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 MTT 噻唑兰（细胞增殖和毒性检测）：噻唑兰（Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide, 简称MTT，CAS：298-93-1），也称作溴化噻唑蓝四氮唑，是一种黄色染料，已经广泛替代传统的台盼蓝染色法或者放射性同位素插入法，用来检测细胞活力、细胞增殖以及毒性分析。

MTT 噻唑兰（细胞增殖和毒性检测）

MTT 噻唑兰，WST-1，WST-8，CCK；Cell Proliferation细胞增殖；LDH 乳酸脱氢酶；CAS：298-93-1；

产品信息

产品名称	产品编号	CAS NO.	规格
MTT 噻唑兰	MX3004-250MG	298-93-1	250mg
MTT 噻唑兰	MX3004-1000MG	298-93-1	1g

产品描述

噻唑兰（Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide, 简称MTT，CAS：298-93-1），也称作溴化噻唑蓝四氮唑，是一种黄色染料，已经广泛替代传统的台盼蓝染色法或者放射性同位素插入法，用来检测细胞活力、细胞增殖以及毒性分析。MTT是一种可接受氢离子的化合物染料，带正电荷，具有细胞膜渗透性。活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能够将外源进入的MTT还原成为水不溶性的深蓝色MTT-甲臜结晶，而死细胞不具此功能。甲臜结晶不能穿透细胞膜，因此沉积在处于增殖且未受损伤的细胞内。甲臜结晶可用DMSO或者酸化的异丙醇溶解，酶标仪测定的570 nm吸光度能反映甲臜的生成量。而甲臜的生成量与活细胞数目成正比，因此可用来评估细胞存活状况。MTT也可用在免疫组化和免疫细胞化学研究，也可用于NAD水平检测。MTT经快速还原为甲臜后，能够螯合镍，铜和钴离子。钴螯合物可参与细胞氧化系统。

产品特性

1）   CAS NO：298-93-1

2）   英文同义名：3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium Bromide; Methylthiazolyldiphenyl- tetrazolium bromide; Thiazoyl blue tetrazolium bromide;

3）   中文同义名：溴化噻唑蓝四氮唑；3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四氮唑噻唑蓝；

4）   分子式：C₁₈H₁₆N₅SBr

5）   分子量：414.3 g/mol

6）   外观：淡黄色至橙色粉末

7）   纯度：≥98%

8）   溶解性：溶于水（5 mg/ml）

9）   化学结构图：

注意事项

1. 溶解甲臜结晶的有机溶剂具有毒性，使用时注意防护。
2. MTT有致癌性应小心操作；MTT溶液4℃保存不可超过1周，否则会发生降解并导致检测结果错误。
3. MTT法属于半定量检测，只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞数。用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT吸光度在0-0.7范围内。
4. 建议用平底的酶标板来做MTT检测，仅当要求细胞生长量比较高的情况下首推组织培养级的培养板。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法整理内容

细胞生长的培养条件会影响检测结果，因此进行MTT检测时需考虑这些条件，包括：培养时间，传代次数以及生长培养基的成分等。一般情况，48-72h培养时间下，zui初铺板的细胞密度可控制在5000-10,000/孔。

注意：zui终检测的培养液内含有酚红会严重影响检测结果。推荐MTT检测时细胞培养在无酚红环境下，也可以在进行MTT孵育的时候改用无酚红培养液。

A．储存液配制

B．MTT细胞增殖检测以96孔板为例

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产品名称	产品编号	CAS NO.	规格
MTT 噻唑兰	MX3004-250MG	298-93-1	250mg
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EdU 5-乙炔基-2’–脱氧尿苷	MX4211-50MG	61135-33-9	50mg
Alamar Blue阿尔玛蓝	MX3006-1ML	N/A	1ml (100T)
WST-1细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒	MX3007-500T	150849-52-8	500T
CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂	MX3008-1ML	N/A	1ml (100T)

MTT 噻唑兰（细胞增殖和毒性检测）

MTT 噻唑兰（细胞增殖和毒性检测）

 

本MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒（MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit）采用*的甲臜溶解液，能够非常好的完全甲臜结晶，使检测本底低、灵敏度高，且线性范围宽。

