Fluo-8, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯

——zui亮的Ca²⁺绿色荧光探针

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Fluo-8 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯；Fluo-2, AM；Fluo-2 Medium Affinity, Acetoxymethyl Ester; 可见光激发波长Ca²⁺荧光探针；Fluo-3； Fluo-4；高通量筛选 HTS Screen Assay；

Fluo-8（Fluo–2 Medium Affinity），是目前zui亮的可见光激发波长Ca²⁺荧光探针，其荧光强度比Fluo-4强两倍，比Fluo-3强四倍。Fluo-8具中等程度的Ca²⁺亲和力，几乎接近Fluo-3，Fluo-4（Fluo-3: Kd=0.4μM、Fluo-4: Kd=0.36μM、Fluo-4: Kd= 0.389μM），使用上几乎同Fluo-3和Fluo-4。Fluo-8不仅维持Fluo-3，Fluo-4便捷的光谱检测特性，与Ca²⁺结合后的zui大激发波长为490nm，zui大发射波长为514nm。而且具有改善的细胞载入和Ca²⁺响应能力。Fluo-8加载具较弱的温度依赖性，在室温或37℃孵育皆染色良好，不像Fluo-3，Fluo-4严格要求在37℃孵育，此特征使其更适用于HTS高通量筛选实验。Fluo-8应用广泛，与许多细胞系和靶向样本兼容，不会受配体或靶标本身信号干扰。Fluo-8可通过激光共聚焦显微镜、流式细胞仪、荧光酶标仪、荧光显微镜等来检测胞内钙离子水平的变化。Fluo-8, AM是Fluo-8的一种乙酰甲酯衍生物，具有细胞膜渗透性，只需简单培养，即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内，即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Fluo-8，从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。

可见光激发Ca²⁺荧光探针的优势：

与紫外光激发的荧光探针相比，如Fura-2和Indo-1，可见光激发Ca²⁺探针具有以下特点：

1）适用于大多数的激光共聚焦测钙系统，包括共聚焦激发扫描显微镜以及流式细胞仪等。

2） 具有更强的染料吸收性能，使得更低浓度的探针即可成功检测Ca²⁺变化，从而降低对活细胞的光毒性。

3）Ca²⁺依赖性荧光强度增强，对Ca²⁺变化水平检测敏感度更高。

4）降低样品自荧光以及光散射的干扰。

5）兼容光激活探针以及UV-激发试剂，因此更方便于多参数检测。

6）无光谱偏移。

Fluo-8, AM相比较于Fluo-3，Fluo-4的优势：

1）目前zui亮的可见光激发波长Ca²⁺荧光探针，荧光强度是Fluo-4的两倍，Fluo-3的四倍；

2）荧光探针加载更灵活快速，室温或37℃孵育染色效果好，不像Fluo-3、Fluo-4严格要求在37℃孵育；

3） 维持Fluo-3、Fluo-4的检测光谱特性，与Ca²⁺结合后的zui大激发波长为490nm，zui大发射波长为514nm。4）50μg小包装供应，使用方便，且能很好保证产品的稳定性。

Fluo-8, AM的应用图片：

Fig. 1, U2OS cells were seeded overnight at 40,000 cells per 100 µL per well in a 96-well black wall/clear bottom costar plate. The growth medium was removed, and the cells were incubated with 100 µl of 4 µM Fluo-4, AM or Fluo-8, AM in HHBS at 37 °C, 5% CO₂incubator for 1 hour. The cells were washed twice with 200 µl HHBS, then imaged with a fluorescence microscope using FITC channel.

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Fluo-8, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针（超级纯）

Fluo-8, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针（超级纯）

Fluo-3, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针 细胞染色：Fluo-3是一种常用的可见光激发波长Ca2+荧光探针，具有较高的Ca2+捕获能力，通过荧光强度的变化直接反映Ca2+信号的动力学变化。

Fluo-3, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯

zui常用的Ca²⁺绿色荧光探针

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Fluo-3 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯；Fluo–3, Acetoxymethyl Ester; 可见光激发波长Ca²⁺荧光探针；Fluo-4；Fluo-8, AM；Rhod-2, AM；CAS NO：121714-22-5；

Fluo-3是一种常用的可见光激发波长Ca²⁺荧光探针，具有较高的Ca²⁺捕获能力，通过荧光强度的变化直接反映Ca²⁺信号的动力学变化。当Fluo-3以游离配体形式存在时几乎是非荧光性的，但一旦与Ca²⁺结合即可产生很强的荧光，荧光信号增强60~80倍，此时的zui大激发波长为506nm，zui大发射波长为526nm。可通过激光共聚焦显微镜或流式细胞仪来检测胞内钙离子水平的变化。Fluo-3, AM是Fluo-3的一种乙酰甲酯衍生物，具有细胞膜渗透性，只需简单培养，即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内，即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Fluo-3，从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。

