微球菌核酸酶 来源于金黄色葡萄球菌(菌株ATCC #27735)


基本信息

产品名称 微球菌核酸酶 来源于金黄色葡萄球菌(菌株ATCC #27735)
英文名称 Nuclease micrococcal from Staphylococcus aureus(Strain ATCC #27735)
别名 MNase;Endonuclease micrococcal;Micrococcal endonuclease
英文别名 MNase;Endonuclease micrococcal;Micrococcal endonuclease
规格或纯度 ≥6,000 units/mg protein
运输条件 冰袋运输
单位定义 Unit Definition: One Unit corresponds to a change in optical density of 1.0 at 260 nm at 37°C, pH 8.0, using DNA as the substrate.
酶学委员会编号 3.1.31.1
生化机理 Cleavage of DNA by Nuclease micrococcal is greater at the 5′ sides of A or T nucleotides than at G or C. Hydrolyzes 5′-phosphodiester bonds of DNA.

一般描述

 微球菌核酸酶 来源于金黄色葡萄球菌(菌株ATCC #27735)

微球菌核酸酶 来源于金黄色葡萄球菌(菌株ATCC #27735)

安全信息

个人防护设备 Eyeshields, Gloves, type N95 (US), type P1 (EN143) respirator filter
WGK 3

相关属性

CAS编号 9013-53-0
储存温度 2-8°C储存
MDL号 MFCD00131731
EC号 232-748-0
品牌 金畔生物

ATCC15834 农杆菌电转感受态细胞 表达分析

ATCC15834 农杆菌电转感受态细胞 表达分析 ATCC15834电转感受态细胞经特殊工艺制作,特别适合大质粒的转化。基因型为Agrobacterium rhizogenes pRi15834 (agropine type),经pCAMBIA2301质粒(卡那霉素抗性)检测转化效率>105 cfu/μg DNA。

ATCC15834 Electrocompetent Cell

农杆菌电转感受态细胞

ATCC15834MSU440Ar 1193Ar A4K599C58C1Agrobacterium rhizogenes 发根农杆菌pCAMBIA2301;Streptomycin 链霉素;Rifampicin利福平;

货号 产品名称 规格  
MF2466-0500UL ATCC15834 Electrocompetent Cell 农杆菌电转感受态细胞 10×50μl
MF2466-2500UL ATCC15834 Electrocompetent Cell 农杆菌电转感受态细胞 50×50μl  

产品描述

发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)是根瘤菌科农杆属的一种革兰氏阴性土壤细菌,能够侵染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。起关键作用的是其携带的Ri质粒,含有负责发根自主性生长和冠瘿碱合成的基因。结构上与Ti质粒类似,主要有致毒区(Vir),T-DNA区以及冠瘿碱合成功能区等。

根据合成冠瘿碱的不同,Ri质粒分为4种类型:1)甘露碱型;2)黄瓜碱型;3)农杆碱型;4)米奇矛型。

发根农杆菌菌株ATCC15834来源于American type culture collection (ATCC),为发根农杆菌原始菌株。ATCC15834含pRi15834农杆碱型Ri质粒,具有广泛的宿主范围(禾本科,豆科,烟草等),特别适合对紫杉醇,青蒿等药用植物毛状根的诱导。

产品包装

组分编号 组分名称

货号(规格)

MF2466-0500UL MF24662500UL
MF2466-A ATCC15834 Electrocompetent Cell 10×50μl 550μl
MF2466-B pCAMBIA2301 Control Vector (10ng/μl) 10μl 10μl

 注意事项

  • 感受态细胞应保存在-80,不可反复冻融和放置时间过长,以免降低感受态细胞的转化效率。
  • 整个转化操作,严格根据相应温度及无菌条件要求进行。

3) 加入质粒的体积不应大于感受态体积的1/10。质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,会导致转化效率急剧下降。质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。

