酵母碳基础培养基#B9017S,蛋白表达和纯化技术,表达系统:酵母

产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统：酵母

酵母碳基础培养基

#B9017S 12 g

特性

 可克隆和表达对大肠杆菌有毒性的基因

 可同时表达多个基因

 无需昂贵的抗生素或甲醇

 易操作的实验步骤，适用于无酵母表达经验者
 有吸引力的商业授权

pKLAC2 载体限制性酶切图谱请参见 351 页

概述

K. lactis 蛋白表达试剂盒提供了一种在乳酸克鲁维酵母（Kluyveromyces lactis）中表达目的基因的简便方法。目的基因克隆到 pKLAC 系列整合载体中，既可表达胞内蛋白，亦可表达分泌型蛋白。与其它酵母和细菌表达系统相比，K. lactis 蛋白表达系统有着诸多优点。首先，乳酸克鲁维酵母具有高培养密度及整合多拷贝质粒的能力，使其可成功制备大量的高表达蛋白质；其次，pKLAC1 系列载体使用强 LAC4 启动子，该启动子经修饰，在大肠杆菌中无背景表达，因此，可用于对大肠杆菌有毒性的基因表达；再有，试剂盒提供高效转化的 K. lactis 感受态细胞，使得该系统适用于需要大量转化子的实验，比如利用 cDNA 文库进行表达克隆；另外，酵母转化子的筛选不需要昂贵的抗生素，培养基中也不需要甲醇；最后，K. lactis 细胞表达的蛋白质可以进行翻译后修饰，因而可成为细菌表达系统的有用替代。

pKLAC2 属于通用表达载体。利用这些载体既可使重组蛋白在细胞内表达，也能通过与 K. lactis α-factor 的融合实现分泌表达。pKLAC2 的多克隆位点与 NEB 其它表达系统相兼容。

GG799 是 K. lactis 蛋白表达试剂盒中提供的基础菌株。其特点是细胞生长密度与异源蛋白表达效率极高，GG799 细胞未经遗传修饰。

NEB代理 , 蛋白表达和纯化技术 , 表达系统：酵母
蛋白质的分泌过程。在细胞核中，整合表达载体编码了一个含有 ɑ-MF 结构域（蓝色）和目的蛋白（黑色）的融合蛋白。融合蛋白表达后，位于 ɑ-MF 上的信号肽就会指导融合蛋白转运至内质网（ER），信号肽即被信号肽酶（SP）切除。融合蛋白质转运至高尔基体，Kex 蛋白酶在此将 α-MF 结构域切除。随后，目的蛋白质被分泌到细胞外。

K. lactis 的蛋白表达。SDS-PAGE 电泳分离检测分泌性表达的重组麦芽糖结合蛋白（MBP），菌体生长在富含蛋白胨（peptone）的培养基中，直接上样检测。考马斯亮蓝染色鉴定。泳道 1：蛋白分子量 Marker；泳道 2：野生型 K. lactis 细胞培养液（15 μl）；泳道 3：整合有大肠杆菌 malE 基因表达框的 K. lactis 细胞培养液（15 μl）。

K. lactis 蛋白表达试剂盒包括

– pKLAC2 载体和 pKLAC1-malE 对照质粒

– SacII

– 整合测序引物套装

– K. lactis GG799 感受态细胞和转化试剂
– 酵母碳基础培养基与乙酰胺溶液

上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375

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BD Difco291920,BD Difco YNB 酵母氮源基础,无氨基酸

BD Difco YNB 酵母氮源基础（无氨基酸）：酵母氮源基础（Yeast Nitrogen Base，YNB），亦可称为酵母基础氮源，是酵母营养缺陷型筛选培养基（Drop-out medium）的组分。YNB为酵母生长提供无氨基酸氮源和生长因子。本产品含硫酸铵，不含氨基酸。

BD Difco YNB 酵母氮源基础（无氨基酸）
(Yeast Nitrogen base without Amino Acids)

产品别名：
无氨基酸酵母氮源；无氨基酵母氮源；酵母氮源基础（无氨基酸）；YNB（无氨基酸）；Yeast Nitrogen base without Amino Acids；
基本介绍 BD Difco YNB 酵母氮源基础（无氨基酸）
酵母氮源基础（Yeast Nitrogen base，YNB），亦可称为酵母基础氮源，是酵母营养缺陷型筛选培养基（Drop-out medium）的组分。YNB为酵母生长提供无氨基酸氮源和生长因子。

本产品含硫酸铵，不含氨基酸。

产品配方（Difco™ Yeast Nitrogen base without Amino Acids，每升含量）：

氮源（Nitrogen Source）
硫酸铵 Ammonium Sulfate	5.0g
维生素（Vitamins）
生物素 Biotin	2.0μg
泛酸钙 Calcium Pantothenate	400.0μg
叶酸 Folic Acid	2.0μg
肌醇 Inositol	2,000.0μg
烟酸 Niacin	400.0μg
对氨基苯甲酸 p-Aminobenzoic Acid	200.0μg
盐酸吡哆醇 Pyridoxine Hydrochloride	400.0μg
核黄素 Riboflavin	200.0μg
盐酸硫胺素 Thiamine Hydrochloride	400.0μg
微量元素（Compounds Supplying Trace Elements）
硼酸 Boric Acid	500.0μg
硫酸铜 Copper Sulfate	40.0μg
碘化钾 Potassium Iodide	100.0μg
氯化铁 Ferric Chloride	200.0μg
硫酸锰 Manganese Sulfate	400.0μg
钼酸钠 Sodium Molybdate	200.0μg
硫酸锌 Zinc Sulfate	400.0μg
盐（Salts）