可见光激发Ca²⁺荧光探针的优势：

与紫外光激发的荧光探针相比，如Fura-2和Indo-1，可见光激发Ca²⁺探针具有以下特点：

1）适用于大多数的激光共聚焦测钙系统，包括共聚焦激发扫描显微镜以及流式细胞仪等。

2） 具有更强的染料吸收性能，使得更低浓度的探针即可成功检测Ca²⁺变化，从而降低对活细胞的光毒性。

3）Ca²⁺依赖性荧光强度增强，对Ca²⁺变化水平检测敏感度更高。

4）降低样品自荧光以及光散射的干扰。

5）兼容光激活探针以及UV-激发试剂，因此更方便于多参数检测。

6）无光谱偏移。

Fluo-3, AM的应用：

Fluo-3自1989年发现之后，其成像技术常用来揭示钙离子信号传递内许多元素发展过程的空间动力学。还能被广泛用在流式分析，比如笼锁Ca²⁺螯合剂光活化、第二信使、神经传导物质研究以及细胞水平的药物筛选实验。

Fluo-3, AM的应用实例：

Fig. 2， Metal-ion response screening for fluo-3. The maximum relative fluorescence intensity was measured for identical indicator concentrations in solutions containing 10 mM EGTA + 10 µM TPEN, 1 µM ion (100 µM for Mg²⁺) and 100 µM ion (10 mM for Mg²⁺). Results are plotted as fluorescence changes relative to the ion-free (10 mM EGTA + 10 µM TPEN) reference solution expressed as (F-Fo)/Fo, where F is the fluorescence intensity of ion-containing solutions and Fo is the fluorescence intensity of the reference solution. Blue bars indicate the response to 1 µM ion (100 µM for Mg²⁺), and red bars indicate the response to 100 µM ion (10 mM for Mg²⁺).

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 — —Written/Edited by V. Shallan
 

上海金畔生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持“品质保障“的原则为广大客户提供优质产品。

Fluo-3, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针 细胞染色

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Mag-Fluo-4 AM, Cell Permeant 镁离子荧光探针

Mag-Fluo-4 AM；Mg²⁺ Indicator 镁离子指示剂（荧光探针）；Fluo-4 AM；Low-affinity Ca²⁺ indicator 低亲和钙离子指示探针；Magnesium Green Indicator；

具细胞膜渗透性的Mag-Fluo-4 AM是Fluo-4 AM（货号：MX4504-50UG）的一种结构类似物，对镁离子（Mg²⁺）和钙离子（Ca²⁺）的Kd值分别是4.7mM和22µM，是一种非常有用的细胞内镁离子指示剂和低亲和性钙离子指示剂。

产品优势

1）镁离子指示探针

Mag-Fluo-4与Thermo（invitrogen）公司的Magnesium Green indicator相比，具更加灵敏的Mg2+荧光反应。由于细胞内Mg2+的生理波动幅度通常很小，这一点点灵敏度的提高都是值得考虑的优势。与Fluo-4一样，Mag-Fluo-4在不含二价阳离子的情况下基本无荧光，一旦与Mg2+结合后，呈明显的荧光加强，但无光谱迁移（见下图）。

图. Mag-Fluo-4在0-50mM Mg2+溶液内的荧光发射光谱

2）钙离子指示探针

Mag-Fluo-4是Fluo-4的类似物，具有更低钙离子结合亲和性，特别适合用于检测1 µM~1 mM范围内的胞内钙离子水平。

产品特性

1） 同义名：Mag-Fluo-4 acetoxymethyl ester, cell permeant

2） 分子式：C₃₇H₃₃F₂NO₁₈

3） 分子量：817.65 g/mol

4） 外观：橙色固体

5） 纯度：≥90%

6） Ex/Em：494/516 nm

7） 溶解性：溶于DMSO

8） 化学结构式：

注意事项

1） 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 储存液制备

取一管低温保存的Mag-Fluo-4 AM，置于室温回温至少20min。之后加入高质量无水DMSO配制成1~5mM储存液，比如50μg Mag-Fluo-4 AM（Mw：817.65 g/mol）溶于12μl DMSO，充分溶解后，即得到5mM储存液。【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，且要避光保存。尽快使用完。

2. 操作步骤

【注意】以下使用方法仅作参考，需根据具体的细胞类型和实验要求做出调整。

应用示例（来自文献，仅用作参考）

文献一、Zheng JM et al. MagT1 regulated the odontogenic differentiation of BMMSCs induced byTGC-CM via ERK signaling pathway. Stem Cell Res Ther. 2019 Jan 31;10(1):48.

使用方法（细胞内镁离子水平的流式检测）：1）用生理培养液（120 mM NaCl, 20 mM HEPES, 4.7 mM KCl, 1.2 mM KH2PO4, 1.2 mM MgSO4, 1.25 mM CaCl2, and 10 mM glucose）于37℃预孵育BMMSCs细胞10min使其达到离子梯度的稳定和平衡；2）用DMSO配制Mag-Fluo-4-AM储存液1mM；3）取4ul Mag-Fluo-4-AM储存液（1mM）和5ul 20% F-127，加入1ml培养基内，充分混匀；4）取0.25ml 分散液加入0.75ml含细胞培养液，使得探针终浓度为1uM；继续孵育30min，之后清洗细胞3次，之后再孵育30min保证细胞内AM基团的完全去酯化；5）之后用流式细胞仪分析荧光强度（Ex/em:480/520nm）。

Fig 1. MagT1 knockdown reduced intracellular Mg2+ level in BMMSCs. Intracellular Mg2+ level was significantly reduced in MagT1 knockdown BMMSCs measured by indicator Mag-Fluo-4-AM using flow cytometry.

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