DH5α感受态细胞使用说明书

    上海生物科技供应DH5α感受态细胞使用说明书,专业供应抗生素、维生素、培养基、染色剂、酶/辅酶、碳水化合物、分离试剂、缓冲试剂、核酸及衍生物、氨基酸/蛋白质等其它生化试剂。品质保证,货源充足。严格的生产质量控制体系,包括:优级纯,分析纯,化学纯,试剂级,基准试剂,实验纯,教学试剂,高纯试剂,色谱纯,光谱纯,电子纯。各种包装规格,并可提供包装定制,欢迎来电咨询。

    名称:DH5α感受态细胞

    供应商:

    产地:国产/进口

    规格:10×100ul

    分类:感受态制备

    储存方式:—20℃,12个月

    产品用途:基因克隆表达

    注意事项DH5α感受态细胞用于铺制平板培养质粒和 hsd R 17 rec A 1 end A 1gyr A 96 thi – 1 rel A 1粘粒的重组缺陷琥珀抑制型菌株。可用于蓝白斑筛选

    DH5α感受态细胞使用说明书:

    ●购买后,请务必确认标签上的注意事项。

    ●做好预防颠倒,摔坏的措施和管理体制。

    ●在使用前再次确认标签上的注意事项。做好必要的安全对策。

    ●对没有标明其危险特性?有害特性的,也要慎重地进行操作。

    ●必须戴好防护用具,小心翼翼进行操作。

    ●请参照相关法规,文献,MSDS等信息,理解并掌握好试剂的特性。再进行安全操作。

    ●通常购买试剂时要想到一次性用完。若估算不足有剩余的话,要更加注意其保管和管理。

    ●万一试剂操作者并非专业技术人员。必须在专业人士的指导监督下进行操作。

    ●对于使用后的废弃物,不要或旧的试剂,应按照相关法律法规正当处理。

    DH5α感受态细胞使用说明书 订购说明

    1、绝大部分产品备有现货,一般情况下都能订货当日发货。

    2、部分非常用产品,需提前1-2日预订,海外期货则需要提前3-6周预订。

    3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化,若有变动以订货当日*新价格为准。

    4、每日订单截止时间为16点整,部分城市可到17点整,因超过截止时间造成当日不能发货的将于次日安排发货。

    5、请办理完货款后,将收据、底单等连同收货人的地址、姓名、电话等以传真、EMail、短/信、电话等形式通知我们。

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原创作者:上海生物科技有限公司

NEB代理,感受态细胞,克隆菌株,dam–/dcm– E. coli 感受态细胞#C2925H

产品资料 – 感受态细胞 – 克隆菌株

dam–/dcm– E. coli 感受态细胞

#C2925H 20 x 0.05 ml

#C2925I  6 x 0.2 ml

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dam–/dcm– E. coli 感受态细胞

单独出售的组份

SOC Outgrowth 培养基
#B9020S 4 x 25 ml

优点

 适用于培养无 Dam 和 Dcm 甲基化的质粒
 无动物来源产品

概述

甲基转移酶缺失的 E. coli 感受态细胞,适用于无 Dam 和 Dcm 甲基化质粒的生长。

基因型

ara-14 leuB6 fhuA31 lacY1 tsx78 glnV44 galK2 galT22 mcrA dcm-6 hisG4 rfbD1 R(zgb210::Tn10) Tet S  endA1 rspL136 (Str R) dam13::Tn9 (CamR) xylA-5 mtl-1 thi-1 mcrB1 hsdR2

特性

• 适用于无 Dam 和 Dcm 甲基化质粒的培养
• 缺失非特异性核酸内切酶 I(endA1)活性,可用于制备高质量质粒

转化效率

1–3 x 106 cfu/µg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体(fhuA31)、氯霉素、呋喃妥因、链霉素

敏感性

氨苄青霉素、卡那霉素、壮观霉素、四环素

随产品提供

SOC Outgrowth 培养基
pUC19 对照 DNA

NEB代理,感受态细胞,克隆菌株,NEB Turbo E. coli 感受态细胞

产品资料 – 感受态细胞 – 克隆菌株

NEB Turbo E. coli 感受态细胞(高效级)

#C2984H 20 x 0.05 ml

#C2984I 6 x 0.2 ml

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NEB Turbo E. coli 电转级感受态细胞

单独出售的组份

SOC Outgrowth 培养基
#B9020S 100 ml

优点

 严谨的表达调控(lacI q
 6.5 小时后即可见到菌落
 生长 4 小时后即可提取 DNA
 质粒携带氨苄抗性,5 分钟完成转化实验
 克隆毒性基因
 无动物来源产品

