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IDT埃德特 CRISPR 核酸酶

产品介绍

产品特点：

 

 

 

 

  • 核定位信号 (Nuclear localization signal, NLS) 提高了基因组编辑效率
  • 用于构成核糖核蛋白 (ribonucleoprotein, RNP) 复合物
  • 高纯度酶

     

    Cas9核酸酶

    重组化脓性链球菌Cas9核酸酶，从表达核酸酶的大肠杆菌菌株中纯化。

    包含核定位序列 （NLS） 和 C 末端 6-His 标签。

    以 10 μg/μL 的溶液形式提供，100 μg Cas9 核酸酶 = 610 pmol。

    产品 货号
    Alt-R™ S.p. Cas9 Nuclease V3, 100 µg 1081058
    Alt-R™ S.p. Cas9 Nuclease V3, 500 µg 1081059
    Alt-R™ S.p. Cas9 Nuclease V3, 5 mg 10000735
    Alt-R™ S.p. HiFi Cas9 Nuclease V3, 100 µg 1081060
    Alt-R™ S.p. HiFi Cas9 Nuclease V3, 500 µg 1081061
    Alt-R™ S.p. HiFi Cas9 Nuclease V3, 5 mg 10007803

    SpCas9 Nuclease (Glycerol-Free)

    产品 货号
    Alt-R™ S.p. Cas9 V3, glycerol-free, 100µg 10007806
    Alt-R™ S.p. Cas9 V3, glycerol-free, 500µg 10007807
    Alt-R™ S.p. Cas9 V3, glycerol-free, 5mg 10007808

    Cas9-GFP (or RFP) Nuclease

    产品 货号
    Alt-R™ S.p. Cas9-GFP V3, 100 µg 10008100
    Alt-R™ S.p. Cas9-GFP V3, 500 µg 10008161
    Alt-R™ S.p. Cas9-RFP V3, 100 µg 10008162
    Alt-R™ S.p. Cas9-RFP V3, 500 µg 10008163

    Cas9 Nickase

    产品 货号
    Alt-R™ S.p. Cas9 D10A Nickase V3, 100 µg 1081062
    Alt-R™ S.p. Cas9 D10A Nickase V3, 500 µg 1081063
    Alt-R™ S.p. Cas9 H840A Nickase V3, 100 µg 1081064
    Alt-R™ S.p. Cas9 H840A Nickase V3, 500 µg 1081065

    dCas9 Protein

     
     

    Cas12a 核酸酶

    As Cas12a (Cpf1) Nuclease

    产品 货号
    Alt-R™ A.s. Cas12a (Cpf1) Ultra, 100 µg 10001272
    Alt-R™ A.s. Cas12a (Cpf1) Ultra, 500 µg 10001273
    Alt-R™ A.s. Cas12a (Cpf1) Ultra, 5 mg 10007804
    Alt-R™ A.s. Cas12a (Cpf1) V3, 100 µg 1081068
    Alt-R™ A.s. Cas12a (Cpf1) V3, 500 µg 1081069

    Lb Cas12a (Cpf1) Nuclease

    产品 货号
    Alt-R™ L.b. Cas12a (Cpf1) Ultra, 100 µg 10007922
    Alt-R™ L.b. Cas12a (Cpf1) Ultra, 500 µg 10007923
    Alt-R™ L.b. Cas12a (Cpf1) Ultra, 5 mg 10007924

    应使用哪种 Cas9 酶

    IDT埃德特 CRISPR 核酸酶

    Cas12a (Cpf1) 蛋白

    Alt-R A.s. Cas12a (Cpf1) V3 核酸酶

    Alt-R A.s. Cas12a (Cpf1) Nuclease V3 enzyme is a high purity, recombinant Acidaminococcus sp. BV3L6 Cas12a. 当没有 Cas9 特异性 PAM 序列 (NGG) 时，这种酶对于靶向 AT 富集区非常有用。这些酶包括核定位序列 (nuclear localization sequences, NLS) 和 C 末端 6-His 标签。Cas12a 酶必须与 gRNA 结合才能产生一种功能性的目标特异性编辑复合物。为了获得出色的编辑效果，将 Alt-R A.s. Cas12a (Cpf1) 核酸酶 V3 与经优化的 Alt-R CRISPR-Cas12a (Cpf1) crRNA 等摩尔量结合。

