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Coelenterazine Native 天然腔肠素

Coelenterazine (CTZ) 天然腔肠素；海肾荧光素酶（Rluc）；分泌型膜锚定荧光素酶（Gluc）；萤火虫荧光素酶（Fluc）；In vivo bioluminescence imaging 活体动物体内成像技术；CAS NO：50909-86-9；

产品信息

产品描述

腔肠素（Coelenterazine）是在水生生物中发现的一种发光基团（luminophore），是许多荧光素酶的作用底物，包括海肾荧光素酶（Renilla reniformis luciferase, Rluc），分泌型膜锚定荧光素酶（Gaussia luciferase, Gluc）和薮枝虫荧光素酶（Obelia luciferase），和发光蛋白包括水母发光蛋白（Aequorin）的构成之一。其作用原理是以腔肠素为底物的荧光素酶，在含分子氧的条件下，氧化腔肠素产生高能量的中间产物，在此过程发射蓝色光，光波长在450~480nm见图1。而甲虫（或萤火虫）荧光素/荧光素酶（FLuc）系统不同，其在含分子氧的条件下，还需要ATP和Mg²⁺的存在才能同时发光，光波长在550-570nm。正由于生物发光信号和底物的差异，RLuc常常与FLuc联合用于多重转录报告基因研究，或用作Fluc系统内萤火虫荧光素酶转染的内参。腔肠素应用甚是广泛，包括：1）活细胞或组织的钙离子检测；2）细胞或组织的超氧化物和过氧亚硝基阴离子（活性氧，ROS）化学发光检测；3）基因报告基因检测；4）动物活体检测；5）ELISA和生物发光共振能量转移（BRET）用于蛋白相互作用研究；6）药物高通量筛选（HTS）；天然腔肠素（Coelenterazine Native，CTZ-Native）是自然界中存在丰富的一种腔肠素，也是目前应用普遍的一种标准底物。不仅是脱辅基水母发光蛋白（APO）的底物，也是海肾荧光素酶（Rluc）和分泌型膜锚定荧光素酶（Gluc）等荧光素酶的作用底物。前者用于检测钙离子浓度，后者用作荧光素酶的报告基因检测系统。还可用于生物共振能量转移BRET，细胞或组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子水平（ROS）的化学发光检测等。

产品特性

1）   CAS NO：55779-48-1

2）   化学名：8-benzyl-6-(4-hydroxyphenyl)-2-[(4-hydroxyphenyl)methyl] -7H-imidazo [1,2-a]pyrazin-3-one

3）   同义名：Coelenterazine, nativ; native Coelenterazine; Coelenterazine free base; native-CTZ; 腔肠素游离酸；

4）   分子式：C₂₆H₂₁N₃O

5）   分子量：423.46 g/mol

6）   纯度：>95%

7）   外观：黄色至棕黄色结晶性粉末

8）   溶解性：溶于甲醇或乙醇，不要溶于DMSO

9）   化学结构式：

操作步骤

一、  腔肠素工作液制备

有关腔肠素溶解的注意事项：

1）   腔肠素溶于甲醇或乙醇，不可溶于DMSO。腔肠素的水溶性相对比较低，一般情况需先将腔肠素溶于酸化的醇类溶剂配成相对高浓度的母液，然后再用水溶性缓冲液稀释到需要的工作浓度，现配现用。

2）   腔肠素在溶液中的稳定性比较低，号于正式实验前才配制溶液（包括高浓度母液）。但若实际要求，必须保存母液，目前来说稳定的溶剂是丙二醇，往内加入少量L-抗坏血酸，β-巯基乙醇，DTT，DTE，或少量HCl能维持其还原态。不过，还原剂可能会减低氧化腔肠素（氧化为Coelenteramide）的动力学速率。也有可能破坏荧光素酶活性。而冻存在醇类溶剂中可能引起腔肠素沉淀，实际取决于溶液浓度。当然，可通过加热50-60℃，使得沉淀重新溶解。必须确保无可见沉淀，或在实验前（特别是活体动物实验）离心去沉淀。

1.1    腔肠素母液制备

1.2    腔肠素工作液制备

二、  操作方法

2.1 体外生物发光

2.2 体内动物成像

注意：腔肠素的注射剂量可能根据动物类型、品种、注射方式以及报告基因种类有所差异。加的注射剂量请自行摸索或参考文献来做。

对于海肾荧光素酶报告基因系统，通过腹腔（IP）或静脉注射（IV）按照25-100μg/只小鼠能得到良好结果。对于分泌型膜锚定荧光素酶（Gluc）报告基因系统，由于分泌型膜锚定荧光素酶代谢活性增加，相对来说需要更高量的腔肠素。文献（Tannous BA. Gaussia luciferase reporter assay for monitoring of biological processes in culture and in vivo.Nat Protoc.2009;4(4):582-591.）提到，当用静脉注射（IV）按照4mg/kg体重给药能得到良好结果。

a）根据自身实验室条件选择适当方法麻醉动物，视情况决定是否去皮（通常黑色皮毛动物需去皮）。

b）根据实际情况往动物体内注射相应剂量步骤1.2 配制好的腔肠素工作液。比如，对于海参荧光素酶报告基因系统，使用26-gauge针头注射器尾静脉注射100µl 2 mM (~1mg/ml)腔肠素工作液，然后立即对动物进行体内成像检测，以获得峰值信号。

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