概述

E. coli  感受态细胞适用于高效级转化,且菌落生长迅速(6.5 小时)。

基因型

F´ proA+B+ lacIq ΔlacZM15 / fhuA2 Δ(lacproAB) glnV galK16 galE15 R(zgb-210::Tn10)TetS endA1 thi-1 Δ(hsdS-mcrB)5

特性

• 可做蓝/白斑筛选
• 缺失非特异性核酸内切酶 I(endA1)活性,可用于制备高质量质粒

转化效率

高效级:1–3 x 109 cfu/μg pUC19 DNA
电转级:> 1 x 1010 cfu/μg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体(fhuA2),呋喃妥因

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、壮观霉素、链霉素、四环素

NEB代理 , 感受态细胞 , 克隆菌株
 

NEB Turbo 转化实验:使用 NEB Turbo 产品,8 小时后即可见到菌落。连接产物转化至 50 μl NEB Turbo E.coli 感受态细胞中,涂布于 LB/Amp 平板,37℃ 下分别孵育 8 小时、10 小时和 12 小时。NEB Turbo 可加快菌落的生长速度和蓝/白斑的筛选,从而使克隆实验变得更简便。

NEB代理 , 感受态细胞 , 克隆菌株

过夜培养的单菌落,液体培养 3 小时后即可用于小量制备 DNA。再培养 1 小时后 DNA 产量加倍。

随产品提供

SOC Outgrowth 培养基

pUC19 对照 DNA

NEB代理,感受态细胞,克隆菌株,NEB 5-alpha E. coli 感受态细胞

产品资料 – 感受态细胞 – 克隆菌株

NEB 5-alpha E. coli 感受态细胞 (高效级)

#C2987H20 x 0.05 ml

#C2987I6 x 0.2 ml

#C2987P1 x 96 孔板

#C2987R1 x 384 孔板

#C2987U96 x 50 μl/管

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单独出售的组份

SOC Outgrowth 培养基
#B9020S 4 x 25 ml 

优点

 DH5α 衍生物
 无动物来源产品

概述

NEB 5-alpha E. coli  感受态细胞为 DH5α 衍生物,为多功能克隆菌株

基因型

fhuA2Δ(argF-lacZ)U169 phoA glnV44 f80Δ(lacZ)M15 gyrA96 recA1 relA1 endA1 thi-1 hsdR17

特性

• 可高效转化 PCR、cDNA 或其它来源的(hsdR)非甲基化 DNA
• 可进行蓝/白斑筛选
• 缺失非特异性核酸内切酶 I(endA1)活性,可用于制备高质量质粒
• 可减少克隆 DNA 的重组反应(recA1

转化效率

高效级: 1–3 x 109 cfu/μg pUC19 DNA
亚克隆效级: > 1 x 106 cfu/μg pUC19 DNA
电转级: > 1 x 1010 cfu/μg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体(fhuA2

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、呋喃妥因、壮观霉素、链霉素、四环素

随产品提供

SOC Outgrowth 培养基
pUC19 对照 DNA

NEB代理,感受态细胞,克隆菌株,NEB 5-alpha F´ Iq E. coli 感受态细胞

产品资料 – 感受态细胞 – 克隆菌株

NEB 5-alpha F´ Iq E. coli 感受态细胞 (高效级)

#C2992H 20 x 0.05 ml

#C2992I 6 x 0.2 ml

NEB 5-alpha F´ Iq E. coli 感受态细胞 (高效级)

单独出售的组份

SOC Outgrowth 培养基
#B9020S 4 x 25 ml

优点

 严谨的表达调控(lacI q
 克隆毒性基因
 含 F´ 因子的菌株,具有极高的转化效率
 DH5α 衍生物
 无动物来源产品

概述

该菌株含 F´因子,转化效率极高,适于克隆毒性基因。

基因型

F´proA+B+ lacIq Δ(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR) / fhuA2Δ(argF-lacZ)U169 phoA glnV44 f80 Δ(lacZ)M15 gyrA96 recA1 endA1 thi-1 hsdR17

特性

• 可高效转化 PCR、cDNA 或其它来源的(hsdR)非甲基化 DNA
• 可进行蓝/白斑筛选
• 缺失非特异性核酸内切酶 I(endA1)活性,可用于制备高质量质粒
• 可减少克隆 DNA 的重组反应(recA1
• 适用于 M13 噬菌体克隆的繁殖

