EGY48 Chemically Competent Cell
酵母菌化学感受态细胞
产品标签
LexA双杂交系统；EGY48；Y2HGold；pGBKT7；pLexA；Aureobasidin A （AbA）；金担子素；
产品信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
| EGY48 Chemically Competent Cell
酵母菌化学感受态细胞 |
MF2358-1000UL | 10×100μl | 290 |
| MF2358-5000UL | 50×100μl | 1320 |
产品包装
| 组分编号 | 组分名称 | 保存 |
货号（规格） |
|
| MF2358-1000UL | MF2358-5000UL | |||
| MF2358-A | EGY48 Chemically Competent Cell | -80℃ | 10×100μl | 50×100μl |
| MF2358-B | pGBKT7 Control Vector (10ng/μl) | -80℃ | 10μl | 10μl |
| MF2358-C | Carrier DNA (10μg/μl) | -20℃ | 100μl | 500μl |
| MF2358-D | PEG/LiAC Solution | +4℃ | 5ml | 25ml |
产品描述
酵母双杂交系统是用于体内研究蛋白相互作用的一种非常便利的工具，目前采用的有LexA系统和GAL4系统。在LexA系统中，DNA结合域（DNA- BD）由一个完整的原核蛋白LexA构成，转录激活域（AD）由一个大肠杆菌来源的含88个氨基酸残基的酸性肽B42构成），在酵母中能活化基因的转录。正常情况，BD和AD不会结合，将待检测的蛋白质分别与BD和AD融合，形成诱饵融合蛋白（bait-DNA）和诱捕融合蛋白（prey-DNA），只有当诱饵和诱捕蛋白发生相互作用，促使BD和AD的相互接近，才能激活报告基因的转录。
EGY48是LexA系统酵母双杂交用实验菌株，MATα型，能直接转化质粒进行蛋白相互作用验证或双杂交文库筛选和构建。转化标记为ura3，his3，trp1。报告基因为LEU2。EGY48-LexA酵母双杂交系统需要三种质粒配套使用，分别为pLexA、pB42AD和p8op-LacZ。质粒pLexA的筛选标志为HIS3，用于表达诱饵融合蛋白。pB42AD的筛选标志为TRP1，用于表达诱捕融合蛋白。报告质粒p8op-LacZ的筛选标志为URA3，报告基因为LacZ，报告基因UAS来源于LexA op (x6)，只有当诱饵（Bait）和诱捕（Prey）相互作用才能启动LacZ表达。
本品为经特殊工艺制备的EGY48酵母菌化学感受态细胞，用pGBKT7质粒检测转化效率＞104cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存三个月。
基因型
MATα, ura3, his3, trp1, LexAop (x6)-LEU2
注意事项
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
- 取100 µl冰上融化的EGY48化学感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，Carrier DNA （95-100℃ 孵育5 min，快速冰浴。重复一次。）10 µl，PEG/LiAc 500µl，用枪吹打几次充分混匀，30℃水浴30 min（在15min时翻转6-8次混匀）。
- 之后将管子放42℃水浴15 min（在7.5min时翻转6-8次混匀）。
- 5000 rpm离心40s弃上清，用400 µl ddH2O重悬沉淀，离心30s弃上清。
- 用50 µl ddH2O重悬，涂板，放入29℃培养48-96 h。
EGY48酵母化学感受态细胞
EGY48酵母化学感受态细胞