硫酸镁 Magnesium Sulfate	0.5g
氯化钠 Sodium Chloride	0.1g
氯化钙 Calcium Chloride	0.1g

产品特征（BD Difco YNB 酵母氮源基础（无氨基酸））：

1）外观：类白色、自由流动、均匀分布粉末

2）溶液：0.67%（1×）或6.7%（10×）溶液，搅拌促进溶解于蒸馏水。1×溶液呈无色*灰黄色，透明；10×溶液呈黄色透明。
3） pH（25°C）：pH 5.4 ± 0.2

配制方法（Difco™ Yeast Nitrogen base without Amino Acids）：详见Maokangbio或BD Difco说明书。

产品订购：BD Difco正品，分装供应

品牌	名称	货号
BD Difco	YNB 酵母氮源基础（无氨基酸）	291920
BD Difco	YNB 酵母氮源基础（无氨基酸）	291920

Yeast Transformation Kit酵母转化试剂盒,酵母双杂交实验

Yeast Transformation Kit 酵母转化试剂盒酵母双杂交实验：本酵母转化试剂盒（Yeast Transformation Kit）是基于高效的聚乙二醇/醋酸锂（PEG/LiAc）方法来制备和转化酵母菌感受态细胞的一款试剂盒，操作简单快捷，适用菌株广泛，能用于多个质粒的共同转化。每个试剂盒可做200次质粒的转化。

Yeast Transformation Kit 酵母转化试剂盒

酵母双杂交分析（Yeast two-hybrid assay）；Y2HGold Chemically Competent Cell 感受态细胞；GAL4；金担子素 Aureobasidin A （AbA）；DO Supplement省却成分添加剂；

产品信息

产品名称	产品编号	规格
Yeast Transformation Kit 酵母转化试剂盒	MF2501-200T	200T

产品描述

本酵母转化试剂盒（Yeast Transformation Kit）是基于高效的聚乙二醇/醋酸锂（PEG/LiAc）方法来制备和转化酵母菌感受态细胞的一款试剂盒，操作简单快捷，适用菌株广泛，能用于多个质粒的共同转化。每个试剂盒可做200次质粒的转化。

产品组分

组分编号	组分名称	规格	储存方法
MF2501-A	1M LiAc Solution 1M醋酸锂溶液	50 ml	室温保存
MF2501-B	50% PEG Solution 50%PEG溶液	50 ml	室温保存
MF2501-C	Carrier DNA (5mg/ml) 载体DNA（5mg/ml）	2×1ml	-20ºC保存

保存与运输方法

保存：Carrier DNA置于-20ºC保存，其他室温保存，1年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

*次使用Carrier DNA，需要将装Carrier DNA的整个管子置于沸水中煮沸5min，然后立即放在冰上，之后放在-20ºC保存。下次使用时需在冰上解冻Carrier DNA。
PEG溶液低温情况下会析出，使用前常温温育确保完全溶解才使用。
酵母转化整个过程请无菌操作。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法整理内容

一、酵母感受态细胞的制备

二、酵母转化

Snailase 蜗牛酶核酸纯化

Snailase 蜗牛酶核酸纯化，是从蜗牛嗦囊和消化道提炼和制备的一种混合酶，含纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、淀粉酶、脱羧酶、蛋白酶等20多种酶，能够用于酵母细胞壁的溶解，广泛用于细胞生物学和基因工程学研究。

Snailase 蜗牛酶

温馨提示

见我司（生物）整理的Zymolyase^®酵母细胞壁溶解酶（酵母裂解酶）产品专题。

产品标签

Zymolyase^®酵母细胞壁溶解酶；Yeast lytic enzyme 酵母裂解酶；Lyticase；Lywallzyme 真菌溶壁酶；Protoplast 原生质体；Spheroplast 原生质球；

产品信息

产品名称	产品编号	规格	价格（元）
Snailase 蜗牛酶	MF0213-1G	1g	80
Snailase 蜗牛酶	MF0213-5G	5g	200
Snailase 蜗牛酶	MF0213-25G	25g	660

产品描述

蜗牛酶（Snailase），是从蜗牛嗦囊和消化道提炼和制备的一种混合酶，含纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、淀粉酶、脱羧酶、蛋白酶等20多种酶，能够用于酵母细胞壁的溶解，广泛用于细胞生物学和基因工程学研究。还能用作饲料添加剂，提高饲料的消化率；也可用作果汁澄清、果酱制作。

酶活性鉴定方法

将蜗牛酶溶解于SED缓冲液，配制10mg/ml的浓度。取1ml处理好的酵母悬液，加入250µl（10mg/ml）的蜗牛酶，混匀后于30℃酶解2h。

SE缓冲液：1M 山梨醇，25mM EDTA, pH 8.0；

SED缓冲液：19ml SE 缓冲液加入1ml DTT；

酶活性鉴定结果

破壁率：pH5.8～7.2等渗的山梨醇溶液中，每g细胞经30～40mg酶在37℃酶解1h，即可溶解细胞壁，破壁率80～90%以上。

破壁活性：每μg的酶，30℃，2h内可有效降解1.28×10⁶个酵母细胞。

不同酶量对相同酵母细胞的破壁作用：以6.2×10⁸个酵母细胞为研究对象，随酶量的增加，更多的酵母被消化。1h内，80μg时酶的作用效率越高，800μg时被消化的酵母越多。

酶活性持续性：连续时间抽样后经浊度和蛋白浸出量分析表明，30℃，1h，酶活性具有持续活性。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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货号	名称	规格
MF0209-3KU	Lyticase (10U/μl) 酵母溶壁酶	3KU
MF0210-5KU	Lyticase from Arthrobacter luteus 酵母溶壁酶，来自藤黄节杆菌	5KU
MF0212-200MG	Zymolyase-20T from Arthrobacter luteus 酵母溶壁酶，来自藤黄节杆菌	200mg
MF0211-500MG	Zymolyase-100T from Arthrobacter luteus 酵母溶壁酶，来自藤黄节杆菌	500mg
MF0213-1G	Snailase 蜗牛酶	1g
MX7356-100MG	Lywallzyme 真菌溶壁酶	100mg
MF0401-15KU	DNase I from Bovine Pancreas 脱氧核糖核酸酶I，来源于牛胰腺	15KU
MF0203-100MG	RNase A from Bovine Pancreas 核糖核酸酶A，来源于牛胰腺	100mg