    使用 Cas9 或 Cas12a (Cpf1) 进行 CRISPR 基因组编辑的比较

      Cas9 系统 Cas12a 系统
    应用
    • 一般的基因组编辑
    • 用于基因组中富含 AT 的物种
    • 用于设计空间有限、不能使用 CRISPR-Cas9 系统的区域
    核糖核蛋白组分
    • gRNA 选择：
      1. crRNA 和 tracrRNA
      2. sgRNA
    • Cas9 核酸内切酶
    • crRNA
    • Cas12a 核酸内切酶
    变体
    • 野生型
    • HiFi
    • 切口酶（H840A 和 D10A）
    • Cas9-GFP（或 RFP）
    • 野生型
    • Ultra（性能更佳）
    Cas9 crRNA:tracrRNA（选择 1）

    crRNA

    • 天然：42 nt
    • Alt-R：35–36 nt（建议 36 nt）

    tracrRNA

    • 天然：89 nt
    • Alt-R：67 nt
    		 —
    Cas9 sgRNA（选择 2）
    • Alt-R：99–100 nt（建议 100 nt）
    		 —
    Cas12a crRNA —
    • 天然：42–44 nt
    • Alt-R：40–44 nt（建议 41 nt）
    CRISPR 酶
    • Class 2，Cas type II
    • M.W.*：162,200 g/mol
    • 核酸内切酶结构域：RuvC-like 和 HNH
    • Class 2，Cas type V
    • M.W.*：156,400 g/mol
    • 核酸内切酶结构域：仅 RuvC-like
    DNA 切割
    • 野生型和 HiFi：在前间隔序列上游 3 个碱基位置切割，形成平末端
    • D10A 切口酶和配对 gRNA：5′ 黏末端
    • H840A 切口酶和配对 gRNA：3′ 黏末端
    • PAM 位点在基因组编辑过程中经常被破坏
    • 在前间隔序列的 5′ 端切割，形成 5′ 黏末端
    • PAM 位点在基因组编辑后可能会继续存在
    PAM 序列†
    • NGG
    • 对于 Cas12a V3，为 TTTV
    • 对于 Cas12a Ultra，为 TTTN
    当前建议导入 Alt-R RNP 的方法
    • 脂质体转染
    • 电穿孔（建议使用 Alt-R 增强子）
    • 显微注射
    • 电穿孔（建议使用 Alt-R 增强子）
    • 显微注射

    * Alt-R 核酸酶的分子量
    † N = 任意碱基；V = A、C、或 G

     

    产品 货号
    Alt-R™ S.p. dCas9 Protein V3, 100 µg 1081066  
     
    Alt-R™ S.p. dCas9 Protein V3, 500 µg 1081067

     

     