MTT Cell Proliferation Assay Kit

MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

MTT 噻唑兰；台盼蓝染色法；CCK-8 细胞增殖和毒性检测试剂盒；WST-8；CAS：298-93-1；

产品名称	产品编号	规格
MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒	MX3005-500T	500T
	MX3005-1000T	1000T

噻唑兰（Methylthiazolyldiphenyl–tetrazolium bromide, 简称MTT，CAS：298-93-1），也称作溴化噻唑蓝四氮唑，是一种黄色染料，已经广泛替代传统的台盼蓝染色法或者放射性同位素插入法，用来检测细胞活力、细胞增殖以及毒性分析。MTT是一种可接受氢离子的化合物染料，带正电荷，具有细胞膜渗透性。活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能够将外源进入的MTT还原成为水不溶性的蓝紫色MTT-甲臜结晶，而死细胞不具此功能。甲臜结晶不能穿透细胞膜，因此沉积在处于增殖且未受损伤的细胞内。在特定溶剂的作用下完全溶解甲臜结晶，然后通过酶标仪测定570 nm附近的吸光度。细胞增殖越多，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。

本MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒（MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit）采用*的甲臜溶解液，能够非常好的完全甲臜结晶，使检测本底低、灵敏度高，且线性范围宽。

产品组分

组分编号	组分名称	保存方法	货号（规格）
			MX3005–500T	MX3005–1000T
MX3005-A	MTT Solution MTT溶液（5mg/ml）	-20℃避光	5ml	2×5ml
MX3005-B	Formazan Solvent 甲臜溶解液	-20℃或室温	60ml	2×60ml

注意事项

• 使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发的问题。①由于96孔板周围一圈容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加PBS、无菌水或培养液；②可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方以缓解蒸发。
• MTT溶液在低温下会凝固，请置于室温或20-25℃水浴温育片刻至全部融解后再使用。
• MTT溶液需尽量减少反复冻融的次数，若单次用量很少，建议根据需求分装后置于-20℃保存。MTT溶液颜色如变为灰绿色，请勿使用。

4） 甲臜溶解液当置于-20℃保存需解冻使用，或室温保存产生沉淀，可置于37℃水浴孵育以促进溶解，并且必须全部溶解后混匀使用。

5） 加入甲臜溶解液后请轻轻混匀，但需注意避免产生泡沫。亦可借助显微镜观察甲臜是否完全溶解。

6） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法（以96孔板为例）

• 收集对数生长期的细胞，用含血清的培养液配制成单细胞悬液，调整细胞密度，以每孔3000-10,000个细胞接种到96孔板，每孔体积100µl，培养板的边缘孔用无菌PBS填充。设置空白孔和对照孔。

【注①】：通常情况，细胞增殖实验每孔加3000个细胞，细胞毒性实验每孔加6000个细胞。具体每孔所用细胞数目，需根据细胞大小、增殖速度的快慢等来决定。

【注②】：需设置空白孔（不含细胞，含培养液、MTT和甲臜溶解液），对照孔（含细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT和甲臜溶解液），每组设置3个复孔。

• 37℃，5% CO₂继续培养或根据实验具体需求进行培养，一般培养6–24h。
• 根据实验具体需求，给予0-20µl干预药物处理，37℃，5% CO₂继续培养至合适时间。
• 小心吸掉培养液，每孔加入100µl新鲜培养液，再加入10µl MTT溶液（5 mg/ml），加样时尽量勤换枪头，控制加量误差。继续培养4h。
• 小心吸掉培养液，每孔加入110µl 甲臜溶解液，置摇床上低速振荡10min，使得结晶物充分溶解。可在光学显微镜下观察结晶物是否完全溶解。如果紫色结晶较小或较少，溶解的时间会短些；如果紫色结晶较大或较多，溶解的时间会长些。
• 在酶标仪上摇匀后，选择570nm，测定吸光度。记录结果，比色以空白调零。

【注①】：对于细胞毒性检测，以未经药物处理细胞的OD值为好的，然后计算药物处理细胞所占的比率（x），公式如下：OD（未经药物处理细胞）/OD（药物处理细胞）好的。然后建立直方图。

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