Cytiva 27926401 RTG YOU-PRIME FIRST-STRAND BEADS

该试剂盒提供 50 个预先配制的单剂量反应珠，这些反应珠预填充在与大多数热循环仪兼容的 0.5 mL 薄壁试管中。使用所选择引物从总 RNA 或聚腺苷酸化 RNA 中合成第一链 cDNA 模板。

使用选择用于 RT-PCR 的引物从总 RNA 或聚腺苷酸化 RNA 中合成第一链 cDNA 模板。

预分配、室温稳定性、单剂量反应珠可最大限度地减少移液误差、避免交叉污染并确保最佳性能。

第一链反应珠不含引物，因此允许自行选择引物。

非常适用于使用 PCR 对来自多种样品的真核生物 RNA 进行检测和定量的研究应用。

从血样中对反应珠进行功能检测，以在 RT-PCR 中进行多达 7.5 kb 的 cDNA 第一链合成。

添加水、Taq DNA 聚合酶和引物后，可在 PCR 中直接进行完整反应（最终容量为 33 μL）；也可将第一链 cDNA 用作传统 Gubler-Hoffman 第二链 cDNA 合成的模板。

每个试剂盒都包含预分装第一链反应混合物，这些混合物经特殊工艺处理变成两个小球，并且可以在环境温度下保持稳定。第一链反应珠可以在水中快速复溶。因此，Ready-To-Go You-Prime First-Strand 磁珠在使用过程中非常方便。用变性的 RNA 样品复溶磁珠，加入引物，将反应置于 37℃ 下，持续 60 分钟。完成的第一链反应后即可用于 PCR 扩增或第二链 cDNA 合成。

参数

Ready-To-Go You-Prime First-Strand 磁珠

试剂盒内容

第一链反应混合物（50 个白色试管）：两个小珠中含有反应缓冲液、 dATP、dCTP、dGTP、dTTP、小鼠逆转录酶 (FPLCpure)、 RNAguard（猪）、无 RNase/DNase 的 BSA。对照混合小珠（5 个红色试管）：一个室温稳定性小珠含兔球蛋白 mRNA (1 ng)、缓冲液以及 8 pmol 各 5’-特异性球蛋白引物 (5’d[ACACTTCTGGTCCAGTCCGACTGAG]-3’) 和 3′-特异性球蛋白引物 (5’-d[GCCACTCACTCAGACTTTATTCAAA]-3’)。

应用

第一链

包装规格

50 reactions

NEB代理,RNA 试剂,cDNA 合成,cDNA 合成选择表,#E6560S

产品资料 – RNA 试剂 – cDNA 合成

cDNA 合成选择表

#E6560S

#E6300S

#E6550S

#M0368S

#M0253S

#M0277S

#M0380S

cDNA 合成选择表

NEB代理 , RNA 试剂 , cDNA 合成

NEB代理,RNA 试剂,cDNA 合成,用于 cDNA 合成的引物

产品资料 – RNA 试剂 – cDNA 合成

用于 cDNA 合成的引物

Oligo d(N)_n 引物适用于 mRNA 的扩增和测序，能与 mRNA 的 3´ -poly A 尾或带尾的 cDNA 退火。注意：#S1316 5´ 末端未磷酸化。

NEB代理 , RNA 试剂 , cDNA 合成

上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375

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NEB代理,RNA 试剂,cDNA 合成,ProtoScript® cDNA 第一链合成试剂盒

产品资料 – RNA 试剂 – cDNA 合成

ProtoScript^® cDNA 第一链合成试剂盒

#E6300L150 次反应

#E6300S30 次反应

特性

 提供酶混合液与反应混合液，建立反应更加便捷

 适合各种需求的 PCR

 不同起始量的 RNA 都能高效反转录
 合成至少 5 kb 长度的 cDNA

概述

ProtoScript cDNA 第一链合成试剂盒含有两种经过优化的混合液，ProtoScript 酶混合液与 ProtoScript 反应混合液。ProtoScript 酶混合液含 M-MuLV 反转录酶和小鼠 RNase 抑制剂；ProtoScript 反应混合液含 dNTP 与经过优化的缓冲液。该试剂盒还包括两种优化的反转录引物和无核酸酶污染的水。锚定的 Oligo-dT 引物 [d(T)₂₃VN] 迫使引物与 polyA 尾的起始端退火。经过优化的随机引物混合液能随机并持续性的与整个 RNA 模板配对，包括 mRNA 与无 polyA 尾的 RNA。合成的第一链 cDNA 产物长度可超过 13.0 kb。该试剂盒曾用名为 M-MuLV cDNA 第一链合成试剂盒。

