StarLighter SYBR Green qPCR mix
StarLighter SYBR Green qPCR Mix
(Universal)
| 货号 | 产品名称 | 规格 | 价格（元） |
| FS-Q1001 | StarLighter SYBR Green qPCR Mix (Universal) | 100rxn×20μl (1ml) | 400 |
| FS-Q1002 | StarLighter SYBR Green qPCR Mix (Universal) | 125rxn×20μl×4 (1.25ml×4) | 1800 |
产品简述：
StarLighter SYBR Green qPCR Mix是一款含基因工程酶的qPCR试剂。该基因工程酶可耐受高浓度的SYBR Green I染料，反应体系中加入足够多的SYBR Green I 染料，能够降低荧光信号达到阈值的循环数（Ct值），提高信噪比、线性和灵敏度。StarLighter SYBR Green qPCR Mix扩增特异性强，能有效减少非特异性扩增，数据结果更加可靠。产品能有效扩增复杂模板，能有效应对高GC或高AT的目的片段。同时抗抑制剂干扰能力强。
主要应用：
基因表达分析；
低拷贝数基因检测；
基因敲除验证；
基因表达验证；
RNA拷贝数检测（病毒及病菌等检测）。
技术特点：
扩增特异性强，数据结果可靠；
反应效率高，Ct值提前；
信噪比高，灵敏度高；
高GC或高AT的片段扩增效果好；
耐受抑制剂能力强。
优异表现：
(1)扩增特异性强，数据结果可靠
Fig1：
以人的cDNA为模板，使用引物ApoE及不同厂家试剂，扩增长度为322bp的片段， GC%=75.5%（高GC），分别得到StarLighter SYBR Green qPCR Mix与各竞品的扩增和熔解曲线图；
为qPCR反应后产物的电泳图。
注：SL-StarLighterSYBR Green qPCR Mix，使用此试剂得到非常完美的扩增曲线，荧光信号强，熔解曲线及电泳条带单一、准确。
Fig2：
以人的cDNA为模板，使用引物TR及不同厂家试剂，扩增长度为219bp的片段， GC%=64%，分别得到StarLighter SYBR Green qPCR Mix与各竞品的扩增和熔解曲线图；
为qPCR反应后产物的电泳图。
注：SL-StarLighterSYBR Green qPCR Mix，其余代表不同竞品。使用启衡星试剂得到非常完美的扩增曲线，荧光信号强，熔解曲线及电泳条带单一、准确。
Fig3：
以人的cDNA为模板，使用引物UBC及不同厂家试剂，扩增长度为123bp的片段， GC%=52.0%(GC 均衡)，分别得到StarLighter SYBR Green qPCR Mix与各竞品的扩增和熔解曲线图；
为qPCR反应后产物的电泳图。
注：SL-StarLighterSYBR Green qPCR Mix，其余代表不同竞品。使用启衡星试剂得到非常完美的扩增曲线，荧光信号强，熔解曲线及电泳条带单一、准确。
总结Fig1、Fig2、Fig3如下图（SL为StarLighter SYBR Green qPCR Mix）：
 Primer
竞品 |
ApoE（人，DNA，amplicon length=322bp, GC%=75%） | TR（人，DNA，amplicon
length=219bp, GC%=64.0%） |
UBC（人，cDNA，amplicon length=123bp, GC%=52.0%） | |||
| 特异产物 | 扩增效率 | 特异产物 | 扩增效率 | 特异产物 | 扩增效率 | |
| TG | √ | 149.631% | √ | 96.795% | ||
| TK | √ | 102.101% | ||||
| VZ | √ | 97.196% | ||||
| AB | √ | 98.789% | ||||
| TY3 | √ | 98.028% | √ | 110.361% | ||
| KA | √ | 108.63% | ||||
| SL | √ | 105.049% | √ | 95.998% | √ | 100.374% |
| YS | √ | 99.905% | ||||
| CW | ||||||
| BR | √ | 95.611% | ||||
| RC | √ | 92.762% | √ | 97.752% | ||
| TY1 | √ | 96.83% | ||||
(2)扩增效率高，梯度稀释线性范围好，低拷贝检测灵敏度高
Fig4：
以KAPA Ion Torrent Library Quantification Kit 中浓度为8.3pM 的标准品作为S1，依次5倍稀释得到（S2-S10）为模板，StarLighter SYBR Green qPCR Mix与竞品KP的扩增及熔解曲线图。
StarLighter SYBR Green qPCR Mix，从S1-S10，扩增效率（Eff=100.483%）好，扩增曲线完美，荧光信号强，熔解曲线单一峰，无非特异性扩增。
(3)荧光信号强，灵敏度高
Fig5:
使用市面上个品牌的qPCR试剂得到扩增曲线图，上图为去掉ROX后，各品牌的荧光信号值比较，竞品KP与StarLighter SYBR Green qPCR Mix的荧光信号强度最高。
(4)Ct值提早出现
Fig6：
以人DNA为模板，使用引物TR及不同厂家试剂，扩增长度为219bp的片段，GC%=64%；在产物经电泳验证为目的片段的前提下，扩增曲线去Rox校正后，StarLighter SYBR Green qPCR Mix CT值最小（灵敏度最高）。
（5）高GC或高AT的片段扩增效果好
Fig7：