    • NEB代理 , 基因编辑 , 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

    产品资料 – 基因编辑 – 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

    EnGen® 突变检测试剂盒

    特性

    · 基于 T7 核酸内切酶的基因编辑检测

    概述

    EnGen 基因编辑突变检测试剂盒为检测基因编辑效率提供一整套的试剂。试剂盒操作的第一步，首先使用
    Q5 热启动超保真聚合酶 2× 预混液从待测细胞中扩增出目的基因组的靶标区域（即通过 CRISPR/Cas9、
    TALENs或 ZFN等方法进行了基因编辑的区域)，经退火、延伸步骤后，形成异源双链 DNA。在扩增子池中经过多轮循环后，基因插入和缺失(Indels)等造成的突变得到富集。第二步，将退火后的 PCR 产物用 EnGen T7 核酸内切酶 I 进行切割。 EnGen T7 核酸内切酶 I 是一种结构特异性酶，可有效识别大于1个碱基的基因错配。当错配出现时，DNA 分子的两条链被切割从而形成较小的片段。分析片段图谱可以对基因编辑实验的效率进行评估。
    EnGen 基因编辑突变检测试剂盒包含一组对照模板和引物预混液，可用作 PCR 反应及 T7 核酸内切酶 I 消化实验的对照。对照模板和引物预混液中含有 2 种对照质粒和 1 对对照引物。经 PCR 扩增、变性、退火后，部分会形成含有10个碱基的插入突变，此种异源双链 DNA 正是 T7 核酸内切酶 I 的底物，600 bp 的 DNA 会被切割成 200 bp 和 400 bp 的两个片段；而同源双链 DNA 则不被 T7 核酸内切酶 I 切割。通过琼脂糖凝胶电泳或片段分析设备可以非常方便的分辨出同源（野生型）和异源（突变）片段。
    试剂盒的实验流程经过优化，通过 Q5 热启动超保真聚合酶 2× 预混液扩增得到的 PCR 产物可以不经纯化而直接用 T7 核酸内切酶 I 进行消化。 异源双链DNA 分子只需 15 分钟就可以被完全切割，随后用蛋白酶 K 将反应终止。 此外， Q5 热启动超保真聚合酶 2× 预混液还可以用于优化靶点扩增的实验 。
    图1： 实验流程

    NEB代理 , 基因编辑 , 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

    将引物设计在已完成基因编辑位点的两侧，PCR 产物变性、退火后会生成三种结构。其中一种结构能够被 T7 核酸内切酶 I 切割（多于1个碱基错配的双链 DNA），经电泳分离和片段分析后，估算出基因编辑效率。

    Engen 突变检测试剂盒组分

    – Q5 热启动超保真聚合酶 2X 预混液
    – NEBuffer 2
    – EnGen T7 核酸内切酶 I
    – 对照模板和引物预混液
    – 蛋白酶 K.，分子生物级
    – Quick-Load® 紫色 2-Log DNA Ladder （0.1 – 10.0 kb）
    – 紫色凝胶上样染料 6X，无 SDS

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    NEB代理 , 基因编辑 , 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

    产品资料 – 基因编辑 – 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

    EnGen® sgRNA 合成试剂盒，S. pyogenes

    #E3322V10 rxns

    相关产品

    紫色凝胶上样染料 6X
    2-Log DNA Ladder（0.1-10.0kb）
    低分子量 ssRNA Ladder
    RNA 上样染料（2X）

    特性：

    一个小时甚至更短时间内快速合成微克级的 sgRNA
    NEB代理 , 基因编辑 , 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

    概述

    EnGen™ sgRNA 合成试剂盒, S. pyogenes 能简单快速合成 sgRNA 。利用试剂盒提供的试剂和使用者自己设计的特异性 DNA 序列，单管反应 30 分钟就能获得大量 sgRNA 。
    自然界中，S. pyogenes Cas9 的启动与 2 种 RNA 有关。及 crRNA 和 trRNA。crRNA 又称CRISPR RNA，包含大约 20 个核苷酸，位于PAM （Protospacer Adjacent Motif)  NGG 序列的上游，与目标 DNA 反义链同源互补。另一种是 tracrRNA  又称  transactivating crRNA， tracrRNA 序列的一部分与 crRNA 互补，所形成的互补序列及二级结构可被 Cas9 识别。在实际操作中，将 tracrRNA  和 crRNA 的序列进行整合，形成一条长片段单链指导 RNA ( sgRNA)  , 并与 Cas 9 形成复合体，识别并切割目标 DNA。
    在 EnGen 2X sgRNA 反应混合液中，含有能被 S. pyogenes Cas 9 识别并起支架作用的特异性序列，该序列的一部分能与使用者设计的目标特异序列部分重叠。退火形成互补链后由 DNA  聚合酶进行填充。最终生成用于转录的 dsDNA 模板。本试剂盒可在一个反应中完成 dsDNA 的合成及 RNA 转录，生成具有功能的 sgRNA。