ProtoScript cDNA 第一链合成试剂盒组份

– 10X ProtoScript 酶混合液

– 2X ProtoScript 反应混合液

– 随机引物混合液（60 μM）、Oligo d(T)₂₃VN 引物（50 μM）**、无核酸酶污染的水

**Oligo d(T)₂₃VN 和随机引物混合液含有 1 mM dNTP

NEB代理 , RNA 试剂 , cDNA 合成

使用 ProtoScript 试剂盒合成第一链 cDNA 。反应温度为 42℃，模板为 2 μg 人脾总 RNA。阴性对照反应（-RT）使用 1X ProtoScript 反应混合液进行。以部分第一链 cDNA 产物为模板，使用 1X LongAmp^® Taq 2X 预混液（NEB #M0287）扩增三种不同信使 RNA 的特异序列。泳道 1：β 肌动蛋白基因的 1.1 kb 片段；泳道 2：β 肌动蛋白基因 1.1 kb 片段的–RT对照；泳道 3：Xrn-1 基因的 4.7 kb 片段；泳道 4：Xrn-1 基因 4.7 kb 片段的–RT对照；泳道 5：鸟嘌呤核苷酸交换因子 p532 的 9.8 kb 片段；泳道 6：鸟嘌呤核苷酸交换因子 p532 9.8 kb 片段的 -RT 对照。Marker M 为 2-Log DNA Ladder（NEB #N3200）。

NEB代理,RNA 试剂,cDNA 合成,ProtoScript® II cDNA 第一链合成试剂盒

产品资料 – RNA 试剂 – cDNA 合成

ProtoScript^® II cDNA 第一链合成试剂盒

#E6560L 150 次反应

#E6560S 30 次反应

特性

 提供酶混合液与反应混合液，建立反应更加便捷

 适合各种需求的 PCR

 不同起始量的 RNA 都能高效反转录

 合成至少 10 kb 长度的 cDNA
 2 管装混合液方便使用

概述

ProtoScript II cDNA 第一链合成试剂盒含有两种经过优化的混合液，ProtoScript II 酶混合液与 ProtoScript II 反应混合液。酶混合液含 ProtoScript II 反转录酶和小鼠 RNase 抑制剂；反应混合液含 dNTPs 与经过优化的缓冲液。ProtoScript II 反转录酶是重组的 M-MuLV 反转录酶，降低了 RNase H 活性且提高了热稳定性。与野生型 M-MuLV 反转录酶相比，ProtoScript II 可在更高的温度下合成第一链 cDNA。该酶活性温度高达50℃，且具有特异性高、cDNA 产量高的特点。

该试剂盒还提供两种优化的反转录引物和无核酸酶污染的水。Oligo-dT 引物 [d(T)₂₃VN] 能与 polyA 尾的起始端退火；优化的随机引物混合液能随机并持续性的与整个 RNA 模板配对，包括 mRNA 和无 poly A 尾的 RNA。第一链 cDNA 合成长度可达 10 kb。

ProtoScript II cDNA 第一链合成试剂盒组份

– 10X ProtoScript II 酶混合液

– 2X ProtoScript II 反应混合液

– 随机引物混合液（60 μM）、Oligo d(T)₂₃VN 引物（50 μM）**、无核酸酶污染的水

**Oligo d(T)₂₃ VN 和随机引物混合液包含 1 mM dNTP
如需稳定扩增不同种类的 DNA 模板，推荐使用 OneTaq^® DNA 聚合酶或 Q5^® 超保真 DNA 聚合酶。

NEB代理,RNA 试剂,cDNA 合成,M-MulV 反转录酶,#M0253L

产品资料 – RNA 试剂 – cDNA 合成

M-MulV 反转录酶

#M0253L 50,000 units

#M0253S 10,000 units

特性

 合成 cDNA

 RNA 测序
 RT-PCR

概述

莫洛尼氏鼠白血病病毒（M-MuLV）反转录酶是一种 RNA 介导的 DNA 聚合酶。该酶能以 RNA（合成 cDNA 时）或单链 DNA 做模板由引物起始合成一条互补的 DNA。M-MuLV 反转录酶无 3´→5´ 核酸外切酶活性。

来源

重组 E. coli 菌株，携带有从 M-MuLV 中克隆的反转录酶基因。

反应条件

1X M-MuLV 反转录酶反应缓冲液

[50 mM Tris-HCl (pH 8.3 @ 25℃)，75 mM KCl，3 mM MgCl₂，10 mM DTT]，加入 dNTPs（不随酶提供），37-42℃ 温育。
热失活：65℃ 20 分钟。