以人的DNA为模板，使用引物F8-exon10及不同厂家试剂，扩增长度为399bp的片段，GC%=35.6%；从扩增效率上看， StarLighter SYBR Green qPCR Mix ，Eff=94.365%为最优，竞品TY3，Eff=121.91%，竞品KP，Eff=NA（最高浓度无扩增）。
Fig8：
以人的DNA为模板，使用引物hPRT1及不同厂家试剂，扩增长度为198bp的片段，GC%=35.6%；从扩增效率上看， StarLighter SYBR Green qPCR Mix ，Eff=100.868%为最优，竞品TY3，Eff=94.630%，竞品KP，Eff=98.334%。
Fig9：
以人的DNA为模板，使用引物β-actin及不同厂家试剂，扩增长度为290bp的片段，GC%=61.0%；从扩增效率上看， StarLighter SYBR Green qPCR Mix ，Eff=102.101%为最优，竞品TY3，Eff=110.787%，竞品KP，Eff= NA（最高浓度无扩增）。
Fig10：
以人的DNA为模板，使用引物ApoE及不同厂家试剂，扩增长度为322bp的片段，GC%=75.5%；从扩增效率上看， StarLighter SYBR Green qPCR Mix ，Eff=101.307%为最优，竞品TY3，Eff=150.097%，竞品KP，Eff= NA（最高浓度无扩增）。
（6）耐受抑制剂能力强
Fig11：
以人的DNA为模板，使用引物F8-exon10及不同厂家试剂，扩增长度为393bp的片段，GC%=35.6%；从扩增效率上看， StarLighter SYBR Green qPCR Mix ，Eff=94.365%为最优，竞品TY3，Eff=121.91%，竞品KP，Eff= NA（最高浓度无扩增）。
以天根磁珠法血液基因组提取试剂盒提取的DNA为模板，原始模板浓度为100ng/μl，使用10mM Tris（含0.05%吐温-20）稀释2倍后作为S1，之后依次使用同样稀释液按梯度稀释10倍分别得到S2、S3、S4。StarLighter SYBR Green qPCR Mix扩增效率符合要求，竞品TY3及竞品KP的S1模板扩增均受到不同程度的抑制。
Fig12：
以人的DNA为模板，使用引物ApoE及不同厂家试剂，扩增长度为322bp的片段，GC%=75.5%；从扩增效率上看， StarLighter SYBR Green qPCR Mix ，Eff=101.307%为最优，竞品TY3，Eff=150.097%，竞品KP，Eff= NA（最高浓度无扩增）。
以天根磁珠法血液基因组提取试剂盒提取的DNA为模板，原始模板浓度为100ng/μl，使用10mM Tris（含0.05%吐温-20）稀释2倍后作为S1，之后依次使用同样稀释液按梯度稀释10倍分别得到S2、S3、S4。StarLighter SYBR Green qPCR Mix扩增效率符合要求，竞品TY3及竞品KP的S1模板扩增均受到不同程度的抑制。
（7）保存稳定性
7.1、4℃保存稳定性
Fig13：
以人的DNA为模板，使用引物UBC，扩增长度为123bp的片段，GC%=52%；从扩增曲线上可以看出，4℃储存最多达39天时，未见明显信号强度降低和Ct值延迟。
7.2、常温与37℃保存稳定性
Fig14：
以人的DNA为模板，使用引物UBC，扩增长度为123bp的片段，GC%=52%；从扩增曲线上可以看出，常温或37℃储存最多达8天时，未见明显信号强度降低和Ct值延迟。
7.3、冻融稳定性
Fig15：
以人的DNA为模板，使用引物UBC，扩增长度为123bp的片段，GC%=52%；从扩增曲线上可以看出，冻融次数最多达35次，未见明显信号强度降低和Ct值延迟。
7.1、7.2、7.3实验结果均出自ABI7500 Fast机器，使用Fast模式，程序为95℃、5min，40cycles（95℃、30sec，60℃、45sec），加熔解曲线。
7.4、不同机型/程序稳定性
（1）使用ABI QuantStudio6 Flex
Fig16：
如上图，使用引物ApoE，扩增长度为322bp的片段， GC%=75.5%；扩增体系与反应程序同7.1、7.2、7.3，默认升温1.9℃/s，降温1.6℃/s。从扩增及熔解曲线上可以看出，扩增产物特异性很好，Eff=99%.
（2）使用ABI 7500 FAST STANDARD 模式
Fig17：
如上图，使用引物TR，扩增长度为219bp的片段， GC%=64%；
从扩增及熔解曲线上可以看出，扩增产物特异性很好，Eff=103%.
Fig18：
如上图，使用引物hPRT1，扩增长度为198bp的片段， GC%=37%；
从扩增及熔解曲线上可以看出，扩增产物特异性很好，Eff=95%
定量反应（体系、程序参数）
（1）推荐反应体系
| 组分 | 10 µl /rxn | 20 µl /rxn | 终浓度 |
| H2O（PCR级） | 补至10µl | 补至20µl | N/A |
| 2× SYBR qPCR Ready Mix | 5μl | 10μl | 1x |
| 10 µM 正向引物 | 0.3 μl | 0.6 μl | 300 nM |
| 10 µM 反向引物 | 0.3 μl | 0.6 μl | 300 nM |
| cDNA模板 | （<50ng/μl） | （<50ng/μl） | 根据需要 |
| RoX | 0.2μl | 0.4μl | 50/500nM（根据仪器需要） |
（2）推荐反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环 |
| 酶激活 | 95℃ | 5 min | |
| 变性 | 95℃ | 30 sec | 40 cycles |
| 退火/延伸 数据采集 | 60℃ | ≥20 sec（根据仪器和扩增产物长度；若采用三步法，20sec退火后，72℃延伸1sec） | |
| 熔解曲线 | 根据仪器要求 | ||