转化效率

高效级: 1–3 x 109 cfu/μg

抗性

T1 噬菌体(fhuA2)、四环素

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、呋喃妥因、壮观霉素、链霉素

随产品提供

SOC Outgrowth 培养基
pUC19 对照 DNA

NEB代理,感受态细胞,克隆菌株,NEB 10-beta E. coli 感受态细胞

产品资料 – 感受态细胞 – 克隆菌株

NEB 10-beta E. coli 感受态细胞 (高效级) #C3019H20 x 0.05 ml

#C3019I6 x 0.2 ml

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NEB 10-beta E. coli 电转级感受态细胞

单独出售的组份

SOC Outgrowth 培养基
#B9020S 100 ml

优点

 可克隆大质粒和 BACs
 DH10B 衍生物
 无动物来源产品

概述

E. coli 感受态细胞为 DH10B 衍生物,广泛应用于多种高效级转化,包括克隆大质粒与BAC。

基因型

Δ(ara-leu) 7697 araD139 fhuA ΔlacX74 galK16 galE15 e14- f80dlacZΔM15 recA1 relA1 endA1 nupG
rpsL (StrR) rph spoT1 Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)

特性

• 可高效转化真核来源的甲基化 DNA 或来自 PCR、cDNA 或其它来源的未甲基化 DNA
• 无需 IPTG,可进行蓝/白斑筛选
• 缺失非特异性核酸内切酶 I(endA1)活性,可用 于制备高质量质粒
• 可减少克隆 DNA 的重组反应(recA1

转化效率

高效级:1–3 x 109 cfu/μg pUC19 DNA
电转级:> 2 x 1010 cfu/μg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体(fhuA2)、链霉素

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、呋喃妥因、壮观霉素、四环素

随产品提供

SOC Outgrowth 培养基
pUC19 对照 DNA
NEB代理 , 感受态细胞 , 克隆菌株
质粒大小对转化效率的影响:化学法制备的 NEB 10-beta 感受态细胞比 NEB 5-alpha 更适合于大质粒的转化。如上图所示,质粒越大,两种感受态细胞转化效率的差值就越大。

NEB代理,感受态细胞,克隆菌株,NEB E. coli 稳定感受态细胞

产品资料 – 感受态细胞 – 克隆菌株

NEB E. coli 稳定感受态细胞 (高效级)

#C3040H20 x 0.05 ml

#C3040I6 x 0.2 ml

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NEB E. coli 稳定感受态细胞 (高效级)

单独出售的组份

SOC Outgrowth 培养基
#B9020S 4 x 25 ml

优点

 抗噬菌体 T1 感染(fhuA)
 无动物来源产品

概述

化学感受态 E. coli 细胞适用于高效转化及含重复片段的质粒提取。

基因型

F´ proA+B+ lacIq Δ(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR)/Δ(ara-leu) 7697 araD139 fhuA ΔlacX74 galK16 galE15
e14- f80dlacZΔM15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL (StrR) rph spoT1 Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)

特性

endA 突变,可用于制备高质量质粒
• 生长迅速的 recA 菌株

应用

• 不稳定插入片段的克隆
• 慢病毒及逆转录病毒克隆的分离及扩增
• 与 Gibson 组装反应及连接反应兼容

转化效率

 1–5 x 108 cfu/μg pUC19 DNA (NEB #C3040H)

> 1 x 109 cfu/μg pUC19 DNA (NEB #C3040I)

抗性

T1 噬菌体(fhuA)、链霉素、四环素

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、呋喃妥因、壮观霉素

随产品提供

SOC Outgrowth 培养基

pUC19 对照 DNA

NEB代理,感受态细胞,蛋白表达菌株,NEB 表达 E. coli 感受态细胞高效级#C2523H

产品资料 – 感受态细胞 – 蛋白表达菌株

NEB 表达 E. coli 感受态细胞 ( 高效级 )

#C2523H  20 x 0.05 ml

#C2523I  6 x 0.2 ml

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NEB 表达 E. coli 感受态细胞 ( 高效级 )

单独出售的组份

SOC Outgrowth 培养基
#B9020S 4 x 25 ml . . . . . . . . ¥939

优点

 BL21 源增强型菌株,最适于启动子为 Plac、Ptac、Ptrc 的表达载体
 菌落快速培养
 无动物来源产品
 蛋白酶缺陷型菌株

概述

全能型无 T7 表达菌株,为 pMAL 蛋白融合表达与纯化系统的推荐宿主菌株。

基因型

fhuA2 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr- 73::miniTn10–TetS)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10–TetS
endA/Δ(mcrC-mrr)114::IS10

