所需设备和材料 10 μl、1000 μl 移液器、培养箱、显微镜（蓝色激发滤光片和红色发射滤光片）或流式细胞仪（488 nm 蓝色激光）
Staining procedure1. 让 AO 溶液 a) 在室温下静置 30 分钟以解冻。 溶液应避光。2． 用 PBS(-) 或生理盐水重悬有机体，调整细胞数至 106 细胞/mL（流式细胞仪）或 108-109 细胞/mL（显微镜）。 3． 将 3 μl AO 溶液加入 1 mL 微生物细胞悬液中，轻轻涡旋混合。 必要时可进行甲醛固定。 4． 将微生物细胞在室温下孵育 5 分钟。 5． 用流式细胞仪或显微镜分析染色细胞。 带有 ssDNA 的染料的最大波长为 420-460 nm 用于激发和 630-650 nm 用于发射。 dsDNA 染料的最大波长为 500 nm 激发和 520 nm 发射。
a) Since AO may be carcinogenic, be careful when handling and disposing.
1. J. E. Hobbie, et al., Use of Nucleopore Filters for Counting Bacteria by Fluorescence Microscopy. Appl Environ Microbiol. 1997;33:1225-1228.2. S. F. Nishino, et al., Direct Acridine Orange Counting of Bacteria Preserved with Acidified Lugol Iodine. Appl Environ Microbiol. 1986;52:602-604.