Snailase 蜗牛酶核酸纯化

酵母双杂交用甘油菌克隆与表达分析

AH109 Yeast Strain 酵母双杂交用甘油菌克隆与表达分析，AH109是GAL4系统酵母双杂交用实验菌株，来源于PJ69-2A酵母菌株，引入lacZ报告基因从而产生AH109。AH109是MATa型，能直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过接合（mating）操作进行蛋白相互作用验证或双杂交文库筛选和构建。

AH109 Yeast Strain 酵母双杂交用甘油菌

Matchmarker GAL4双杂交系统；Y2HGold；pGBKT7；Y187；pGADT7；AUR1-C；Aureobasidin A （AbA）；金担子素；

产品名称	产品编号	规格
AH109 Yeast Strain 酵母双杂交用甘油菌	MF2355-300UL	300μl

AH109是GAL4系统酵母双杂交用实验菌株，来源于PJ69-2A酵母菌株，引入lacZ报告基因从而产生AH109。

AH109是MATa型，能直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过接合（mating）操作进行蛋白相互作用验证或双杂交文库筛选和构建。AH109-GAL4酵母双杂交系统需要两种质粒配套使用，分别为pGBKT7和pGADT7。前者筛选标志为Trp，用于表达DNA-BD与诱饵蛋白（bait）的融合蛋白；后者筛选标志为Leu，用于表达AD与诱捕蛋白（prey）的融合蛋白。AH109有四个报告基因：lacZ，HIS3, ADE2, MEL1，分别由三个完全异源的Gal4反应启动元件-G1，G2，M1调控，这三种启动子只有GAL4识别的17bp核心区相同，其余部分都不同。这一特征有效缩减假阳性发生的概率。因为，任何诱捕蛋白单独结合引起假阳性都需要识别3个不同序列，激活4个报告基因表达。

MATa, trp1-901, leu2-3, 112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ, LYS2::GAL1_UAS^–Gal1_TATA^–His3, MEL1GAL2_UAS^–Gal2_TATA^–Ade2, URA3::MEL1_UAS^–MEL1_TATA- lacZ

基本信息

培养基：YPDA

培养条件：28℃，YPDA，有氧培养

保存方式：30%甘油，-20℃保存

转化方式：PEG/LiAC；电转；

基本应用：酵母双杂交实验

使用说明

生物提供的各批次质粒菌株发货前均经过严格的多重验证，如存在质量问题，请在收到产品三个月内通知我司。收到甘油菌后，请及时在固体平板上划线培养，挑取单菌落接种到液体培养基中，震荡培养后使用并保存新的甘油菌。

注意事项

1/使用甘油菌时可不完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂布固体琼脂平板即可；也可完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，菌株的活力会逐渐下降。

2/为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

相关产品

货号	名称	规格
MF2351-300UL	Y2HGold Yeast Strain 酵母双杂交用甘油菌	300μl
MF2352-1000UL	Y2HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞	10×100μl
MF2353-300UL	Y187 Yeast Strain 酵母双杂交用甘油菌	300μl
MF2354-1000UL	Y187 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞	10×100μl
MF2355-300UL	AH109 Yeast Strain 酵母双杂交用甘油菌	300μl
MF2356-1000UL	AH109 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞	10×100μl
MF2501-200T	Yeast Transformation Kit 酵母转化试剂盒	200T
MS6303-350G	YPDA Agar Medium YPDA琼脂培养基	350g
MS6304-250G	YPDA Medium YPDA液体培养基	250g

AH109 Yeast Strain 酵母双杂交用甘油菌克隆与表达分析

YNB Without Amino Acids 酵母基础培养基,酵母转化试剂盒

YNB Without Amino Acids 酵母基础培养基，是酵母营养缺陷型筛选培养基（Drop-out medium）的组分。YNB为酵母生长提供无氨基酸氮源和生长因子。

YNB Without Amino Acids 酵母氮源基础（无氨基酸）

YNB 酵母氮源基础；SD base；DO Supplement-His 选择性氨基酸混合物；酵母营养缺陷培养基；BD 291940/291920；酵母转化试剂盒；

产品名称	产品编号	规格
YNB Without Amino Acids 酵母氮源基础（无氨基酸）	MS6305-100G	100g
YNB Without Amino Acids 酵母氮源基础（无氨基酸）	MS6305-500G	500g

可提供2kg，10kg，50kg更大包装定制，请咨询。

产品描述

酵母氮源基础（Yeast Nitrogen Base，YNB），亦可称为酵母基础氮源，是酵母营养缺陷型筛选培养基（Drop-out medium）的组分。YNB为酵母生长提供无氨基酸氮源和生长因子。本品含硫酸铵，不含氨基酸。

产品配方（酵母氮源基础（无氨基酸），每升含量）：

配制方法完全配法

为了方便过滤，按照如下方法配制10×母液：依次溶解6.7g 无氨基酵母氮源基础，5g 葡萄糖或其它等量碳水化合物，以及5-10 mg%需要的氨基酸，于100ml蒸馏水（或去离子水），若有必要，可加热促溶。混匀。
用0.22um滤膜过滤除菌，之后置于2-8°C保存。