特性

• Lon 和 OmpT 蛋白酶缺失
• 不受限于 DNA 是否甲基化

转化效率

高效级:0.6–1 x 109 cfu/μg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体(fhuA2)、呋喃妥因

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、四环素、壮观霉素、链霉素

随产品提供

SOC Outgrowth 培养基
pUC19 对照 DNA

NEB代理,感受态细胞,蛋白表达菌株,BL21 (DE3) E. coli 感受态细胞

产品资料 – 感受态细胞 – 蛋白表达菌株

BL21 (DE3) E. coli 感受态细胞

#C2527H20 x 0.05 ml

#C2527I6 x 0.2 ml

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NEB 表达 E. coli 感受态细胞 ( 高效级 )

单独出售的组份

SOC Outgrowth 培养基
#B9020S 4 x 25 ml

优点

 常规 T7 表达
 无动物来源产品
 蛋白酶缺陷型 B 菌株

概述

广泛应用的 T7 表达 E. coli 菌株。

基因型

fhuA2 [lon] ompT gal (λ DE3) [dcm] ΔhsdS λ DE3 = λ sBamHIo ΔEcoRI-B int::
(lacI::PlacUV5::T7 gene1) i21 Δnin5

特性

• Lon 和 OmpT 蛋白酶缺失
• 抗 T1 噬菌体感染(fhuA2

转化效率

1–5 x 107 cfu/µg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体(fhuA2

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、呋喃妥因、壮观霉素、链霉素、四环素

随产品提供

SOC Outgrowth 培养基
pUC19 对照 DNA

NEB代理,感受态细胞,蛋白表达菌株,Lemo21(DE3) E. coli 感受态细胞

产品资料 – 感受态细胞 – 蛋白表达菌株

Lemo21(DE3) E. coli 感受态细胞                      #C2528J 12 x 0.05 ml

优点

 表达问题蛋白
 表达膜蛋白
 细胞周质表达的理想选择
 表达毒性蛋白
 表达存在可溶性问题的蛋白

概述

Lemo21(DE3)E. coli 感受态细胞为 T7 可控表达菌株,专为表达具有挑战性的重组蛋白而设计。它作为 BL21(DE3)的衍生菌株,不仅继承了其特点,还能够通过改变 T7 溶菌酶(lysY)的水平以控制表达水平,T7 溶菌酶为 T7 RNA 聚合酶的天然抑制剂。对蛋白表达的精准控制使得 Lemo21(DE3)成为表达膜蛋白、毒性蛋白、分泌蛋白以及存在可溶性问题蛋白的理想选择。

基因型

fhuA2 [lon] ompT gal (λ DE3) [dcm]ΔhsdS/ pLemo(CamR) λ DE3 = λ sBamHIo ΔEcoRI-Bint::(lacI::PlacUV5::T7 gene1) i21 Δnin 5pLemo = pACYC184-PrhaBAD-lysY

特性

• BL21(DE3)源增强型菌株
• 精准的表达调控
• 在 T7 菌株中表达范围最宽(0-2,000 μM 鼠李糖)
• 消除了形成包涵体的潜在可能

转化效率

高效级:1–3 x 107 cfu/μg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体(fhuA2),氯霉素

敏感性

 氨苄青霉素、卡那霉素、呋喃妥因、壮观霉素、链霉素、四环素

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Lemo21(DE3) E. coli 感受态细胞

随产品提供

 L-鼠李糖溶液

pUC19 对照 DNA

NEB代理,感受态细胞,蛋白表达菌株,NiCo21(DE3) E. coli 感受态细胞

产品资料 – 感受态细胞 – 蛋白表达菌株

NiCo21(DE3) E. coli 感受态细胞                      #C2529H20 x 0.05 ml

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Lemo21(DE3) E. coli 感受态细胞

优点

 常规表达时 BL21(DE3)的卓越替代品
 通过 IMAC 分离的目的蛋白纯度更佳
 无动物来源产品

概述

利用固相金属离子亲和层析(IMAC)分离含多聚赖氨酸标签的重组蛋白时,目的蛋白经常被大量的 E. coli 内源金属结合蛋白所污染。蛋白表达菌 NiCo21(DE3)通过改造,使 IMAC 组分中的 E. coli 蛋白污染减少到最低:GlmS 在突变后消除了与 IMAC 树脂结合的能力,另外 3 种蛋白(SlyD、ArnA 与 Can)在加上重组标签后,能够通过几丁质亲和层析快速去除。