    实验流程：

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    A．特异目标链包含三个部分，分别是 T7 启动子、~20 nt 目标特异性序列及与 S. pyogenes Cas9 识别支架序列互补的 14 nt 重叠区域（反应混合液中提供）。室温下，混合特异性目标链（或 EnGen sgRNA 调控序列）与 EnGen2X sgRNA 反应预混液（NTPs，dNTPs，S. pyogenes Cas9 识别支架序列）及 EnGen sgRNA 酶预混液（DNA 和 RNA 聚合酶）。B．在 37℃ 条件下，具有 14 nt 互补重叠区域的 2 个片段发生退火。C. DNA 聚合酶从 3´ 端开始延伸，形成一个双链 DNA 模板。D. RNA 聚合酶识别 T7 启动子及其下游的 dsDNA 并开始转录。最终形成的 sgRNA 包含目标特异片段、crRNA 和 tracrRNA。37℃ 条件下，单管反应 30 分钟即可完成所有步骤。

    EnGen sgRNA 合成试剂盒，S. pyogenes 组分

    – EnGen sgRNA 酶混合液
    – EnGen 2X sgRNA 反应混合液，S. pyogenes
    – DNase I （RNase-free）
    – EnGen sgRNA control Oligo，S. pyogenes

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    Spy Cas9 核酸酶,基因编辑,应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

    产品资料 – 基因编辑 – 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

    Spy Cas9 核酸酶

    #M0386M（高浓度20X）2000 pmol

    #M0386S70 pmol#M0386T（高浓度20X）400 pmol

    特性

    ·双链 DNA 位点特异性切割
    ·基因组编辑 

    概述

    Cas9 核酸酶，S. pyogenes，是一种 RNA 介导的核酸内切酶，可以催化双链 DNA 的特异位点切割。其识别 PAM（Protospacer Adjacent Motif）序列的  NGG 处，在靶序列的 3 个碱基内进行切割。PAM 序列的 NGG 必须连在基因编辑靶标位点之后，位于与 sgRNA 互补的 DNA 的对链上。 

    来源

    重组 E. coli 菌株，其克隆有来自 Streptococcus pyogenes 的 Cas9 基因。 

    反应条件

    1X Cas9 核酸酶反应缓冲液，37℃ 温育。

    质保声明

    Cas9 核酸酶，S. pyogenes 经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

    浓度

    1 μM，20 μM

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    Cas9 核酸酶，S.pyogenes 序列识别和 DNA 剪切工作原理示意图

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    EnGen® Spy Cas9 NLS 核酸酶

    #M0646M 2,000 pmol

    #M0646T 400 pmol

    特性

    · 双链 DNA 位点特异性切割
    ·    基因组编辑

    概述：

    EnGen Cas9 核酸酶 NLS, S. pyogenes, 是一种 RNA 介导的核酸内切酶，可以催化双链 DNA 的特异位点切割。其识别 PAM（Protospacer Adjacent Motif）序列的 NGG 处，在靶序列的 3 个碱基内进行切割。PAM 序列的 NGG 必须连在基因编辑靶标位点之后，位于与 sgRNA 互补的 DNA 的对链上。在 EnGen Cas9 核酸酶 NLS, S. pyogenes 蛋白质的 N-端和 C-端都含有猴病毒40 (SV40) T 抗原的核定位序列 (NLS)。

    来源：

     重组 E. coli 菌株，含有克隆自酿脓链球菌（Streptococcus pyogenes）的 Cas9 基因，在其编码蛋白的 N-端和 C-端都含有猿猴病毒 40（SV40）抗原的核定位序列（NLS），N-端同时带有 6X His标签。

    反应条件：

    1× Cas9 核酸酶反应缓冲液
    37℃     孵育

    质保声明：

    EnGen Cas9 核酸酶 NLS，S. pyogenes 经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

    浓度：

    20 μM

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    NEB代理 , 基因编辑 , 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