YNB Without Amino Acids 酵母基础培养基

SD/-His Broth 酵母缺陷型完全培养基

SD/-His Broth 酵母缺陷型完全培养基: 就是缺乏组氨酸（His）的酵母缺陷型液体培养基，主要用于单质粒酵母转化筛选和单/双杂交系统报告基因检测。

SD/-His Broth

产品标签

YPD Medium（YEPD Medium）；YPDA Medium；YNB； Minimal SD Base；Dropout (DO) Supplements氨基酸缺失混合物；

产品信息

产品名称	产品编号	规格
SD/-His Broth 酵母缺陷型培养基（肉汤）	MS6361-5L	5L
SD/-His with Agar 酵母缺陷型培养基（琼脂）	MS6362-5L	10×0.5 L

产品描述

酵母缺陷型培养基是由SD Base + DO Supplement，以添加琼脂和未添加琼脂两种方式混合而成的完全培养基，前者是固体培养基，后者是液体培养基（肉汤），用于选择培养含特异载体的酵母或进行杂交筛选。

Minimal SD Base，即Minimal Synthetical Defined Medium，是在无氨基酸酵母氮源基础（YNB）上添加单一碳源如葡萄糖、半乳糖、棉子糖和琥珀酸盐或多碳源搭配而合成的培养基基础。Dropout (DO) Supplement，即氨基酸缺陷混合物（或省却成分添加剂）是缺乏一种或多种特定氨基酸的混合物。

SD/-His Broth就是缺乏组氨酸（His）的酵母缺陷型液体培养基，主要用于单质粒酵母转化筛选和单/双杂交系统报告基因检测。

培养基配制

1.称取28g粉末加入1L去离子水，搅拌混匀使其溶解。

2.重要：测试培养基pH是否为5.8，若有必要用弱酸或弱碱调整pH。

3.121℃高压灭菌15min。4℃避光保存已灭菌的液体培养基。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

SD/-His Broth 酵母缺陷型完全培养基

Y190酵母化学感受态细胞

Y190酵母化学感受态细胞：是GAL4系统酵母双杂交用实验菌株，MATa型，能直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过接合（mating）操作进行蛋白相互作用验证或筛库实验。转化标志为trp1，leu2，cyh2。报告基因为lacZ，HIS3，MEL1。

Y190 Chemically Competent Cell

酵母菌化学感受态细胞

产品关键词：

Y190-GAL4酵母单杂交系统；Y1HGold；pGBKT7；pGADT7；Ar Qual；X-α-Gal；Aureobasidin A （AbA）；金担子素；

产品订购：

货号	产品名称	规格	价格（元）
MF2364-1000UL	Y190 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞	10×100μl	290
MF2364-5000UL	Y190 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞	50×100μl	1320

产品组分：

组分编号	组分名称	保存	货号（规格）
组分编号	组分名称	保存	MF2364-1000UL	MF2364-5000UL
MF2364-A	Y190 Chemically Competent Cell	-80℃	10×100μl	50×100μl
MF2364-B	pGADT7 Control Vector (10ng/μl)	-80℃	10μl	10μl
MF2364-C	Carrier DNA (10μg/μl)	-20℃	100μl	500μl
MF2364-D	PEG/LiAC Solution	+4℃	5ml	25ml

产品描述

Y190是GAL4系统酵母双杂交用实验菌株，MATa型，能直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过接合（mating）操作进行蛋白相互作用验证或筛库实验。转化标志为trp1，leu2，cyh2。报告基因为lacZ，HIS3，MEL1。Y190-GAL4酵母双杂交系统需要两种质粒配套使用，pGB&pACT2或pGBKT7& pGADT7。pGB由或pGBKT7改造而来，筛选标志为Trp，用于表达DNA-BD与诱饵蛋白（bait）的融合蛋白；pACT2和pGADT7的结构和功能类似，筛选标志为Leu，用于表达AD与诱捕蛋白（prey）的融合蛋白。

本品为经特殊工艺制备的Y190酵母菌化学感受态细胞，用pGADT7质粒检测转化效率＞10⁴cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存三个月。

基因型

MATa, ura3-52, his3-200, ade2-101, lys2-801, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, cyh^r2, LYS2 : : GAL1 _UAS-HIS3_TATA^–HIS3, MEL1 URA3 : : GAL1_UAS-GAL1_TATA-lacZ

注意事项

号在冰上融化感受态细胞。
转化高浓度质粒可相应减少用于涂板的菌量。同时转化2-3种质粒可适当增加质粒的用量。
Y190对高温敏感，适生长温度为27-30℃，一旦高于31℃，生长速度和转化率都呈指数下降。
菌落变粉红色并不是污染，而是酵母细胞生长中的一种常见现象。当酵母细胞在平板上培养几天，将平板内的腺嘌呤消耗殆尽，那时酵母试图通过自身代谢途径合成腺嘌呤以供利用。然而，某些菌株ADE2基因被破坏，腺嘌呤合成受阻。且ADE4，5，6，7，8基因均正常。由此，造成中间产物P-ribosylamino imidazole（AIR）在细胞的积累使得菌落变为粉红色。
酵母菌在缺陷培养基上生长速度比YPDA培养基慢，营养缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板于29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板于29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆；涂SD双缺平板于29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆；
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

Carrier DNA于使用前通过加热处理使其变性为单链状态，方法如下：95-100℃ 水浴或金属浴3min，快速插入冰中，静置3min。重复一次。
取100 µl冰上融化的Y190化学感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒0.5-3 µg，单链Carrier DNA 10 µl，PEG/LiAc 500µl，用枪吹打几次充分混匀，30℃水浴30 min（在15min时翻转6-8次混匀）。
之后将管子放42℃水浴15 min（在7.5min时翻转6-8次混匀）。
5000 rpm离心40s弃上清，用400 µl ddH₂O重悬沉淀，离心30s弃上清。
用50 µl ddH₂O重悬，涂板，放入29℃培养48-96 h。

