标签：HiLyte Fluor 555标记试剂盒-NH2/3/LK14

Dojindo,HiLyte Fluor 555标记试剂盒-NH2/3/LK14

HiLyte Fluor* 555 Labeling Kit-NH2 主要用于制备红色荧光标记的蛋白质，例如用于免疫染色的 IgG，以及用于示踪的细胞蛋白质。 NH2 反应性 HiLyteFluor 555 是该试剂盒的一个组成部分，具有与蛋白质或其他分子上的氨基反应的琥珀酰亚胺基 (NHS)（图 1）。 该试剂盒包含标记所需的所有试剂。 每管 HiLyte Fluor 555 最多可标记 200 μg 的 IgG，每个 IgG 分子可结合约 4 至 6 个 HiLyte Fluor 555 分子。 标记过程很简单——将 NH2 反应性 HiLyte Fluor 555 添加到膜上的 IgG 溶液中，并在 37ºC 下孵育 10 分钟。 多余的 HiLyte Fluor 555 分子可以通过过滤管去除。 HiLyte Fluor 555 标记的 IgG 的激发和发射波长分别为 555 nm 和 570 nm（图 2）。* HiLyte Fluor 是 AnaSpec, Inc. 的商标。

Fig. 1 Fluorescence Spectrum of HiLyte Fluor 555-conjugated IgG

Fig. 2 Fluorescence spectrum of HiLyte Fluor 555-conjugated IgG______excitation spectrum______emission spectrum

Precaution♦ 本试剂盒要标记的蛋白质的分子量应大于 50,000。♦ 标记过程中，IgG 或 HiLyte Fluor 555 结合的 IgG 始终在过滤管的膜上。♦ 如果 IgG 溶液中含有其他蛋白质 分子量大于 10,000（例如 BSA 或明胶）的 IgG 溶液，在使用该试剂盒标记 HiLyte Fluor 555 之前纯化 IgG 溶液。 IgG 溶液可通过 IgG 纯化试剂盒（本试剂盒未包含）进行纯化。♦ 如果 IgG 溶液含有少量不溶性物质，则将溶液离心并使用上清液进行标记。

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Can I use this kit for other proteins?

是的，如果分子量大于 50,000。

在标记蛋白质之前是否必须使用过滤管？
如果蛋白质溶液不含带氨基的小分子，蛋白质浓度为10 mg/ml，或约70 μM，则无需使用过滤管。 将 10 μl 样品溶液与 90 μl 反应缓冲液混合，然后加入 8 μl NH2 反应性 HiLyte Fluor 555（在步骤 3 中制备）至

How long is the HiLyte Fluor 555-labeled protein stable?

如果储存在 4oC，它可以稳定超过 2 个月。 如需更长的储存时间，请加入 100% 体积的甘油，分装并储存在 -20oC。 但是，请注意稳定性取决于蛋白质本身。

该试剂盒可以标记的最少 IgG 量是多少？
IgG 的最小量为 10 μg。 对于少于 20 μg，按照手册添加 4 μl NH2 反应性 HiLyte Fluor 555，而不是在第 4 步中添加 8 μl。

Can I use this kit to label oligonucleotides or peptides?

不可以。寡核苷酸和肽可能太小而无法保留在过滤管的膜过滤器上。