 10 ng3: antigen 2 ng

A target protein (antigen) was detected with ALP-labeled antibody prepared by Alkaline Phosphatase Labeling Kit-NH2 after it was run with SDS-PAGE and transferred to a nitrocellulose membrane. A target protein was detected with a chemiluminescence substrate for alkaline phosphatase after the treatment with 25,000 times dilution of ALP-labeled primary antibody.

我可以将此套件用于 Fab 或 Fab Elabeling 吗？
是的，您可以使用此套件标记 Fab 和 Fab E。偶联物的回收率应在 80% 以上。
我可以将此试剂盒用于其他蛋白质或肽吗？
是的，如果分子量高于 50,000 或低于 5,000，并且它具有反应性伯氨基或仲氨基。如果分子量高于 50,000，按照 IgG 的标记方案进行，LK12-10 使用 0.5-1 nmol 的样品蛋白。如果分子量低于 5,000，请遵循小分子的标记协议。如果分子量低于 50,000 但高于 5,000，请联系我们的客服 info@dojindo.com 或 1-877-987-2667 了解更多信息。
我可以使用该试剂盒标记寡核苷酸或寡肽吗？
是的，如果分子量小于 5,000，并且它具有反应性伯氨基或仲氨基。遵循小分子的标记协议。
可以用 LK12-10 标记的 IgG 的最低量是多少？
最小量为 50 μg。 50 μg 和 200 μg IgG 的灵敏度和背景没有显着差异。尽管使用该试剂盒仍可标记 10 μg IgG，但背景会更高。
每个 IgG 引入多少碱性磷酸酶分子？
每个 IgG 的平均碱性磷酸酶分子数为 1 至 3。
与 IgG 标记反应后，未结合的 NH2 反应性碱性磷酸酶是否仍有活化酯？
不会。NHS 在反应过程中完全水解。
NH2 反应性碱性磷酸酶在标记反应过程中会形成寡聚体吗？
不会。由于 NH2 反应性碱性磷酸酶的所有反应性氨基都被封闭，因此不可能发生低聚反应。
我必须使用套件中包含的存储缓冲液吗？
不，您不必使用套件中的存储缓冲液。您可以选择适合您实验的任何类型的缓冲液。
储存缓冲液是否包含动物产品或聚合物？
不，储存缓冲液不含任何动物产品、聚合物或重金属离子。