质保声明

无核酸内切酶、外切酶和 RNase 污染。

单位定义

1 单位指以 poly(rA) 为模板、oligo(dT) 为引物，在 37℃ 条件下，10 分钟内催化 1 nmol 的 dTTP 掺入形成酸不溶性沉淀物所需要的酶量。

浓度

200,000 units/ml。

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NEB代理,RNA 试剂,cDNA 合成,AMV 反转录酶 #M0277L

产品资料 – RNA 试剂 – cDNA 合成

AMV 反转录酶

#M0277L 1,000 units

#M0277S 200 units

特性

 合成 cDNA

 RNA 测序
 RT-PCR

概述

禽骨髓母细胞瘤病毒（AMV）反转录酶是一种 RNA 介导的 DNA 聚合酶。该酶能以 RNA（合成 cDNA 时）或单链 DNA 为模板从引物开始合成互补的 DNA 链。

来源

禽骨髓母细胞瘤病毒（AMV）。

反应条件

1X AMV 反转录酶反应缓冲液

[50 mM Tris-acetate (pH 8.3 @ 25℃)，75 mM KOAc，8 mM Mg(OAc)₂，10 mM DTT]，加入 dNTPs（不随酶提供），37-42℃ 温育。

质保声明

无核酸内、外切酶和 RNase 污染。

单位定义

1 单位指以 poly(rA) 为模板，oligo(dT) 为引物，37℃ 条件下，10 分钟内催化 1 nmol 的 dTTP 掺入酸不溶性沉淀物中所需要的酶量。

浓度

10,000 units/ml。

贮存注意

解冻后，请立即贮存于-20℃。反复冻融会导致酶失活。长时间贮存可分装后置于 -70℃。

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NEB代理,RNA 试剂,cDNA 合成,

产品资料 – RNA 试剂 – cDNA 合成

ProtoScript® II 反转录酶

#M0368L10,000 units

#M0368S4,000 units

#M0368X40,000 units

特性

 不同起始量的 RNA 均能高效反转录

 提高热稳定性
 合成至少 10 kb 长度的 cDNA

概述

ProtoScript II 反转录酶是一种重组的 M-MuLV 反转录酶，其 RNase H 酶活性降低且热稳定性增加。与野生型 M-MuLV 反转录酶相比， ProtoScript II 可在更高的温度下合成第一链 cDNA。 ProtoScript II 活性温度高达 50℃，且具有特异性高、产量高和合成 cDNA更长的特点，合成 cDNA长度可达 12 kb。本产品曾用名为 M-MuLV 反转录酶（RNase H^–）。

来源

来自重组 E. coli 菌株，携带有突变的 MMuLV 反转录酶（RNase H^–）编码基因，经高度纯化而获得。

反应条件

1X ProtoScript II 反转录酶反应缓冲液

[50 mM Tris-HCl (pH 8.3 @ 25℃)，75 mM KCl，3 mM MgCl₂]，10 mM DTT，200 units ProtoScript II ，0.5 mM dNTPs（不随酶提供）和 5 μM dT₂₃VN（不随酶提供），42℃ 温育 50 分钟。如果使用随机引物建议在室温放置 10 分钟后再进行 42℃ 反应。
热失活：65℃ 20 分钟。

质保声明

通过 RT-PCR 验证，以总 RNA 为模板可合成 9.2 kb 的 cDNA。

单位定义

1 单位指在 50 μl 反应体系中，以 poly(rA) 为模板，以 oligo(dT)₁₈ 为引物，37℃ 条件下，10 分钟内催化 1 nmol 的 dTTP 掺入形成酸不溶性沉淀物所需要的酶量。

浓度

200,000 units/ml。

NEB代理,RNA 试剂,cDNA 合成,WarmStart® RTx 反转录酶,#M0380L

产品资料 – RNA 试剂 – cDNA 合成

WarmStart^® RTx 反转录酶

#M0380L 250 次反应

#M0380S 50 次反应

特性

 RT-LAMP

 cDNA 合成
 要求在室温下建立的 RT 反应

概述

WarmStart^® RTx 反转录酶是一种依赖 RNA 的 DNA 聚合酶，它利用核酸适配体技术，通过共价键作用结合到聚合酶上，从而抑制 RTx 在 40℃ 以下的活性。WarmStart RTx 以 RNA（cDNA 合成）或单链 DNA 作为模板合成互补 DNA 链。RTx 酶适用于扩增反应中 RNA 的检测，特别适用于 LAMP（环介导等温扩增）实验。WarmStart 特性是：特别适用于高通量反应，室温下建立反应，并提高扩增反应的一致性和特异性。RTx 反转录酶包含完整的 RNase H 活性。