Y190酵母化学感受态细胞

Y1HGold酵母化学感受态细胞

Y1HGold酵母化学感受态细胞是Clontech GAL4-AbA酵母单杂交系统用的菌株，MATα型，能直接转化质粒进行文库筛选。Y1HGold-GAL4酵母单杂交系统需要两种质粒配套使用，分别为pAbAi和pGADT7。

Y1HGold Chemically Competent Cell

酵母菌化学感受态细胞

产品关键词：

GAL4-AbA酵母单杂交系统；Y1HGold；pAbAi；pGADT7；Ar Qual；X-α-Gal ；Aureobasidin A （AbA）；金担子素；

产品订购：

货号	产品名称	规格	价格（元）
MF2362-1000UL	Y1HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞	10×100μl	290
MF2362-5000UL	Y1HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞	50×100μl	1320

产品组分：

组分编号	组分名称	保存	货号（规格）
组分编号	组分名称	保存	MF2362-1000UL	MF2362-5000UL
MF2362-A	Y1HGold Competent Cell	-80℃	10×100μl	50×100μl
MF2362-B	pGADT7 Control Vector (10ng/μl)	-80℃	10μl	10μl
MF2362-C	Carrier DNA (5μg/μl)	-20℃	100μl	500μl
MF2362-D	PEG/LiAC Solution	+4℃	5ml	25ml

产品描述

酵母单杂交是在酵母双杂交的基础上发展起来，不同于双杂交用来研究蛋白–蛋白间的相互作用，单杂交主要用于研究蛋白和DNA的相互作用。

Y1HGold是Clontech GAL4-AbA酵母单杂交系统用的菌株，MATα型，能直接转化质粒进行文库筛选。

Y1HGold-GAL4酵母单杂交系统需要两种质粒配套使用，分别为pAbAi和pGADT7。前者筛选标志为Ura，用于表达pBait-AbAi构建子（通过将bait-DNA 单拷贝或串联重复序列克隆到pAbAi载体所得）；后者筛选标志为Leu，用于表达GAL4 AD与诱捕蛋白（prey）的融合蛋白。Y1HGold-GAL4酵母单杂交系统的工作原理在于：基因组整合有pBait-AbAi的酵母报告菌株，当诱捕蛋白（prey）结合到诱饵序列（bait-DNA），GAL4 AD会激活AUR1-C报告基因的表达，这一表达使得细胞能够在含筛选抗生素金担子素（Aureobasidin A，AbA）的培养基上生长。与传统的营养缺陷报告基因相比，AUR1-C（AbA^r）在很低浓度（100-200 ng/ml）下即可以有效杀死非抗性克隆，大大降低背景克隆生长。这一优势也可降低酵母单杂交假阳性发生的概率。

本品为经特殊工艺制备的Y1HGold酵母菌化学感受态细胞，用pGADT7质粒检测转化效率＞10⁴cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存三个月。

基因型

MATα, ura3-52, his3-200, ade2-101, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, met-, MEL1

使用方法

取100 µl冰上融化的Y1HGold化学感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，Carrier DNA （95-100℃ 孵育5 min，快速冰浴。重复一次。）10 µl，PEG/LiAc 500µl，用枪吹打几次充分混匀，30℃水浴30 min（在15min时翻转6-8次混匀）。
之后将管子放42℃水浴15 min（在7.5min时翻转6-8次混匀）。
5000 rpm离心40s弃上清，用400 µl ddH₂O重悬沉淀，离心30s弃上清。
用50 µl ddH₂O重悬，涂板，放入恒温培养箱29℃培养48-96 h。

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货号	名称	规格
MF2352-1000UL	Y2HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞	10×100μl
MF2354-1000UL	Y187 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞	10×100μl
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MF2362-1000UL	Y1HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞	10×100μl
MF2364-1000UL	Y190 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞	10×100μl
MF2358-1000UL	EGY48 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞	10×100μl
MF2360-1000UL	NMY51 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞	10×100μl
MS6303-350G	YPDA Agar Medium YPDA琼脂培养基	350g
MS6304-250G	YPDA Medium YPDA液体培养基	250g
MS6311-467G	Minimal SD Agar Base SD琼脂基础培养基	467g
MS6312-267G	Minimal SD Base SD基础培养基	267g
MS6317-10G	DO Supplement -Leu	10g
MS6320-10G	DO Supplement -His/-Leu	10g
MS6334-10G	DO Supplement -Leu/-Met/-Trp	10g
MS6342-10G	DO Supplement -His/-Leu/-Met/-Trp	10g
MS0002-1ML	Aureobasidin A (AbA) 金担子素A（1 mg/ml）	1ml
MF2501-200T	Yeast Transformation Kit 酵母转化试剂盒	200T

Y1HGold酵母化学感受态细胞

EGY48酵母化学感受态细胞

EGY48酵母化学感受态细胞是LexA系统酵母双杂交用实验菌株，MATα型，能直接转化质粒进行蛋白相互作用验证或双杂交文库筛选和构建。转化标记为ura3，his3，trp1。报告基因为LEU2。EGY48-LexA酵母双杂交系统需要三种质粒配套使用，分别为pLexA、pB42AD和p8op-LacZ。

EGY48 Chemically Competent Cell

酵母菌化学感受态细胞

产品标签

LexA双杂交系统；EGY48；Y2HGold；pGBKT7；pLexA；Aureobasidin A （AbA）；金担子素；

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格（元）

EGY48 Chemically Competent Cell

酵母菌化学感受态细胞

MF2358-1000UL

10×100μl

290

MF2358-5000UL

50×100μl

1320

产品包装

组分编号	组分名称	保存	货号（规格）
组分编号	组分名称	保存	MF2358-1000UL	MF2358-5000UL
MF2358-A	EGY48 Chemically Competent Cell	-80℃	10×100μl	50×100μl
MF2358-B	pGBKT7 Control Vector (10ng/μl)	-80℃	10μl	10μl
MF2358-C	Carrier DNA (10μg/μl)	-20℃	100μl	500μl
MF2358-D	PEG/LiAC Solution	+4℃	5ml	25ml

