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Coelenterazine 400a,DeepBlue C,70217-82-2

 Coelenterazine 400 a 腔肠素400a ：常称为DeepBlue C，是一种天然腔肠素衍生物，是一款良好的海肾荧光素酶（Rluc）底物，但不适合用作分泌型膜锚定荧光素酶（Gluc）底物。可用来实时监测钙离子浓度，报告基因分析，以及用作生物发光共振能量转移（BRET）的首玄底物。

Coelenterazine 400 a 腔肠素400a

产品关键词：

Coelenterazine 400 a 腔肠素400a；DeepBlue C；海肾荧光素酶（Rluc）；萤火虫荧光素酶（Fluc）；BRET2 生物发光共振能量转移 ；CAS NO：70217-82-2；

产品信息

产品名称 产品编号 规格
Coelenterazine 400 a 腔肠素400a MX4610-500UG 500μg
Coelenterazine 400 a 腔肠素400a MX4610-1MG 2×500μg

产品描述

天然腔肠素（Coelenterazine Native，CTZ-Native）是自然界中存在丰富的一种腔肠素，也是目前应用普遍的一种标准底物。不仅是脱辅基水母发光蛋白（APO）的底物，也是海肾荧光素酶（Rluc）和分泌型膜锚定荧光素酶（Gluc）等荧光素酶的作用底物。前者用于检测钙离子浓度，后者用作荧光素酶的报告基因检测系统。还可用于生物共振能量转移BRET，细胞或组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子水平（ROS）的化学发光检测等。

腔肠素400a（Coelenterazine 400a，CTZ 400a），常称为DeepBlue C，是一种天然腔肠素衍生物，是一款良好的海肾荧光素酶（Rluc）底物，但不适合用作分泌型膜锚定荧光素酶（Gluc）底物。可用来实时监测钙离子浓度，报告基因分析，以及用作生物发光共振能量转移（BRET）的首玄底物。腔肠素400a的大射波峰值约在400nm，从而对GFP受体的发射峰干扰小。腔肠素400a用在BRET2体系，该体系通常用来评估蛋白–蛋白相互作用，包括涉及G蛋白偶联受体介导的药物细胞信号通路分析，是一种有效的药物开发和筛选工具。

产品描述

1）   CAS NO：70217-82-2

2）   化学名：2,8-Dibenzyl-6-phenyl-imidazo[1,2a]pyrazin-3-(7H)-one; 6-phenyl-2,8-bis(phenylmethyl)-imidazo [1,2-a]pyrazin-3(7H)-one;

3）   同义名：CTZ 400a; 1-bisdeoxycoelenterazine; di-dehydrocoelenterazine; DeepBlueCTM; 腔肠素400a；

4）   分子式：C26H21N3O

5）   分子量：391.5 g/mol

6）   纯度：>97%

7）   外观：黄色至橙色固体

8）   溶解性：溶于甲醇或乙醇，不要溶于DMSO

9）   化学结构式： Coelenterazine 400 a 腔肠素400a

注意事项

1）   腔肠素400a（Coelenterazine 400a）的另一个通用名DeepBlueCTM是BioSignal Packard公司的商标名。

2）   不同的BRET系统对底物的选择上会有差异（附录3—用于PPI研究的BRET系统汇总表），腔肠素400a 主要用在BRET2系统。

3）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法详细内容见maokangbio网站

一、  腔肠素400a的溶解事项

1）   腔肠素400a不溶于水，接触到空气，水分或任何氧化剂都不稳定。溶于甲醇或乙醇，千万不要溶于DMSO，因会发生未知反应引起腔肠素400a的快速降解并生成未知的代谢产物。

2）   毒性小的溶剂是无水乙醇，可溶解粉末配制成0.1-1mg/ml溶液，之后加入需要的缓冲液，尽量保持缓冲液pH小于7.0，因碱性条件会快速降解腔肠素400a，有时沉淀会立即产生。