来源

重组 E. coli 菌株，携带有基因工程改造的 RTx 基因。

反应条件

25 μl 反应体系中包括：1X 等温扩增反应缓冲液、模板、引物、dNTPs 和 0.25-0.5 μl WarmStart RTx 反转录酶，50-55℃ cDNA 合成或者直接 65℃ 进行一步法 RT-LAMP。
热失活：80℃ 10 分钟。

质保声明

无核酸内、外切酶和 RNase 污染。

单位定义

1 单位指 50 μl 反应体系中，以 poly(rA)•oligo(dT)18 为模板，50℃ 条件下，20 分钟内催化 1 nmol 的 dTTP 掺入酸不溶性物中所需要的酶量。

浓度

15,000 units/ml。

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NEB代理 , RNA 试剂 , cDNA 合成

产品资料 – RNA 试剂 – cDNA 合成

模板置换反转录酶混合液

#M0466L 100 reactions

#M0466S 20 reactions

概述

模板置换反转录酶和其相应的反应缓冲液能够在反转录反应中有效地实现模板置换。混合液中含有独特的反转录酶和小鼠 RNase 抑制剂。与竞争对手的反转录酶产品不同，NEB 的产品不需要添加任何添加剂（如 PEG 或甜菜碱）来优化性能，从而简化了反应建立流程。与模板置换寡核苷酸（TSO）搭配使用，合成的 cDNA 3’端可以选择性地加入已知序列。由此获得的 cDNA 可进行 PCR 扩增，也可作为 5’RACE（ cDNA 末端快速扩增）或第二链 cDNA 合成的模板。

特性

 以极低起始量模板（单细胞/细胞核或 2 pg 总 RNA）制备 RNA-seq 文库

 以最低起始量为 10 ng 的总 RNA 进行 5’RACE

 降低 RNA-seq 或 5’RACE 的背景

 该酶混合液包含小鼠 RNase 抑制剂，不需要额外添加

 兼容各种模板置换寡核苷酸（TSOs）、反转录引物和 DNA 聚合酶,用于扩增全长 cDNA

 与其他的 RNA-seq 方法（例如:Smart-Seq）相比，操作更快捷

模板置换反转录酶混合液中的反转录酶（RT）在其到达 RNA 模板的 5’末端后会添加几个非模板源的核苷酸。这几个非模板源的核苷酸可以与已知序列的模板置换寡核苷酸（TSO）退火，促使反转录酶从 RNA 模板上切换到 TSO 上。得到的 cDNA 含有 3’末端添加有已知序列（TSO 的互补序列）。该特征可用于多种下游应用，例如 cDNA 扩增、5’RACE（cDNA 末端快速扩增）和第二链 cDNA 合成。说明书中有优化的实验流程。

图 1：模板置换流程概览

当到达 RNA 模板的 5’端时，反转录酶会在 cDNA 的 3’端添加几个非模板源的核苷酸。这些非模板源的核苷酸可以与包含已知序列的模板置换引物退火,从而促使反转录酶从 RNA 模板上切换到 TSO 上。所得到的 cDNA 在 3′ 端包含一个通用序列（TSO 的互补序列）

图 2：在单细胞 RNA-seq 实验中,模板置换反转录酶混合液相对于 Smart-seq2 方法的优势

gA.模板置换介导的 cDNA 扩增概述。反转录引物含有 5’接头，它与 TSO 一起在 cDNA 的 5’和 3’末端添加接头。之后可用识别接头序列的引物 PCR 扩增全部反转录产物。

B-D.使用 NEB 模板置换反转录酶混合液或 Smart-seq2 方法(Picelli, S. et al.(2014). Nat. Protoc. 9, 171-81)，用 10 μg Universal Human Reference（UHR） RNA （Agilent）与 ERCC RNA Spike-In Mix I（Thermo Fisher Scientific）生成 cDNA 文库。然后使用 NEBNext® Ultra™ II FS DNA 文库制备试剂盒（NEB＃E7805）将每个 cDNA 文库制成 Illumina 文库，并在 Nextseq 500 上使用 2 x 75 个循环测序。将测序采样 2 x 1.2 M 个 reads（除非另有说明），去掉接头 reads，并且使用 Prinseq 过滤。B.显示的是样品总 reads（Total reads）、去掉接头的 reads（Trimmed reads）和通过 Prinseq 过滤的 reads（Filtered reads）。插图列举了每种方法制备的 cDNA 文库的 Agilent Bioanalyzer 2100 结果。虚线框标注了非特异片段。C.使用 Salmon 将过滤的 reads 与 GENCODE 28 和 ERCC 转录物比对。图中的点表示从每个文库检测到的 TPM（每百万转录数）≥1 的转录物的数量作为测序深度。 D.使用 Hisat 2.0.7 将过滤的读数与 hg19 人参考基因组比对，并使用 Picard SAM / BAM RNA Seq Metrics 工具计算 RNA-seq 指标。该图显示了分布于外显子（红色），rRNA（橙色），内含子（绿色），基因间区域（蓝色）的匹配 reads 和不匹配 reads（灰色）的百分比。