产品描述

酵母双杂交系统是用于体内研究蛋白相互作用的一种非常便利的工具，目前采用的有LexA系统和GAL4系统。在LexA系统中，DNA结合域（DNA- BD）由一个完整的原核蛋白LexA构成，转录激活域（AD）由一个大肠杆菌来源的含88个氨基酸残基的酸性肽B42构成），在酵母中能活化基因的转录。正常情况，BD和AD不会结合，将待检测的蛋白质分别与BD和AD融合，形成诱饵融合蛋白（bait-DNA）和诱捕融合蛋白（prey-DNA），只有当诱饵和诱捕蛋白发生相互作用，促使BD和AD的相互接近，才能激活报告基因的转录。

EGY48是LexA系统酵母双杂交用实验菌株，MATα型，能直接转化质粒进行蛋白相互作用验证或双杂交文库筛选和构建。转化标记为ura3，his3，trp1。报告基因为LEU2。EGY48-LexA酵母双杂交系统需要三种质粒配套使用，分别为pLexA、pB42AD和p8op-LacZ。质粒pLexA的筛选标志为HIS3，用于表达诱饵融合蛋白。pB42AD的筛选标志为TRP1，用于表达诱捕融合蛋白。报告质粒p8op-LacZ的筛选标志为URA3，报告基因为LacZ，报告基因UAS来源于LexA op (x6)，只有当诱饵（Bait）和诱捕（Prey）相互作用才能启动LacZ表达。

本品为经特殊工艺制备的EGY48酵母菌化学感受态细胞，用pGBKT7质粒检测转化效率＞10⁴cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存三个月。

基因型

MATα, ura3, his3, trp1, LexAop (x6)-LEU2

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

取100 µl冰上融化的EGY48化学感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，Carrier DNA （95-100℃ 孵育5 min，快速冰浴。重复一次。）10 µl，PEG/LiAc 500µl，用枪吹打几次充分混匀，30℃水浴30 min（在15min时翻转6-8次混匀）。
之后将管子放42℃水浴15 min（在7.5min时翻转6-8次混匀）。
5000 rpm离心40s弃上清，用400 µl ddH₂O重悬沉淀，离心30s弃上清。
用50 µl ddH₂O重悬，涂板，放入29℃培养48-96 h。

EGY48酵母化学感受态细胞

pGBKT7 Vector 酵母双杂交载体,

pGBKT7 Vector 酵母双杂交载体 pGBKT7是一种酵母表达载体，特别设计用于表达GAL4 DNA结合结构域（DNA-BD, AA 1–147）与bait蛋白的融合蛋白。

pGBKT7 Vector 酵母双杂交载体

货号	产品名称	规格
MF3601-2UG	pGBKT7 Vector 酵母双杂交载体	2μg

pGBKT7是一种酵母表达载体，特别设计用于表达GAL4 DNA结合结构域（DNA-BD, AA 1–147）与bait蛋白的融合蛋白。融合蛋白在ADH1启动子下高水平表达，融合蛋白还含有c-Myc表位标签。为了促进体外转录（翻译），在pGBKT7的GAL4 DNA-BD和表位标签之间引入T7启动子。载体携带Kan抗性用于大肠杆菌筛选，以及TRP1营养标记用于酵母筛选；与携带其它DNA-BD结合域载体的菌株做比较，携带pGBKT7的酵母菌具更高的转化效率。

基本信息

载体用途：	酵母表达载体
同义名：	pGBKT7 DNA-BD Vector
载体大小：	7.3kb
E. Coli扩增：	宿主菌：DH5α、DH10和其它通用目的菌株筛选标记：卡那霉素（Kanamycin, 50μg//ml） E. Coli复制起始子：pUC 克隆数：~500 质粒不兼容群：pMB1/Col E1
S. cerevisiae扩增：	宿主菌：AH109(MATa), Y187(MATα), Y190(MATa), SFY526(MATa), CG1945 (MATa), HF7c(MATa) 筛选标记：TRP1 S. cerevisiae复制起始子：2 μ

保存与运输方法

保存：-20℃保存，至少1年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）我司提供的载体/质粒/菌株都经过严格的质量控制。请收到货后先进行转化，再挑取单克隆扩增。产品使用中若遇到质量问题，请和我司及时沟通。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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货号	名称	规格
MF3601-2UG	pGBKT7 Vector 酵母双杂交载体	2μg
MF3602-2UG	pGBKT7-53 Vector 酵母双杂交对照载体	2μg
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MF3604-2UG	pGADT7 AD Vector 酵母双杂交克隆载体	2μg
MF3605-2UG	pGADT7-T Vector 酵母双杂交对照载体	2μg
MF3606-2UG	pBridge Vector 酵母三杂交克隆载体	2μg

pGBKT7 Vector 酵母双杂交载体

Zymolyase-100T 酵母溶壁酶,,藤黄节杆菌,核酸纯化,Zymolyase® 酵母细胞壁溶解酶

Zymolyase-100T 酵母溶壁酶，来自藤黄节杆菌核酸纯化，是藤黄节杆菌（Arthrobacter luteus）深层发酵产生并通过亲和色谱法部分纯化获得的一种新型酶制品，具有强烈的酵母菌活细胞壁溶解活性，产生各种酵母细胞株的原生质体或原生质球。

Zymolyase-100T from Arthrobacter luteus

酵母溶壁酶，来自藤黄节杆菌

Zymolyase^®酵母细胞壁溶解酶；Yeast lytic enzyme 酵母裂解酶；Lyticase；Glusulase；Protoplast 原生质体；Spheroplast 原生质球；

