ATCC15834 农杆菌电转感受态细胞 表达分析 ATCC15834电转感受态细胞经特殊工艺制作，特别适合大质粒的转化。基因型为Agrobacterium rhizogenes pRi15834 （agropine type），经pCAMBIA2301质粒（卡那霉素抗性）检测转化效率>105 cfu/μg DNA。
ATCC15834 Electrocompetent Cell
农杆菌电转感受态细胞
ATCC15834；MSU440；Ar 1193；Ar A4；K599；C58C1；Agrobacterium rhizogenes 发根农杆菌；pCAMBIA2301；Streptomycin 链霉素；Rifampicin利福平；
| 货号 |
产品名称 |
规格 |
|
| MF2466-0500UL |
ATCC15834 Electrocompetent Cell 农杆菌电转感受态细胞 |
10×50μl |
|
| MF2466-2500UL |
ATCC15834 Electrocompetent Cell 农杆菌电转感受态细胞 |
50×50μl |
|
产品描述
发根农杆菌（Agrobacterium rhizogenes）是根瘤菌科农杆属的一种革兰氏阴性土壤细菌，能够侵染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。起关键作用的是其携带的Ri质粒，含有负责发根自主性生长和冠瘿碱合成的基因。结构上与Ti质粒类似，主要有致毒区（Vir），T-DNA区以及冠瘿碱合成功能区等。
根据合成冠瘿碱的不同，Ri质粒分为4种类型：1）甘露碱型；2）黄瓜碱型；3）农杆碱型；4）米奇矛型。
发根农杆菌菌株ATCC15834来源于American type culture collection (ATCC)，为发根农杆菌原始菌株。ATCC15834含pRi15834农杆碱型Ri质粒，具有广泛的宿主范围（禾本科，豆科，烟草等），特别适合对紫杉醇，青蒿等药用植物毛状根的诱导。
产品包装
| 组分编号 |
组分名称 |
货号（规格）
|
| MF2466-0500UL |
MF2466–2500UL |
| MF2466-A |
ATCC15834 Electrocompetent Cell |
10×50μl |
50×50μl |
| MF2466-B |
pCAMBIA2301 Control Vector (10ng/μl) |
10μl |
10μl |
注意事项
- 感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。
- 整个转化操作，严格根据相应温度及无菌条件要求进行。
3） 加入质粒的体积不应大于感受态体积的1/10。质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，会导致转化效率急剧下降。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
- 为确保高转化效率，整个操作过程应尽量轻柔，并保持低温。
5） 电转感受态细胞中不可混入气泡，转化高浓度的质粒可相应减少终涂板用量。
6） 平板上克隆密度过大时，由于营养不足，克隆生长变慢，菌落变小。为获得大菌落，应减少质粒用量。
7） ATCC15834生长缓慢，转化质粒后的ATCC15834涂布在含抗生素的平板上应生长72h。
8） 为了保证加的转化效率，发根农杆菌的培养建议使用TY培养基（配方见附表1）。
9） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
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附表1 固体和液体TY培养基配方
| 组分Component |
TY（液体）/升 |
TY（固体）/升 |
| 胰蛋白胨 Tryptone |
5g |
5g |
| 酵母提取物 Yeast extract |
3g |
3g |
| 琼脂 Agar |
/ |
15g |
| |
补水到1L，121℃，20min高压灭菌 |
补水到1L，121℃，20min高压灭菌 |
| 氯化钙 CaCl2 |
配制1M CaCl2水溶液，121℃，20min高压灭菌。之后按照10ml/L加入上方灭菌的液体营养液。 |
配制1M CaCl2水溶液，121℃，20min高压灭菌。之后按照10ml/L加入上方灭菌的液体营养液。 |
附表2 固体和液体YMB培养基配方
| 组分Component |
YMB（液体）/升 |
YMB（固体）/升 |
| 酵母提取物 Yeast extract |
1g |
1g |
| MgSO4·7H2O |
0.2g |
0.2g |
| K2HPO4 |
0.5g |
0.5g |
| NaCl |
0.1g |
0.1g |
| 甘露醇 |
10g |
10g |
| 琼脂 Agar |
/ |
15g |
| |
补水到1L，完全溶解后，调pH至7.0，121℃，20min高压灭菌 |
补水到1L，完全溶解后，调pH至7.0，121℃，20min高压灭菌 |
附表3常见发根农杆菌对抗生素敏感性总表
| 农杆菌菌株 |
羧苄（carb） |
链霉素（strep） |
利福平（rif） |
庆大霉素（gent） |
卡那霉素（kan） |
| Ar A4 |
S |
S |
S |
S |
R |
| Ar Qual |
S |
R |
S |
R |
S |
| Ar 1193 |
R |
R |
R |
S |
S |
| K599 |
S |
R |
S |
S |
S |
| C58C1 |
S |
R |
R |
S |
S |
| MSU440 |
S |
R |
S |
S |
S |
| ATCC15834 |
S |
S |
S |
S |
S |
| 【备注】：S代表敏感，R代表抗性。 |
附表4 ATCC15834菌株质粒转化筛选抗生素使用浓度
| 抗生素 |
配方 |
筛选培养基 |
母液 |
工作液 |
| 硫酸卡那霉素 |
去离子水溶解，0.22μm滤膜除菌 |
YMB 或 TY |
100mg/ml |
100μg/ml |
| 壮观霉素 |
去离子水溶解，0.22μm滤膜除菌 |
TY |
50mg/ml |
70μg/ml |
ATCC15834 农杆菌电转感受态细胞 表达分析
ATCC15834 农杆菌电转感受态细胞 表达分析