图 3：模板置换反转录酶混合液在 5’RACE 的实验中操作简单,性能优异

A.模板置换介导的 5’RACE 概述。在模板置换反转录反应后，用反向基因特异性引物和正向 TSO 特异性引物进行 5’RACE PCR。

B.使用 NEB 模板置换反转录酶混合液 5’RACE 方案（左）或 Clontech SMARTer 5’/3’RACE 试剂盒（右）对多种 RNA 靶标的 5’RACE 产物进行琼脂糖凝胶分析。加入 1 μg 的 Jurkat 总 RNA，10 pg 的 8 kb 合成 RNA 和 10 ng 的 ERCC RNA Mix 1，用于评估作为转录物长度和拷贝数的性能。在 NEB 的反应中，反转录引物为 oligo (dT)40 VN，TSO 为 GCTAATCATTGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTACATrGrGrG，TSO 中特异性 PCR 引物用下划线标注。两种方法使用相同的基因特异性 PCR 引物。靶标名称和预期片段长度如图所示。

图 4：模板置换反转录酶混合液在第二链 cDNA 合成中操作简单，且可捕获完整的 5’末端转录产物

A.模板置换介导的第二链 cDNA 合成概述。在反转录反应后，RNA 模板水解，使用 TSO 作为引物延伸合成第二链 cDNA。

B.使用 1 kb 的合成 RNA 作为模板，使用 poly（dT）40 VN 作为第一链 cDNA 合成的反转录引物。使用模板置换介导的方法或 Gubler 在文献中描述的方法—R and Hoffman,BJ.(1983) Gene,25,263-269，对第二链 cDNA 合成进行三个平行实验。所得到的双链 cDNA 产物使用反向引物用 Sanger 法对第二链 cDNA 进行测序。结果显示模板含有转录起始位点（TSS），并标注出了匹配序列。添加到 cDNA 末端的 TSO 序列用灰色标注。未通过 Gubler 和 Hoffman 方法检测到的序列用蓝色标注。不可信读序区用黄色标注。

随产品提供的试剂

	储存温度(℃)	浓度
模板置换反转录缓冲液	-20	4 X

产品类别：

cDNA合成和反转录产品

PCR，qPCR 和扩增技术产品

应用

Oligo d(N)_n 引物适用于 mRNA 的扩增和测序，能与 mRNA 的 3´ -poly A 尾或带尾的 cDNA 退火。

注意：#S1316 5´ 末端未磷酸化。

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cDNA 合成选择表

#E6560S

#E6300S

#E6550S

#M0368S

#M0253S

#M0277S

#M0380S

cDNA 合成选择表

用于 cDNA 合成的引物

用于 cDNA 合成的引物

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ProtoScript® cDNA 第一链合成试剂盒

#E6300L150 次反应

#E6300S30 次反应

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特性

概述

ProtoScript cDNA 第一链合成试剂盒组份

ProtoScript® II cDNA 第一链合成试剂盒

#E6560L 150 次反应

#E6560S 30 次反应

相关产品

特性

概述

ProtoScript II cDNA 第一链合成试剂盒组份

M-MulV 反转录酶

#M0253L 50,000 units

#M0253S 10,000 units

特性

概述

来源

反应条件

质保声明

单位定义

浓度

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AMV 反转录酶

#M0277L 1,000 units

#M0277S 200 units

特性

概述

来源

反应条件

质保声明

单位定义

浓度

贮存注意

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ProtoScript® II 反转录酶

#M0368L10,000 units

#M0368S4,000 units

#M0368X40,000 units

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特性

概述

来源

反应条件

质保声明

单位定义

浓度

WarmStart® RTx 反转录酶

#M0380L 250 次反应

#M0380S 50 次反应

特性

概述

来源

反应条件

质保声明

单位定义

浓度

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模板置换反转录酶混合液

#M0466L 100 reactions

#M0466S 20 reactions

概述

特性

6 碱基随机引物

#S1230S 1.0 A260 unit

概述

ProtoScript^® cDNA 第一链合成试剂盒

ProtoScript^® II cDNA 第一链合成试剂盒

WarmStart^® RTx 反转录酶