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小鼠中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)ELISA试剂盒

小鼠中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)elisa试剂盒

名称：小鼠中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)elisa试剂盒
供应商：生物
产品规格：48T/96T
试剂盒成分：酶标板，试剂，标准品等。
性状：液体
经营种类：国产/进口原装/进口分装。
产品用途：科研实验，不能用于临床应用
试剂盒保存：2-8℃（长期不使用时，部分试剂应放在-20℃条件下）
保质期：6个月，所有试剂盒均提供*新批次。
预期应用：ELISA法定量测定血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中的含量。
注意要点：请仔细阅读产品的详细使用说明,严格遵照规定操作,必能得出准确的结果。
服务承诺：工作时间内免费代测，免费技术咨询和指导。我们的销售工程师经过专业培训的，将为您提供满意的产品和真诚的服务。

 

 

小鼠中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)ELISA试剂盒  注意事项：
1.实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
2.试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
3.使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
4.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
5.洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
6.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
7.加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
8.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
9.底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
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操作步骤：
1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50?l。然后在待测样品孔先 加样品稀释液 40?l，然后再加待测样品 10?l。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，
3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂 50?l，空白孔除外。
7.温育：操作同 3。
8.洗涤：操作同 5。
9.显色：每孔先加入显色剂 A50?l，再加入显色剂 B50?l，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10.终止：每孔加终止液 50?l，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。

常见问题以及解决方法：
1、试剂的选择：选择优良试剂大家都是知道的，但是在检测之前还应该提前半个小时将试剂拿到常温下进行解冻；
2、加样中可能遇到的问题：在做血清或是血浆用于检测试剂的时候，会碰到血清血浆不好分离的情况，这个时候的解决办法是先放在常温中1到2小时，然后在进行离心处理；
3、洗板时容易造成误差： 因为洗板是人工洗的，所以判断什么时候洗干净了也是人为判断的，这个时候带有主观色彩，所以多清洗几次，还有就是在洗的时候孔与孔之间的液体容易交叉流动；
4、显色问题： 使用了过期的显色剂或者是显色剂用过后放置时间太长，都有可能造成显色剂不显色。所以在进行显色反应的时候，要先查看显色剂本身的情况；
5、终止反应：在加终止剂的时候由于倾倒速度快，差生气泡，造成假阳性结果。所以在倒终止剂的时候要缓慢倒；
6、读板：读板的时候首先应该保证板的清洁干净；
7、严格按照说明书操作。

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原创作者：上海生物科技有限公司

牛过氧化脂质(LPO)ELISA试剂盒

牛过氧化脂质(LPO)elisa试剂盒 

【产品名称】：牛过氧化脂质(LPO)elisa试剂盒
【供应商】：上海
【产品用途】：科研实验等领域科学研究，不得用于临床诊断。
【产品规格】：96T/48T(两种规格)
【标本丰富】：血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。
【种属齐全】：人、大鼠、小鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛、羊、鸡、鸭、鱼等。
【保存条件】：2-8℃
【供 货 期】：1-3天(现货供应)
【产品性状】：液体盒装
【服务优势】：全程提供ELISA实验技术指导和elisa试剂盒免费代测
【样本储存】：收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本，储存在4℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本，将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。避免反复冻融。标本2-8℃可保存48小时，-20℃可保存1个月。-70℃可保存6个月。部分激素类标本需添加抑肽酶。

 

牛过氧化脂质(LPO)ELISA试剂盒 【安全性】：
1．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

注意事项  技术原理：
(1). 抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。
(2). 结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性。
(3). 酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。
(4). 受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。
(5). 此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。
(6). 加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。测定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水平），并且重复性好。以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。

操作流程：
（1）待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。
（2）酶标板置4℃，包被过夜。
（3）洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去），之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
（4）阴性对照孔每孔加入PBS 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
（5）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。
（6）洗板，同（4）。
（7）每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
（8）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。
（9）洗板，同（4）。
（10）每孔加TMB显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
（12）分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，*终测得的OD值为两者之差（W1-W2），以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
（13）数据处理：在得出标本（S）和阴性对照（N）的 OD值后，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。

操作步骤：
1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50?l。然后在待测样品孔先 加样品稀释液 40?l，然后再加待测样品 10?l。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，
3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂 50?l，空白孔除外。
7.温育：操作同 3。
8.洗涤：操作同 5。
9.显色：每孔先加入显色剂 A50?l，再加入显色剂 B50?l，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10.终止：每孔加终止液 50?l，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。

