标签：植物

植物原生质体转化试剂盒 植物细胞培养 ，原生质体（Protoplast）是指植物细胞去掉细胞壁后的裸露部分，体外培养条件下，具有以下功能：1）具全能型，可再生细胞壁，进行连续的细胞分裂且能再生成完整植株的能力；2）具摄取外源大分子、细胞器，以及细菌、病毒的能力，从而原生质体是进行遗传操作，基因转移的良好材料。

Plant Protoplast Transformation Kit (PEG-Mediated)

植物原生质体转化试剂盒（PEG法）

Plant Protoplast 植物原生质体；PEG-mediated protoplast transformation 聚乙二醇介导的原生质体转化；Yakult Honsha；Cellulase R-10 纤维素酶R-10；Macerozyme R-10 离析酶R-10；二乙酸荧光素 (FDA) 原生质体活力检测；

产品信息

产品名称	产品编号	规格
Plant Protoplast Transformation Kit (PEG-Mediated)	MX7381-20T	20T

产品描述

原生质体（Protoplast）是指植物细胞去掉细胞壁后的裸露部分，体外培养条件下，具有以下功能：1）具全能型，可再生细胞壁，进行连续的细胞分裂且能再生成完整植株的能力；2）具摄取外源大分子、细胞器，以及细菌、病毒的能力，从而原生质体是进行遗传操作，基因转移的良好材料；3）通过同种和异种植物的原生质体融合，可产生异核体，实现体细胞杂交，从而培育出具有抗病原或更高产量的新品种。

原生质体（Protoplast）的制备主流的技术是酶解法，因其具有消化温柔，操作简单，且良好维持原生质体完整性的特点。工作原理是根据植物细胞壁的结构特征选择合适的酶进行处理，植物细胞壁主要由多糖（纤维素、半纤维素、果胶等）以及少量的蛋白和脂质构成。因此，通过使用纤维素酶、离析酶、半纤维素酶、果胶酶等复合酶来降解细胞壁，即可得到原生质体。

原生质体（Protoplast）的转化方法很多，主要有PEG介导转化法、电机穿孔转化法、脂质体介导转化法、农杆菌共培养转化法等。

本试剂盒是PEG介导的原生质体转化法，操作简单和便捷。试剂盒含有植物原生质体制备（不包含消化酶）和植物转化需要的所有试剂，按照单次10ml酶液体系来算，可做20次。

试剂盒组分

组分编号	组分名称	规格（20T）	储存方法
MX7381-A	Solution A-Enzyme solution buffer (2×) 溶液A	100ml	-20℃保存
MX7381-B	Solution B–W5 solution 溶液B	200ml	-20℃保存
MX7381-C	Solution C–MMG solution溶液C	25ml	-20℃保存
MX7381-D	Solution D–Transformation solution溶液D	2.5ml	-20℃保存
MX7381-E	Solution E–WI solution溶液E	25ml	-20℃保存
MX7381-F	Solution F–Reduced reagent溶液F	1ml	RT保存
MX7381-G	Solution G–BSA solution (50mg/ml)	5ml	-20℃保存

 

使用方法

• 需要准备材料
  • 离析酶R-10（比如，Cat#：MX7351-1G）
  • 纤维素酶R-10（比如，Cat#：MX7352-1G）
  • 70μm细胞筛网（比如，Cat#：352350, BD Bioscience）
  • 平头镊子
  • 一次性刀片
  • 1.5ml离心管
  • 50ml离心管
  • 恒温加热水浴锅

• 原生质体分离

2.1 按照以下表格体系，配制即用型酶溶液：【注意：此溶液现配现用】

组分	10ml配制量	50ml配制量
溶液A (2×酶溶解液)	5ml	50ml
离析酶R-10	40mg	200mg
纤维素酶R-10	150mg	750mg
溶液F（还原剂）	5 μl	25μl
溶液G（50mg/ml BSA）	0.2ml	1ml
无菌水	定容到10ml	定容到50ml

2.2 取生长状态良好的叶片切成0.5-1mm的小条，按照20个叶片加10ml即用型酶溶液的比例迅速将切好的叶片小条浸泡于即用型酶溶液内，室温避光酶解3h。

【注意】：酶解时间与叶片类型、叶片生长状态有关，请根据实际实验进行调整。酶溶液变为绿色表明原生质体已经分离，显微镜镜检确定是否分离。

2.3 酶解后加入10ml溶液B，轻柔混匀。

2.4 用70μm细胞筛网过滤步骤2.3获得的溶液，去除未消化的叶片和杂质，收集滤液到50ml离心管内。

2.5 滤液于100×g，室温离心2min，吸掉上清。

2.6 加1ml溶液B重悬原生质体，冰浴30min，使得原生质体自然沉淀到底部。

2.7 小心吸掉上清，不要触动原生质体沉淀。将沉淀重悬于1ml溶液C，即得到原生质体溶液。

• 原生质体转化
• 原生质体培养和收集

植物原生质体转化试剂盒  植物细胞培养

植物原生质体转化试剂盒  植物细胞培养