产品名称	产品编号	规格
Zymolyase-100T from Arthrobacter luteus 酵母溶壁酶，来自藤黄节杆菌	MF0211-500MG	500mg
Zymolyase-100T from Arthrobacter luteus 酵母溶壁酶，来自藤黄节杆菌	MF0211-5G	5g

Zymolyase^®-100T是藤黄节杆菌（Arthrobacter luteus）深层发酵产生并通过亲和色谱法部分纯化获得的一种新型酶制品，具有强烈的酵母菌活细胞壁溶解活性，产生各种酵母细胞株的原生质体或原生质球。本酶制品决定酵母细胞壁溶解活性的必需酶是β-1,3-葡聚糖昆布五糖水解酶（β-1,3-glucan laminaripentaohydrolase），该酶水解β-1,3-连接的线性化葡萄糖聚合物，释放出特异性的昆布五糖（也是zui主要和zui小的水解产物单元）。Zymolyase^®-100T的溶解范围根据酵母类型、酵母生长周期或培养条件有所变化。

本品以冻干粉形式提供，酶比活力为100,000 units/g，适用于原生质体/原生质球制备、酵母细胞融合、酵母细胞转化和酵母遗传学研究。

产品规格

来源		藤黄节杆菌（Arthrobacter luteus）
外观		冻干粉
纯化方式		亲和色谱纯化
比活力		100,000 units/g
必需酶		β-1,3-葡聚糖昆布五糖水解酶
含有的其他活性酶*	β-1,3-葡聚糖酶	约1.0 x 10⁷ units/g
	蛋白酶	约1.7 x 10⁴ units/g
	甘露聚糖酶	约6.0 x 10⁴ units/g
污染酶	淀粉酶，木聚糖酶，磷酸酶	未检测到
*pH和温度		pH7.5, 35°C（裂解活酵母细胞）；pH6.5, 45°C （水解酵母葡聚糖）
稳定pH范围		pH 5-10
热稳定性		60°C，5min酶活性完全损失
激活剂		巯基化合物比如半胱氨酸，β-巯基乙醇或DTT
特异性（溶解范围）		Ashbya, Candida, Debaryomyces, Eremothecium, Endomyces, Hansenula, Hanseniaspora, Kloeckera, kluyveromyces, Lipomyces, Metschnikowia, Pichia, Pullularia, Torulopsis, Saccharomyces, Saccharomycopsis, Saccharomycodes, Schwanniomyces, etc.
参考文献Kitamura, K., Kaneko, T., Yamamoto, Y., Appl. Microbiol., 18, 57 (1972)进行各种酶活力定义。

活力测定

单位定义：在以下反应条件的反应体系中吸光值A₈₀₀下降30%定义为一个酶活力单位（unit）。
反应体系
反应程序
计算酶活力

注意事项

Zymolyase^®-100T冻干粉置于30℃，3个月酶活力损失约90%。
当需要制备无菌酶溶液，可用除硝酸纤维素膜之外的滤膜过滤除菌。
Zymolyase^®-100T的溶解性很差，因此以悬浮液的形式使用。如果使用浓度高于0.5mg/ml的无菌酶溶液，用含50mg/ml葡萄糖的缓冲液（pH7.5）配置20mg/ml Zymolyase^®-100T溶液，去除不容物质，用滤膜过滤除菌，之后用合适的缓冲液稀释到需要的浓度。具体的工作浓度可参考文献资料，自身实验目的，反应体系等来调整。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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MF0209-3KU	Lyticase (10U/μl) 酵母溶壁酶	3KU
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MF0212-200MG	Zymolyase-20T from Arthrobacter luteus 酵母溶壁酶，来自藤黄节杆菌	200mg
MF0211-500MG	Zymolyase-100T from Arthrobacter luteus 酵母溶壁酶，来自藤黄节杆菌	500mg
MF0401-15KU	DNase I from Bovine Pancreas 脱氧核糖核酸酶I，来源于牛胰腺	15KU
MF0203-100MG	RNase A from Bovine Pancreas 核糖核酸酶A，来源于牛胰腺	100mg

Zymolyase-100T 酵母溶壁酶，来自藤黄节杆菌核酸纯化

Zymolyase-100T 酵母溶壁酶，来自藤黄节杆菌核酸纯化

Zymolyase-20T 酵母溶壁酶,Zymolyase® 酵母细胞壁溶解酶

Zymolyase-20T 酵母溶壁酶，来自藤黄节杆菌核酸纯化，是藤黄节杆菌（Arthrobacter luteus）深层发酵产生并通过硫酸铵沉淀纯化获得的一种新型酶制品，具有强烈的酵母菌活细胞壁溶解活性，产生各种酵母细胞株的原生质体或原生质球。

Zymolyase-20T from Arthrobacter luteus

酵母溶壁酶，来自藤黄节杆菌

见我司整理的Zymolyase^®酵母细胞壁溶解酶（酵母裂解酶）产品专题。

Zymolyase^®酵母细胞壁溶解酶；Yeast lytic enzyme 酵母裂解酶；Lyticase；Glusulase；Protoplast 原生质体；Spheroplast 原生质球；

产品名称	产品编号	规格
Zymolyase-20T from Arthrobacter luteus 酵母溶壁酶，来自藤黄节杆菌	MF0212-200MG	200mg
	MF0212-1G	1g
	MF0212-10G	10g

Zymolyase^®-20T是藤黄节杆菌（Arthrobacter luteus）深层发酵产生并通过硫酸铵沉淀纯化获得的一种新型酶制品，具有强烈的酵母菌活细胞壁溶解活性，产生各种酵母细胞株的原生质体或原生质球。本酶制品决定酵母细胞壁溶解活性的必需酶是β-1,3-葡聚糖昆布五糖水解酶（β-1,3-glucan laminaripentaohydrolase），该酶水解β-1,3-连接的线性化葡萄糖聚合物，释放出特异性的昆布五糖（也是zui主要和zui小的水解产物单元）。Zymolyase^®-20T的溶解范围根据酵母类型、酵母生长周期或培养条件有所变化。

