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超敏型ECL化学发光显色试剂盒（SuperSignal ECL Chemiluminescent Substrate Kit）是灵敏的、基于鲁米诺的新一代增强型化学发光HRP底物，通过Western Blot能实现低皮克级的蛋白检测。

SuperSignal ECL Chemiluminescent Substrate Kit

超敏型ECL化学发光显色试剂盒

产品名称	产品编号	规格
SuperSignal ECL Chemiluminescent Substrate Kit 超敏型ECL化学发光显色试剂盒	MM0711-100ML	100ml
	MM0711-500ML	500ml
	MM0711-1000ML	2×500ml

产品描述

超敏型ECL化学发光显色试剂盒（SuperSignal ECL Chemiluminescent Substrate Kit）是灵敏的、基于鲁米诺的新一代增强型化学发光HRP底物，通过Western Blot能实现低皮克级的蛋白检测。

超敏型ECL化学发光显色试剂盒特别设计专为使用HRP偶联的Western Blot实验提供优越的信号和低皮克灵敏度。其发光强度和好的的信号持续允许多次曝光，更容易收集到发文质量的印记图像。本品能兼容各种印迹膜、封闭液和大量的抗体稀释液，能够满足绝大部分的Western blot应用需求。

超敏型ECL化学发光显色试剂盒的检测灵敏度和使用方法类似于Thermo Scientific™的SuperSignal™ West Pico PLUS Chemiluminescent Substrate，具有以下优越的特征：

• 低皮克级灵敏度：检测NC膜或PVDF膜上低皮克级的蛋白条带；
• 长信号持续时间：在优化条件下，经底物孵育的印迹条带能持续输出6~8h的可检测光信号；
• 试剂稳定性高：工作液在8h内稳定，试剂盒在4℃可稳定放置1年；
• 经济实惠：对稀释抗体浓度进行优化

﹒0.2~1.0µg/ml一抗（从1µg/ml储存液稀释1:1,000~1:5,000倍）

﹒10~50ng/ml二抗（从1µg/ml储存液稀释1:20,000~1:100,000倍）

产品组成

组分编号	组分名称	产品货号（规格）			储存方法
		100ML	500ML	1000ML
MM0711-A	SuperSignal ECL A 液	50ml	250ml	2×250ml	4℃避光保存
MM0711-B	SuperSignal ECL B 液	50ml	250ml	2×250ml	4℃保存

注意事项

1） 为获得醉加实验效果，应注意优化实验条件，包括样品用量、凝胶类型、转膜方法、膜的类型、封闭液、洗涤液、一抗/二抗稀释度以及孵育时间等。

2） 洗涤液、封闭液、抗体稀释液、SuperSignal ECL工作液应足量使用，确保印迹膜处于湿润状态。

3） 为获得醉加实验效果，孵育过程中使用摇动或摆动工作台。

4） 缓冲液中避免使用叠氮钠作为防腐剂，因其会抑制HRP活性。

5） 使用亲和素/生物素系统时，应避免使用脱脂奶粉的封闭液。

6） SuperSignal ECL A液和B液在吸取过程中必须要更换枪头，上述试剂相互污染后会导致SuperSignal ECL A液和B液逐渐失效，影响后续的使用效果。

7） SuperSignal ECL A液和B液使用后，请盖紧瓶盖以防失效， 特别是B液含有氧化剂，比较容易被还原而失效。

8） SuperSignal ECL荧光持续时间很长，但开始反应后的30min内荧光更强一些，随后荧光会逐渐减弱，因此请注意充分利用这荧光较强的30min进行曝光或成像仪检测。

9） SuperSignal ECL工作液室温能稳定保存8h，暴露在阳光或其他强光下都会破坏工作液。短期暴露在实验室光线下不会破坏工作液。

10） SuperSignal ECL A液和B液均对人体有害，操作时请注意适当防护。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

需要自行准备材料

• Western Blot印迹膜：用合适方法电泳分离蛋白，并将这些蛋白转移到所需的印迹膜上。
• X光片或成像仪
• 旋转或摇摆平台振荡器：孵育过程中用于膜的摇动。
• 稀释液、洗涤液、封闭液
• 一抗、HRP标记的二抗
• 用于X光片曝光用的暗盒、显影和定影液

Western Blot操作步骤

【注意】：为获得醉加实验效果，应注意优化整个实验过程中的组分和步骤。

1） 将印迹膜从蛋白转印仪中取出，加入合适的封闭液在室温下孵育20~60min，保持振荡，以封闭膜上非特异性蛋白结合位点。对于一些背景较高的抗体，可以在4℃封闭过夜。

2） 将印迹膜从封闭液中取出，加入一抗工作液中室温或4℃孵育1h，保持振荡。如果一抗孵育1h效果不佳，可在4℃孵育过夜，保持震荡。或根据一抗说明选择适当的孵育温度和时间。

3） 将足量的洗涤液加入膜上，保证完全覆盖膜。振荡孵育≥5min，更换洗涤液并重复该步4~6次。增加洗涤液体积、洗涤次数和洗涤时间有助于降低背景信号。

4） 将印迹膜加入HRP标记的二抗工作液中，室温孵育1h，保持振荡。或根据二抗说明选择适当的孵育温度和时间。

5） 重复步骤3），充分洗涤以去除未结合的HRP标记二抗。

6） 用镊子将膜轻轻取出，用吸水纸略吸去过多的液体（勿接触膜的蛋白面），然后置于一洁净保鲜膜或恰当容器上。

7） 配制SuperSignal ECL工作液：根据需要量，取A液和B液等体积混合即为SuperSignal ECL工作液，室温放置备用，工作液宜在临检前配制。

8） 根据膜的大小，按每10cm²膜加1ml SuperSignal ECL工作液的比例，滴加SuperSignal ECL工作液到膜上，确保工作液均匀覆盖在膜上，孵育5min。

9） 从工作液中取膜，弃SuperSignal ECL工作液，用吸水纸略吸去过多的液体。将膜放在两片保鲜膜中间（避免膜与膜之间产生气泡），随后进行压片检测或成像仪检测。

① 压片检测：a）将膜固定于胶片暗盒片夹内，蛋白面朝上，除适用于胶片曝光用的灯（如红灯）之外，关闭所有的灯。b）将X光片置于膜的上面，建议一次曝光1min，立即显影定影，根据结果再调整曝光时间，或直接分别曝光1，3，5min，然后一起显影定影观察结果。化学发光反应在底物孵育后的前5-30min是醉强烈的，这一反应可持续几个小时，但强度会随时间下降，如有底物孵育后较长时间才曝光，曝光时间可能需要延长以获得较强信号。

11） 采用荧光成像仪检测：将膜放置到荧光成像仪内，参考仪器说明书进行检测。

超敏型ECL化学发光显色试剂盒

超敏型ECL化学发光显色试剂盒