天然腔肠素及其衍生物的光谱特性

天然腔肠素及其衍生物的应用差异

用于PPI研究的BRET系统汇总表

 

Coelenterazine h 腔肠素h,50909-86-9

Coelenterazine h 腔肠素h，CTZ-h，是天然腔肠素（Coelenterazine native，CTZ-native）的脱羟基衍生物。CTZ-h形成的水母发光蛋白复合物比CTZ-native形成的水母发光蛋白复合物的荧光强度高10倍以上（大发射波长~466nm，半衰期为0.6-1.2sec）。
Coelenterazine h 腔肠素h

Coelenterazine (CTZ) 腔肠素；CTZ h 腔肠素h；海肾荧光素酶（Rluc）；分泌型膜锚定荧光素酶（Gluc）；萤火虫荧光素酶（Fluc）；In vivo bioluminescence imaging 活体动物体内成像技术；CAS NO：50909-86-9；

产品信息

产品名称 产品编号 规格

Coelenterazine h 腔肠素h

MX4608-500UG

500μg
Coelenterazine h 腔肠素h MX4608-1MG 2×500μg
Coelenterazine h 腔肠素h MX4608-5MG 10×500μg


产品描述

腔肠素（Coelenterazine）是在水生生物中发现的一种发光基团（luminophore），是许多荧光素酶的作用底物，包括海肾荧光素酶（Renilla reniformis luciferase, Rluc），分泌型膜锚定荧光素酶（Gaussia luciferase, Gluc）和薮枝虫荧光素酶（Obelia luciferase），和发光蛋白包括水母发光蛋白（Aequorin）的构成之一。其作用原理是以腔肠素为底物的荧光素酶，在含分子氧的条件下，氧化腔肠素产生高能量的中间产物，在此过程中发射蓝色光，光波长在450~480nm见图1。

Coelenterazine h 腔肠素h

图1. 海肾荧光素酶（Rluc）催腔肠素发光的反应流程

腔肠素h（Coelenterazine h，CTZ-h）是天然腔肠素（Coelenterazine native，CTZ-native）的脱羟基衍生物。CTZ-h形成的水母发光蛋白复合物比CTZ-native形成的水母发光蛋白复合物的荧光强度高10倍以上（大发射波长~466nm，半衰期为0.6-1.2sec）。CTZ-h形成的水母发光蛋白复合物比天然发光复合物对钙离子灵敏度更高，是一种检测钙离子浓度微小变化的实用探针。另外，CTZ-h是海肾荧光素酶（Renilla luciferase，Rluc）的底物，适用于体内外报告基因分析。

产品特性

1）   CAS NO：50909-86-9

2）   化学名：2,8-dibenzyl-6-(4-hydroxyphenyl)imidazo[1,2-a]pyrazin-3(7H)-one; Imidazo[1,2-a]pyrazin-3(7H)-one, 6-(4-hydroxyphenol)-2,8-bis(phenylmethyl);

3）   同义名：h-Coelenterazine; h-CTZ; 2-Deoxycoelenterazine 2-脱氧腔肠素; 2-(4-Dehydroxy) coelenterazine;

Luciferin (Renilla) 海肾荧光素；

4）   分子式：C26H21N3O2

5）   分子量：407.5 g/mol

6）   纯度：>98%

7）   外观：黄色固体

8）   溶解性：溶于甲醇或乙醇，不要溶于DMSO

9）   化学结构式： Coelenterazine h 腔肠素h

注意事项

1）   腔肠素h（Coelenterazine h， CTZ-h）号以完全冻干粉的状态保存在惰性气体内，密封后置于-20℃或-70℃长期避光保存。管内即使有微量空气，也会随着时间慢慢氧化腔肠素使其活性丧失。由此，导致不同组间的定量结果可能显得不可靠，数据可比性不高。