本品以冻干粉形式提供，酶比活力为20,000 units/g，易溶于水，适用于原生质体/原生质球制备、酵母细胞融合、酵母细胞转化和酵母遗传学研究。

产品规格

来源		藤黄节杆菌（Arthrobacter luteus）
外观		冻干粉
纯化方式		硫酸铵沉淀
比活力		20,000 units/g
必需酶		β-1,3-葡聚糖昆布五糖水解酶
含有的其他活性酶*	β-1,3-葡聚糖酶	约1.5 x 10⁶ units/g
	蛋白酶	约1.0 x 10⁴ units/g
	甘露聚糖酶	约1.0 x 10⁶ units/g
污染酶	淀粉酶，木聚糖酶，磷酸酶	微量
*pH和温度		pH7.5, 35°C（裂解活酵母细胞）；pH6.5, 45°C （水解酵母葡聚糖）
稳定pH范围		pH 5-10
热稳定性		60°C，5min酶活性完全损失
激活剂		巯基化合物比如半胱氨酸，β-巯基乙醇或DTT
特异性（溶解范围）		Ashbya, Candida, Debaryomyces, Eremothecium, Endomyces, Hansenula, Hanseniaspora, Kloeckera, kluyveromyces, Lipomyces, Metschnikowia, Pichia, Pullularia, Torulopsis, Saccharomyces, Saccharomycopsis, Saccharomycodes, Schwanniomyces, etc.
*[]：**参考文献Kitamura, K., Kaneko, T., Yamamoto, Y., Appl. Microbiol., 18, 57 (1972)进行各种酶活力定义。

活力测定

1. 单位定义：在以下反应条件的反应体系中吸光值A₈₀₀下降30%定义为一个酶活力单位（unit）。

2.反应体系

3. 反应程序

4. 计算酶活力

注意事项

1. Zymolyase^®-20T冻干粉置于30℃，3个月酶活力损失约70%。

2. 当需要制备无菌酶溶液，可用除硝酸纤维素膜之外的滤膜过滤除菌。

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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货号	名称	规格
MF0209-3KU	Lyticase (10U/μl) 酵母溶壁酶	3KU
MF0210-5KU	Lyticase from Arthrobacter luteus 酵母溶壁酶，来自藤黄节杆菌	5KU
MF0212-200MG	Zymolyase-20T from Arthrobacter luteus 酵母溶壁酶，来自藤黄节杆菌	200mg
MF0211-500MG	Zymolyase-100T from Arthrobacter luteus 酵母溶壁酶，来自藤黄节杆菌	500mg
MF0401-15KU	DNase I from Bovine Pancreas 脱氧核糖核酸酶I，来源于牛胰腺	15KU
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Lyticase 酵母溶壁酶，来自藤黄节杆菌核酸纯化，中文名细胞壁溶解酶，溶壁酶，能水解聚β（1→3）-葡萄糖（poly-β（1→3）-glucose）比如酵母细胞壁葡聚糖。酵母细胞很难破坏，因为细胞壁可能形成荚膜或耐性孢子。通过使用裂解酶比如溶壁酶（lyticase）、几丁质酶（chitinase）、细胞壁溶解酶（zymolyase）和葡聚糖酶。Lyticase from Arthrobacter luteus

酵母溶壁酶，来自藤黄节杆菌

见我司整理的Zymolyase^®酵母细胞壁溶解酶（酵母裂解酶）产品专题。

Lyticase 溶壁酶；Zymolyase^®酵母细胞壁溶解酶；Yeast lytic enzyme 酵母裂解酶；Glusulase；Protoplast 原生质体；Spheroplast 原生质球；

产品名称

产品编号

规格

Lyticase from Arthrobacter luteus

酵母溶壁酶，来自藤黄节杆菌

MF0210-5KU

5KU

MF0210-25KU

25KU

Lyticase，中文名细胞壁溶解酶，溶壁酶，能水解聚β(1→3)-葡萄糖（poly-β(1→3)-glucose）比如酵母细胞壁葡聚糖。酵母细胞很难破坏，因为细胞壁可能形成荚膜或耐性孢子。通过使用裂解酶比如溶壁酶（lyticase）、几丁质酶（chitinase）、细胞壁溶解酶（zymolyase）和葡聚糖酶（gluculase）诱导部分原生质球形成，然后接下来酵母细胞被裂解释放DNA。溶壁酶（lyticase）更适合用于消化酵母细胞壁和产生转化用真菌来源的原生质球。本品以冻干粉形式供应，比活力≥200 units/mg solid。

产品特性

CAS NO：37340-57-1
来源：藤黄节杆菌（Arthrobacter luteus）
外观：冻干粉
同义名：Lyticase; 酵母细胞壁溶解酶；酵母细胞壁溶解酵素；溶壁酶；破壁酶；
作用谱：报道显示lyticase有效溶解以下菌株包括 Ashbya, Candida, Debaryomyces, Eremothecium, Endomyces, Hansenula, Hanseniaspora, Kloeckera, Kluyveromyces, Lipomyces, Metschikowia, Pichia, Pullularia, Torulopsis, Saccharomyces, Saccharomycopsis, Saccharomycodes, and Schwanniomycesspecies.
比活力：≥200 units/mg solid
单位定义：3ml反应混合液中以酵母细胞悬液为底物，于25 °C，pH 7.5条件下，每分钟使得ΔA800发生0.001变化所用的酶量即为一个酶活力单位（unit）。
溶解性：易溶于水

酶活力测定方法

1. 实验试剂制备

2.反应程序

3. 测定结果

标签：酵母