基因型

can::CBD fhuA2 [lon] ompT gal (λ DE3)[dcm] arnA::CBD slyD::CBD glmS6Ala ΔhsdS λ DE3= λ sBamHIo ΔEcoRI-B int::(lacI::PlacUV5::T7 gene1)i21 Δnin5

特性

• 与 BL21(DE3)的生长特点一致
• Lon 和 OmpT 蛋白酶缺失

转化效率

1–5 x 107 cfu/µg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体(fhuA2

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、呋喃妥因、壮观霉素、链霉素、四环素

随产品提供

SOC Outgrowth 培养基
pUC19 对照 DNA

NEB代理,感受态细胞,蛋白表达菌株,BL21 E. coli 感受态细胞

产品资料 – 感受态细胞 – 蛋白表达菌株

BL21 E. coli 感受态细胞

#C2530H 20 x 0.05 ml

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BL21 E. coli 感受态细胞

单独出售的组份

SOC Outgrowth 培养基
#B9020S 4 x 25 ml 

优点

 Plac, Ptac, Ptrc, ParaBAD 等表达载体的理想选择
 抗噬菌体 T1 感染(fhuA2)
 蛋白酶缺陷型
 无动物来源产品

概述

为广泛使用的无 T7 E. coli 表达菌株,适用于高效转化与蛋白表达实验,此菌株不表达 T7 RNA 聚合酶。

基因型

 fhuA2 [lon] ompT gal [dcm] ΔhsdS

特性

• Lon 和 OmpT 蛋白酶缺失

转化效率

1–5 x 107 cfu/µg pUC19 DNA

抗性

 T1 噬菌体 (fhuA2 )

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、呋喃妥因、壮观霉素、链霉素、四环素

随产品提供

SOC Outgrowth 培养基
pUC19 对照 DNA

NEB代理,感受态细胞,蛋白表达菌株,T7 表达 E. coli 感受态细胞#C2566H

产品资料 – 感受态细胞 – 蛋白表达菌株

T7 表达 E. coli 感受态细胞 ( 高效级 )

#C2566H 20 x 0.05 ml

#C2566I6 x 0.2 ml

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T7 表达 E. coli 感受态细胞 ( 高效级 )

单独出售的组分

SOC Outgrowth 培养基
#B9020S 4 x 25 ml

优点

 BL21 源增强型菌株
 最常用的 T7 表达菌株
 菌落快速培养
 无动物来源产品

概述

为 BL21 源增强型菌株,用于 T7 表达。

基因型

fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10–TetS)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10– TetS)endA1 Δ(mcrC-mrr)114::IS10

特性

• 在 lac 操纵子上有 T7 RNA 聚合酶,无 λ 前噬菌体
• Lon 和 OmpT 蛋白酶缺失
• 不受限于 DNA 是否甲基化

转化效率

高效级:0.6–1 x 109 cfu/μg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体(fhuA2)、呋喃妥因

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、壮观霉素、链霉素、四环素

随产品提供

SOC Outgrowth 培养基
pUC19 对照 DNA

NEB代理,感受态细胞,蛋白表达菌株,T7 表达 lysY E. coli 感受态细胞

产品资料 – 感受态细胞 – 蛋白表达菌株

T7 表达 lysY E. coli 感受态细胞 ( 高效级 )

#C3010I6 x 0.2 ml

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T7 表达 lysY E. coli 感受态细胞 ( 高效级 )

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SOC Outgrowth 培养基
#B9020S 4 x 25 ml

优点

 BL21 源增强型菌株
 以溶菌酶进行表达控制
 克隆毒性基因
 菌落快速培养
 无动物来源产品

概述

用于 T7 表达的 BL21 源增强型菌株,本底表达水平显著降低。

基因型

MiniF lysY (CamR) / fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10–TetS)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10–TetS) endA1 D(mcrC-mrr)114::IS10

特性

• 在 lac 操纵子上有 T7 RNA 聚合酶,无 λ 前噬菌体
• 通过溶菌酶对 T7 RNA 聚合酶进行调控,从而允许克隆潜在的毒性基因
• LysY 作为特殊的 T7 溶菌酶,因缺少酰胺酶活性,从而降低细胞在诱导过程中的溶菌现象
• Lon 和 OmpT 蛋白酶缺失
• 不受限于 DNA 是否甲基化
• 无需氯霉素

