大肠杆菌化学感受态细胞 表达分析 大肠杆菌OverExpress C43(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达5×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。
OverExpress C43(DE3);C43(DE3) pLysS;BL21 (DE3);OverExpress C41(DE3);表达感受态细胞;毒性蛋白表达;pET表达载体;
货号 |
产品名称 |
规格 |
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MF2342-1000UL |
OverExpress C43(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 |
10×100μl |
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MF2342-5000UL |
OverExpress C43(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 |
50×100μl |
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OverExpress C41(DE3)、C41(DE3) pLysS、C43(DE3)和C43(DE3) pLysS都是大肠杆菌(E. Coli)菌株,有效表达不同物种有机生物体包括细菌、酵母菌、植物、病毒和哺乳动物来源的毒性蛋白。
OverExpress C43(DE3)菌株来源于OverExpress C41(DE3)菌株,通过筛选OverExpress C41(DE3)对另一个不同毒性蛋白的抗性菌株而获得。OverExpress C41(DE3)来源于BL21(DE3),此菌株含一个突变,能降低T7 RNA聚合酶(T7 RNAP)的水平,从而预防许多重组毒性蛋白过表达引起的细胞死亡。OverExpress C43(DE3)菌与OverExpress C41(DE3)相比,至少携带另一个不同突变,使其获得更广泛更高的毒性蛋白表达能力。
OverExpress C43(DE3)菌株含DE3区,表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因),适用于靶基因克隆进入T7启动子表达载体比如pET系列的蛋白生产。
OverExpress C43(DE3)菌株基因型:F– ompT hsdSB (rB– mB–) gal dcm (DE3)
产品描述
本品是大肠杆菌OverExpress C43(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达5×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。
产品包装
组分编号 |
组分名 |
货号(规格)
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MF2342-1000UL |
MF2342–5000UL |
MF2342-A |
OverExpress C43(DE3) Competent Cell |
10×100μl |
50×100μl |
MF2342-B |
Control Plasmid puC19, 10pg/μl |
10μl |
10μl |
注意事项
1) 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。
2) hao在冰上融化感受态细胞,不可在冰上放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。
3) 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。
4) 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到低。
5) 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。
6) 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。
7) 诱导时,IPTG浓度范围可选:0.1~2mM。
8) 为了得到足量的蛋白,需就加诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。
9) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】
1) 从-80℃冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物),用手轻弹管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰浴静置25min。
2) 42℃水浴热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。
3) 向每个离心管中加700 μl无菌的2YT或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
4) 低速离心收菌(比如5000rpm,1min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到筛选抗生素的2YT或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养过夜。
【注意】:
a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(5000 rpm,1min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。
b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
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名称 |
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10g |
MS0018-10G |
Ampicillin, Sodium Salt 氨苄青霉素钠 |
10g |
MS0017-5G |
Carbenicillin, Disodium Salt 羧苄青霉素二钠盐 |
5g |
MS0019-10G |
Kanamycin Sulfate 硫酸卡那霉素 |
10g |
MS0014-1G |
Rifampicin, USP Grade 利福平 |
1g |
MF2002-1G |
IPTG 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 |
1g |
附录I 蛋白诱导步骤(仅作参考)
1)从新鲜涂布平板上挑取一单克隆,转移到含相应抗生素的5ml LB液体培养基内。
2)37℃摇菌培养过液。为了小化诱导前目的蛋白的小化表达,添加葡萄糖(终浓度为0.2% w/v)到生长培养基内。
3)将步骤2)中过夜培养的菌液吸取0.5ml接种到含相应抗生素的50ml LB液体培养基内。
4)37℃摇菌培养直至OD600达到0.6~0.8。
5)加入IPTG使其终浓度为1mM。目的蛋白的加诱导时间可能在2~16h,依蛋白而异。
6)37℃培养3~4h。为了确定目的蛋白的加诱导时间,建议作一个时间周期优化实验,范围从2~16h。
7)将培养物冰浴10min。4℃,5,000 x g离心10min收集菌株。
8)吸掉上清,将沉淀保存在-20℃(也能保存在更低的温度)。
IPTG母液(1M)配制
称量2.38g IPTG(Mw: 238.30)溶于适量去离子水,充分溶解后,调整终体积到10ml,并过滤除菌,即得到1M ITPG母液。
大肠杆菌化学感受态细胞 表达分析
大肠杆菌化学感受态细胞 表达分析