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    EnGen® Spy Cas9 切刻酶

    #M0650S70 pmol

    #M0650T400 pmol

    特性

    Ÿ   体外切刻 dsDNA。

    Ÿ   通过直接导入有活性的切刻酶复合物进行基因编辑。

    概述

     EnGen ® Spy Cas9 切刻酶是 Cas9 核酸酶的突变体，其在 RuvC 核酸酶结构域中引入了点突变（D10A）。EnGen ® Spy Cas9 切刻酶可以产生切刻，但不能切割 DNA。利用 EnGen Cas9 切刻酶近距离地靶向两个目标位点，产生 DNA 双链断裂，并且降低脱靶效应。与 EnGen sgRNA 合成试剂盒，S. pyogenes （NEB #E3322）兼容。

    反应条件

     1X NEBuffer™ 3.1，37℃ 温育

    热失活

     65°C，5 min

    浓度

     1 µM，20 µM

    质保声明

     EnGen ® Spy Cas9 切刻酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

    上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375

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    NEB代理 , 基因编辑 , 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

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    EnGen® Spy dCas9（SNAP-tag®）核酸酶              #M0652S 70 pmol

    #M0652T400 pmol

    特性

    ·体外切刻 dsDNA。

    ·通过直接导入有活性的切刻酶复合物进行基因编辑。

    概述

     EnGen ® Spy dCas9（SNAP-tag） 核酸酶是 Cas9 核酸酶的无活性突变体，保留了与 DNA 的结合活性。N 端 SNAP-tag 标签可与荧光基团、生物素和许多其它利于可视化和靶标富集的偶联物共价结合。与 EnGen sgRNA 合成试剂盒，S. pyogenes （NEB #E3322）兼容。

    反应条件

     1X NEBuffer™ 3.1，37℃ 温育

    浓度

     1 µM，20 µM

    质保声明

     EnGen ® Spy dCas9（SNAP-tag） 核酸酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。

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    NEB代理 , 基因编辑 , 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

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    EnGen® Lba Cas12a（Cpf1）核酸酶

    #M0653S
    70 pmoles
    #M0653T
    2,000 pmoles

    特性

    ·   体外切割 dsDNA。

    ·   通过直接导入有活性的核酸酶复合物进行基因编辑。

    概述

     EnGen ® Lba Cas12a（Cpf1） 核酸酶识别富含 T 的 TTTN PAM 序列，为基因打靶开辟了额外的基因组区域。所需 gRNA短，仅40-44 个碱基。其有两个核定位信号，提高运输到细胞核的效率。其切割产物为5′ 突出端。该酶的活性温度区间为 16℃-48℃。与氨基酸球菌（Acidaminococcus）的同源酶相比，在更低温度下活性依然良好，能用于编辑冷血动物基因组，如斑马鱼和非洲爪蟾等。高浓度酶可用于显微注射、电转和脂质体转染.

    反应条件

     1X NEBuffer™ 2.1，37℃ 温育

    热失活

     65°C，10 min

    浓度

     1 µM，100 µM

    质保声明

     EnGen ® Lba Cas12a（Cpf1）经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

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    Lba Cas12a（Cpf1） 核酸酶序列识别和 DNA 剪切工作原理示意图

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    EnGen® Sau Cas9 核酸酶

    #M0654S70 pmol

    #M0654T400 pmol

    特性

    ·体外切割 dsDNA
    ·通过直接导入有活性的核酸酶复合物进行基因编辑

    概述

    EnGen ® Sau Cas9 核酸酶识别 5′-NNGRRT-3′ PAM 序列，切割位于 PAM 序列上游的第 3 个碱基位置，切割后为平末端。其双端核定位序列（NLS）可提高运输到细胞核的效率。高浓度酶可用于显微注射、电转和脂质体转染。

    反应条件

     1X NEBuffer™ 3.1，37℃ 温育

    热失活

     65°C，5 min

    浓度

     1 µM，20 µM

    质保声明

     EnGen ® Sau Cas9 核酸酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。

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    Sau Cas9 核酸酶序列识别和 DNA 剪切工作原理示意图

     NEB代理 , 基因编辑 , 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品