转化效率

高效级: 0.6–1 x 109 cfu/μg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体(fhuA2)、氯霉素、呋喃妥因

敏感性

氨苄青霉素、卡那霉素、壮观霉素、链霉素、四环素

NEB代理,感受态细胞,蛋白表达菌株,T7 表达 lysY/lq E. coli 感受态细胞

产品资料 – 感受态细胞 – 蛋白表达菌株

T7 表达 lysY/lq E. coli 感受态细胞 ( 高效级 )

#C3013I 6 x 0.2 ml

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单独出售的组份

SOC Outgrowth 培养基
#B9020S 4 x 25 ml

优点

 严谨的表达调控(lacI q
 克隆毒性基因
 最高水平的表达控制
 BL21 源增强型菌株
 菌落快速培养
 无动物来源产品

概述

为BL21源增强型菌株,拥有最高水平的 T7 表达控制。

基因型

MiniF lysY lacIq(CamR) / fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10–TetS)2
[dcm] R(zgb-210::Tn10–TetS) endA1 Δ(mcrC-mrr)114::IS10

特性

• 在 lac 操纵子上有 T7 RNA 聚合酶,无 λ 前噬菌体
• 通过 lacIq 精确控制表达,从而允许克隆潜在的毒性基因
• 通过溶菌酶对 T7 RNA 聚合酶进行调控,从而允许克隆潜在的毒性基因
• LysY 作为特殊的T7 溶菌酶,因缺少酰胺酶活性从而降低细胞在诱导过程中的溶菌现象
• Lon 和 OmpT 蛋白酶缺失
• 不受限于 DNA 是否甲基化
• 无需氯霉素

转化效率

高效级:0.6-1 x 109 cfu/μg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体(fhuA2)、氯霉素、呋喃妥因

敏感性

氨苄青霉素、卡那霉素、壮观霉素、链霉素、四环素

NEB代理,感受态细胞,蛋白表达菌株,T7 表达晶体 E. coli 感受态细胞

产品资料 – 感受态细胞 – 蛋白表达菌株

T7 表达晶体 E. coli 感受态细胞 ( 高效级 )

#C3022I  6 x 0.2 ml

相关产品

T7 表达晶体 E. coli 感受态细胞 ( 高效级 )

单独出售的组份

SOC Outgrowth 培养基
#B9020S 4 x 25 ml . . . . . ¥899

优点

 晶体学研究与 SeMet 标记的理想选择
 BL21 源增强型菌株
 无动物来源产品

概述

T7 表达晶体 E. coli 感受态细胞适用于高效转化和蛋白表达,专用于 x 射线结晶学研究。非常适合于对蛋白进行硒代蛋氨酸标记(蛋氨酸营养缺陷型)。

基因型

fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10–TetS)2 [dcm] R(zgb-210::
Tn10–TetS) endA1 metB1 D(mcrC-mrr)114::IS10

特性

• T7 表达的衍生物,T7 RNA 聚合酶位于染色体上并受 lac 调控
• Lon 和 OmpT 蛋白酶缺失

转化效率

高效级:0.6–1 x 109 cfu/μg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体(fhuA2)、呋喃妥因

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、壮观霉素、链霉素、四环素

NEB代理,感受态细胞,蛋白表达菌株,SHuffle T7 E. coli 感受态细胞

产品资料 – 感受态细胞 – 蛋白表达菌株

SHuffle T7 E. coli 感受态细胞

#C3026J  12 x 0.05 ml

优点

 有助于细胞质中蛋白质二硫键的折叠
 T7 表达
 K12 菌株
 无动物来源产品

概述

T7 表达菌株,在细胞质中正确折叠含有多个二硫键重组蛋白的能力更强。

基因型

F´ lac, pro, lacIq / Δ(ara-leu)7697 araD13fhuA2 lacZ::T7 gene1 Δ(phoA)Pvull phoR ahpC* galE(or U) galKλatt::pNEB3-r1-cDsbC (SpecR, laclq) ΔtrxBrpsL150(StrR)Δgor Δ(malF)3

转化效率

1 x 106 cfu/μg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体(fhuA2)、呋喃妥因、壮观霉素、链霉素