2）   腔肠素h（Coelenterazine h， CTZ-h）不建议以储存液的形式保存，号于实验前配制新鲜的溶液。不建议将配好的腔肠素h溶液储存在-20℃或-70℃，因其具有一个高能量的二氧杂环丁酮环形结构，即使在低温条件下都会自发降解。若是必须配成液体储存液，请按照操作步骤一、腔肠素工作液制备执行。

3）   体内动物实验，推荐使用我司（生物）特别开发和优化的注射用腔肠素h（Injectable h-Coelenterazine）（# MX4609-1MG）或注射用天然腔肠素（Injectable native Coelenterazine）（# MX4607-1MG）。

4）   发光蛋白与荧光素酶是完全不同的，比如腔肠素h（CTZ-h）适合用作海肾荧光素酶（Rluc）的底物，但不适合用作分泌型膜锚定荧光素酶（Gluc）的底物。天然腔肠素（CTZ-native）是为一适合分泌型膜锚定荧光素酶的一种报告基因底物。

5）   商业化腔肠素的种类繁多，有天然腔肠素，以及各种腔肠素衍生物（比如，腔肠素h，腔肠素400a，腔肠素e，腔肠素f，腔肠素hcp）。它们对钙离子的亲和力，光谱特性，以及应用倾向上会有差异，详见附录1—天然腔肠素及其衍生物的光谱特性，附录2—天然腔肠素及其衍生物的应用差异选择适当的产品。

6）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤

一、  腔肠素工作液制备

有关腔肠素溶解的注意事项：

1.1    腔肠素母液制备

1.2    腔肠素工作液制备

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Coelenterazine Native 天然腔肠素,

Coelenterazine Native 天然腔肠素（CTZ-Native）是自然界中存在较丰富的一种腔肠素，也是目前应用较普遍的一种标准底物。不仅是脱辅基水母发光蛋白（APO）的底物，也是海肾荧光素酶（Rluc）和分泌型膜锚定荧光素酶（Gluc）等荧光素酶的作用底物。

Coelenterazine Native 天然腔肠素

Coelenterazine (CTZ) 天然腔肠素；海肾荧光素酶（Rluc）；分泌型膜锚定荧光素酶（Gluc）；萤火虫荧光素酶（Fluc）；In vivo bioluminescence imaging 活体动物体内成像技术；CAS NO：50909-86-9；

产品信息

产品名称 产品编号 规格
Coelenterazine Native 天然腔肠素

MX4606-500UG

500μg
Coelenterazine Native 天然腔肠素 MX4606-1MG 2×500μg
Coelenterazine Native 天然腔肠素 MX4606-5MG 5mg
Coelenterazine Native 天然腔肠素 MX4606-10MG 10mg

产品描述

腔肠素（Coelenterazine）是在水生生物中发现的一种发光基团（luminophore），是许多荧光素酶的作用底物，包括海肾荧光素酶（Renilla reniformis luciferase, Rluc），分泌型膜锚定荧光素酶（Gaussia luciferase, Gluc）和薮枝虫荧光素酶（Obelia luciferase），和发光蛋白包括水母发光蛋白（Aequorin）的构成之一。其作用原理是以腔肠素为底物的荧光素酶，在含分子氧的条件下，氧化腔肠素产生高能量的中间产物，在此过程发射蓝色光，光波长在450~480nm见图1。而甲虫（或萤火虫）荧光素/荧光素酶（FLuc）系统不同，其在含分子氧的条件下，还需要ATP和Mg2+的存在才能同时发光，光波长在550-570nm。正由于生物发光信号和底物的差异，RLuc常常与FLuc联合用于多重转录报告基因研究，或用作Fluc系统内萤火虫荧光素酶转染的内参。腔肠素应用甚是广泛，包括：1）活细胞或组织的钙离子检测；2）细胞或组织的超氧化物和过氧亚硝基阴离子（活性氧，ROS）化学发光检测；3）基因报告基因检测；4）动物活体检测；5）ELISA和生物发光共振能量转移（BRET）用于蛋白相互作用研究；6）药物高通量筛选（HTS）；天然腔肠素（Coelenterazine Native，CTZ-Native）是自然界中存在丰富的一种腔肠素，也是目前应用普遍的一种标准底物。不仅是脱辅基水母发光蛋白（APO）的底物，也是海肾荧光素酶（Rluc）和分泌型膜锚定荧光素酶（Gluc）等荧光素酶的作用底物。前者用于检测钙离子浓度，后者用作荧光素酶的报告基因检测系统。还可用于生物共振能量转移BRET，细胞或组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子水平（ROS）的化学发光检测等。