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脂质过氧化荧光探针,217075-36-0

脂质过氧化荧光探针 C11 BODIPY 581/591是一种脂溶性的比率型荧光探针，在模式膜系统和活细胞内用来指示脂质过氧化和抗氧化性能。
C11 BODIPY 581/591 脂质过氧化荧光探针

C11 BODIPY 581/591；lipid peroxidation 脂质过氧化；ferroptosis 铁死亡；FeRhoNox-1 (Fe2+ indicator) 亚铁离子荧光探针；MitoPerOx 线粒体脂质过氧化；CAS NO：217075-36-0；

产品名称 产品编号 规格
C11 BODIPY 581/591 脂质过氧化荧光探针 MX5211-1MG 1mg

C11 BODIPY 581/591是一种脂溶性的比率型荧光探针，在模式膜系统和活细胞内用来指示脂质过氧化和抗氧化性能。C11 BODIPY 581/591具好的特征：①发射波长在电磁波谱的可见光区域，非氧化态（591nm）和氧化态（510nm）两种形式的光谱能够很好的分开；②具高量子产量，正因如此，使用低标记浓度即可，确保对膜产生低的干扰，且维持良好的信噪比；③具有良好的光稳定性，产生很低的荧光伪影；④基本上对环境变化比如pH或溶剂极性不敏感；⑤亲脂性，轻松进入膜；⑥一旦氧化，探针保持亲脂性，且不会自发地离开脂质双分子层；⑦非氧化态和氧化态定位在脂质双分子层内两个不同的区域，一种位于浅层（离双分子层中心距离为18Å），一种位于深层（离双分子层中心距离为< 7.5Å）；⑧高达50µM的浓度对大鼠成纤维细胞无毒性；⑨对各种氧自由基和过氧亚硝酸盐灵敏，但对超氧化物、一氧化氮、过渡铁离子和氢过氧化物不灵敏；⑩其对氧化的灵敏度与内源性脂肪酰基团相当[1]。C11 BODIPY 581/591可用来定量铁死亡[2-3]。

产品特性

  • 1）CAS NO.：217075-36-0
  • 2）化学名：(T-4)-difluoro[5-[[5-[(1E,3E)-4-phenyl-1,3-butadien-1-yl]-2H-pyrrol-2-ylidene-κN]methyl]-1H-pyrrole -2-undecanoato(2-)-κN1]-borate(1-), monohydrogen
  • 3）分子式：C30H35BF2N2O2
  • 4）分子量：504.4
  • 5）纯度：≥95%
  • 6）激发波长：581nm（还原型），500nm（氧化型）
  • 7）发射波长：591nm（还原型），510nm（氧化型）

 

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

应用示例（来自文献，仅做参考）

 

1）为了测定脂质活性氧（Lipid ROS），MEFs细胞经药物（Erastin 1 μM；Bafilomycin A1 20nM；Chloroquine 50 μM）预处理后，之后加入C11 BODIPY 581/ 591（50 μM）孵育1h。用PBS清洗细胞两次以去除多余的染料。之后细胞用胰酶消化，重悬在含5% FBS的PBS中。C11 BODIPY 581/ 591的多不饱和丁二烯部分被氧化导致其加大发射荧光从~590nm迁移到~510nm，与脂质活性氧产生成正比，通过流式细胞仪来分析。【文献来源】：Gao M et al. Ferroptosis is an autophagic cell death process. Cell Res, 2016 Sep;26(9):1021-32.

2）为了评估脂质过氧化，细胞用C11 BODIPY 581/ 591（2 μM in HEPES-buffered HBSS）孵育20min，之后共聚焦成像，用488nm和565nm激光器激发，检测505-550nm和＞580nm下的荧光。C11 BODIPY 581/ 591本质上是一种亲脂染料，能积累在膜内。一旦染料的多不饱和丁二烯部分被氧化，加大发射波长从590nm迁移到510nm，探针仍维持亲脂性，从而反映膜的脂质过氧化水平。【文献来源：Angelova, P.R., et al. Alpha synuclein aggregation drives ferroptosis: an interplay of iron, calcium and lipid peroxidation; Cell Death Differ (2020).】

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MX4559-24UG FerroOrange (Fe2+ indicator) 亚铁离子荧光探针 24μg
MX5401-1MG MitoPerOx Mitochondrial Lipid Peroxidation Indicator 线粒体脂质过氧化探针 1mg
MX5402-1MG BODIPY 558/568 C12 脂质转运荧光探针 1mg