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、四环素
* 可能观察到对低水平的链霉素存在抗性。

相关产品

SHuffle T7 E. coli 感受态细胞

NEB代理 , 感受态细胞 , 蛋白表达菌株

产品资料 – 感受态细胞 – 蛋白表达菌株

SHuffle 表达 E. coli 感受态细胞

#C3028J  12 x 0.05 ml

相关产品

SHuffle 表达 E. coli 感受态细胞

优点

 有助于细胞质中蛋白质二硫键的折叠
 蛋白酶缺失
 BL21 B 源增强型菌株
 无动物来源产品

概述

在细胞质中正确折叠含有多个二硫键重组蛋白的能力更强。

基因型

fhuA2 [Ion] ompT ahpC gal λatt::pNEB3-r1-cDsbC (SpecR, laclq) ΔtrxB sulA11 R(mcr-73-::miniTn10–TetS)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10–TetS) endA1 ΔgorΔ(mcrC-mrr)114::IS10

转化效率

 1 x 107 cfu/μg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体(fhuA2)、呋喃妥因、壮观霉素

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、四环素
* 可能观察到对低水平的链霉素存在抗性。

NEB代理 , 感受态细胞 , 蛋白表达菌株

产品资料 – 感受态细胞 – 蛋白表达菌株

SHuffle T7 表达 E. coli 感受态细胞                             

货 号
规 格
价 格(元)
北京库存
上海库存
广州库存
成都库存
苏州库存

#C3029J
12 x 0.05 ml
3,829.00

      


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SHuffle T7 表达 E. coli 感受态细胞

优点

 有助于细胞质中蛋白质二硫键的折叠
 T7 表达
 蛋白酶缺失的 B 菌株
 BL21 源增强型菌株
 无动物来源产品

概述

T7 表达菌株,在细胞质中正确折叠含有多个二硫键的重组蛋白的能力更强。

基因型

fhuA2 lacZ::T7 gene1 [Ion] ompT ahpC galλatt::pNEB3-r1-cDsbC (SpecR, laclq) ΔtrxB sulA11 R(mcr-73-::miniTn10–TetS)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10–TetS)endA1 Δgor Δ(mcrC-mrr)114::IS10

转化效率

1 x 107 cfu/μg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体(fhuA2)、呋喃妥因、链霉素*、壮观霉素

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、四环素
*可能观察到对低水平的链霉素存在抗性。

NEB代理 , 感受态细胞 , 蛋白表达菌株

产品资料 – 感受态细胞 – 蛋白表达菌株

SHuffle T7 表达 lysY E. coli 感受态细胞                             

货 号
规 格
价 格(元)
北京库存
上海库存
广州库存
成都库存
苏州库存

#C3030J
12 x 0.05 ml
3,829.00

      


优点

 表达毒性蛋白(lysY)
 有助于细胞质中蛋白质二硫键的折叠
 T7 表达
 蛋白酶缺陷的 B 菌株
 无动物来源产品
 BL21 源增强型菌株

概述

严格的 T7 表达控制,在细胞质中正确折叠含有多个二硫键重组蛋白的能力更强。

基因型

MiniF lysY (CamR) / fhuA2 lacZ::T7 gene1[Ion] ompT ahpC gal λatt::pNEB3-r1-cDsbC (SpecR,
laclq)ΔtrxB sulA11 R(mcr-73-::miniTn10–TetS)2[dcm] R(zgb-210::Tn10–TetS) endA1 Δgor Δ(mcrCmrr)
114::IS10

转化效率

1 x 107 cfu/μg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体(fhuA2)、氯霉素、呋喃妥因、链霉素*、壮观霉素

敏感性

氨苄青霉素、卡那霉素、四环素

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SHuffle T7 表达 lysY E. coli 感受态细胞

NEB代理 , 感受态细胞 , 蛋白表达菌株

产品资料 – 感受态细胞 – 蛋白表达菌株

NEB 表达 lq E. coli 感受态细胞 ( 高效级 )                             

货 号
规 格
价 格(元)
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广州库存
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苏州库存

#C3037I
6 x 0.2ml
2,899.00

      


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NEB 表达 lq E. coli 感受态细胞 ( 高效级 )

 

单独出售的组分

SOC Outgrowth 培养基
#B9020S 4 x 25 ml . . . . . . . . ¥939

优点

 BL21 源增强型菌株,最适于启动子为 Plac、Ptac、Ptrc 的表达载体
 对 IPTG 诱导的无 T7 质粒表达控制更好
 菌落快速培养
 lacIq 降低了本底表达
 蛋白酶缺陷型菌株
 无动物来源产品

概述

特点为有效调控 IPTG 诱导的无 T7 质粒表达。

基因型

MiniF lacIq (CamR) / fhuA2 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10–TetS)2 [dcm] R(zgb- 210::Tn10–TetS) endA/Δ(mcrC-mrr)114::IS10