产品特性

1）   CAS NO：55779-48-1

2）   化学名：8-benzyl-6-(4-hydroxyphenyl)-2-[(4-hydroxyphenyl)methyl] -7H-imidazo [1,2-a]pyrazin-3-one

3）   同义名：Coelenterazine, nativ; native Coelenterazine; Coelenterazine free base; native-CTZ; 腔肠素游离酸；

4）   分子式：C26H21N3O

5）   分子量：423.46 g/mol

6）   纯度：>95%

7）   外观：黄色至棕黄色结晶性粉末

8）   溶解性：溶于甲醇或乙醇，不要溶于DMSO

9）   化学结构式： Coelenterazine Native 天然腔肠素

 

操作步骤

一、  腔肠素工作液制备

有关腔肠素溶解的注意事项：

1）   腔肠素溶于甲醇或乙醇，不可溶于DMSO。腔肠素的水溶性相对比较低，一般情况需先将腔肠素溶于酸化的醇类溶剂配成相对高浓度的母液，然后再用水溶性缓冲液稀释到需要的工作浓度，现配现用。

2）   腔肠素在溶液中的稳定性比较低，号于正式实验前才配制溶液（包括高浓度母液）。但若实际要求，必须保存母液，目前来说稳定的溶剂是丙二醇，往内加入少量L-抗坏血酸，β-巯基乙醇，DTT，DTE，或少量HCl能维持其还原态。不过，还原剂可能会减低氧化腔肠素（氧化为Coelenteramide）的动力学速率。也有可能破坏荧光素酶活性。而冻存在醇类溶剂中可能引起腔肠素沉淀，实际取决于溶液浓度。当然，可通过加热50-60℃，使得沉淀重新溶解。必须确保无可见沉淀，或在实验前（特别是活体动物实验）离心去沉淀。

1.1    腔肠素母液制备

1.2    腔肠素工作液制备

二、  操作方法

2.1 体外生物发光

2.2 体内动物成像

注意：腔肠素的注射剂量可能根据动物类型、品种、注射方式以及报告基因种类有所差异。加的注射剂量请自行摸索或参考文献来做。

对于海肾荧光素酶报告基因系统，通过腹腔（IP）或静脉注射（IV）按照25-100μg/只小鼠能得到良好结果。对于分泌型膜锚定荧光素酶（Gluc）报告基因系统，由于分泌型膜锚定荧光素酶代谢活性增加，相对来说需要更高量的腔肠素。文献（Tannous BA. Gaussia luciferase reporter assay for monitoring of biological processes in culture and in vivo.Nat Protoc.2009;4(4):582-591.）提到，当用静脉注射（IV）按照4mg/kg体重给药能得到良好结果。

a）根据自身实验室条件选择适当方法麻醉动物，视情况决定是否去皮（通常黑色皮毛动物需去皮）。

b）根据实际情况往动物体内注射相应剂量步骤1.2 配制好的腔肠素工作液。比如，对于海参荧光素酶报告基因系统，使用26-gauge针头注射器尾静脉注射100µl 2 mM (~1mg/ml)腔肠素工作液，然后立即对动物进行体内成像检测，以获得峰值信号。

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