  • 为确保高转化效率,整个操作过程应尽量轻柔,并保持低温。

5) 电转感受态细胞中不可混入气泡,转化高浓度的质粒可相应减少终涂板用量。

6) 平板上克隆密度过大时,由于营养不足,克隆生长变慢,菌落变小。为获得大菌落,应减少质粒用量。

7) ATCC15834生长缓慢,转化质粒后的ATCC15834涂布在含抗生素的平板上应生长72h。

8) 为了保证加的转化效率,发根农杆菌的培养建议使用TY培养基(配方见附表1)。

9) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

    • 将0.1 cm电基杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净吸水纸上5min,待其沥干水分,正置5min,使乙醇充分挥发干净,立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖,冰中静置5min使其充分降温。
    • 取-80℃保存的农杆菌感受态细胞插入冰中5min,待其完全融化。
    • 往50μl感受态细胞悬液中加入0.01~1μg(体积不大于6μl)质粒DNA,用手拍打管底使其混匀,立即插入冰中。用枪轻轻吹打混匀感受态细胞-质粒之后快速转移到电基杯中,盖上杯盖,空管保留待用【注意:质粒DNAhao用试剂盒抽提,且用双蒸水溶解。由于感受态转化效率较高,*次使用hao做预试验确定加的质粒用量】。
    • 启动电转仪,设置参数:C=25 μF,PC=200 ohm,V=2400 V(此参数参考Bio-rad,具体使用请参考电转仪推荐步骤来操作),将电基杯从冰中取出,吸水纸吸干外表面水分,快速放入电转槽中,启动电基,电基完成快速插入冰中。
    • 加入1ml无抗生素的TY并转移到感受态空管中,于28℃振荡培养2~3h。

    6) 6,000rpm离心1min,留取 100ul左右上清,之后用枪轻轻吹打重悬菌体。之后加到含相应抗生素的TY平板上,用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min,待液体被吸收后,倒置平板,28℃培养72h。

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附表1 固体和液体TY培养基配方

组分Component TY(液体)/升 TY(固体)/升
胰蛋白胨 Tryptone 5g 5g
酵母提取物 Yeast extract 3g 3g
琼脂 Agar / 15g
  补水到1L,121℃,20min高压灭菌 补水到1L,121℃,20min高压灭菌
氯化钙 CaCl2 配制1M CaCl2水溶液,121℃,20min高压灭菌。之后按照10ml/L加入上方灭菌的液体营养液。 配制1M CaCl2水溶液,121℃,20min高压灭菌。之后按照10ml/L加入上方灭菌的液体营养液。

附表2 固体和液体YMB培养基配方

组分Component YMB(液体)/升 YMB(固体)/升
酵母提取物 Yeast extract 1g 1g
MgSO4·7H2O 0.2g 0.2g
K2HPO4 0.5g 0.5g
NaCl 0.1g 0.1g
甘露醇 10g 10g
琼脂 Agar / 15g
  补水到1L,完全溶解后,调pH至7.0,121℃,20min高压灭菌 补水到1L,完全溶解后,调pH至7.0,121℃,20min高压灭菌

附表3常见发根农杆菌对抗生素敏感性总表

农杆菌菌株 羧苄(carb) 链霉素(strep) 利福平(rif) 庆大霉素(gent) 卡那霉素(kan)
Ar A4 S S S S R
Ar Qual S R S R S
Ar 1193 R R R S S
K599 S R S S S
C58C1 S R R S S
MSU440 S R S S S
ATCC15834 S S S S S
备注】:S代表敏感,R代表抗性。

附表4 ATCC15834菌株质粒转化筛选抗生素使用浓度

抗生素 配方 筛选培养基 母液 工作液
硫酸卡那霉素 去离子水溶解,0.22μm滤膜除菌 YMB 或 TY 100mg/ml 100μg/ml
壮观霉素 去离子水溶解,0.22μm滤膜除菌 TY 50mg/ml 70μg/ml

ATCC15834 农杆菌电转感受态细胞 表达分析

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