特性

• Lon 和 OmpT 蛋白酶缺失
• 不受限于 DNA 是否甲基化
• 是 pUC19 或其衍生质粒最理想的表达调控菌株

转化效率

高效级:0.6–1 x 109 cfu/μg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体(fhuA2)、氯霉素、呋喃妥因

敏感性

氨苄青霉素、卡那霉素、壮观霉素、链霉素、四环素

酵母感受态细胞 克隆与表达分析

 Y2HGold Chemically Competent Cell 酵母感受态细胞 克隆与表达分析,是GAL4系统酵母双杂交用实验菌株,能直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过接合(mating)操作进行蛋白相互作用验证或双杂交文库筛选和构建。

 

Y2HGold Chemically Competent Cell

酵母菌化学感受态细胞

 

产品标签

Matchmarker GAL4双杂交系统;Y2HGoldpGBKT7Y187pGADT7AUR1-CAureobasidin A AbA);金担子素;

产品信息

产品名称 产品编号 规格 价格(元)
Y2HGold Chemically Competent Cell 

酵母菌化学感受态细胞

MF2352-1000UL 10×100μl 290
MF2352-5000UL 50×100μl 1320

产品包装

组分编号 组分名称 保存

货号(规格)

MF2352-1000UL MF2352-5000UL
MF2352-A Y2HGold Competent Cell -80 10×100μl 50×100μl
MF2352-B pGADT7 Control Vector (10ng/μl) -80 10μl   10μl  
MF2352-C Carrier DNA (5μg/μl) -20 100μl  500μl 
MF2352-D PEG/LiAC Solution +4 5ml 25ml

产品描述

Y2HGoldGAL4系统酵母双杂交用实验菌株,能直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过接合(mating)操作进行蛋白相互作用验证或双杂交文库筛选和构建。Y2HGold-GAL4酵母双杂交系统需要两种质粒配套使用,分别为pGBKT7pGADT7。前者筛选标志为Trp1,用于表达DNA-BD与诱饵蛋白(bait)的融合蛋白;后者筛选标志为Leu,用于表达AD与诱捕蛋白(prey)的融合蛋白。Y2HGold有四个报告基因:AUR1-CHIS3, ADE2, MEL1,分别由三个完全异源的Gal4反应启动元件-G1G2M1操控,这三种启动子只有GAL4识别的17bp核心区相同,其余部分都不同,因此大大降低了酵母双杂交假阳性发生的概率。此外,新报告基因AUR1-C与以往的营养缺陷报告基因相比,具有更低背景,这一优势也可降低酵母双杂交假阳性发生的概率。

本品为经特殊工艺制备的Y2HGold酵母菌化学感受态细胞,用pGADT7质粒检测转化效率>104cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存三个月。

基因型

MATa, trp1-901, leu2-3, 112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ, LYS2::GAL1UASGal1TATAHis3, GAL2UASGal2TATAAde2 URA3::MEL1UASMel1TATA AUR1-C MEL1

注意事项

1. 在冰上融化感受态细胞。

2. 转化高浓度质粒可相应减少用于涂板的菌量。同时转化2-3种质粒可适当增加质粒的用量。

3. Y2HGold对高温敏感,zui适生长温度为27-30℃,一旦高于31℃,生长速度和转化率都呈指数下降。

4.菌落变粉红色并不是污染,而是酵母细胞生长中的一种常见现象。当酵母细胞在平板上培养几天,将平板内的腺嘌呤消耗殆尽,那时酵母试图通过自身代谢途径合成腺嘌呤以供利用。然而,某些菌株ADE2基因被破坏,腺嘌呤合成受阻。且ADE4567基因均正常。由此,造成中间产物P-ribosylamino imidazoleAIR)在细胞的积累使得菌落变为粉红色。

5. 酵母菌在缺陷培养基上生长速度比YPDA培养基慢,营养缺陷成分越多,生长越慢,以转化涂板为例:涂YPDA平板于29℃,48h培养可见直径1mm克隆;涂SD单缺平板于29℃,48-60h培养可见直径1mm克隆;涂SD双缺平板于29℃,60-80h培养可见直径1mm克隆;涂SD三缺或四缺平板于29℃,80-90h培养可见直径1mm克隆;

6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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货号

名称

规格

MF2351-300UL Y2HGold Yeast Strain 酵母双杂交用甘油菌 300μl
MF2352-1000UL Y2HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2353-300UL Y187 Yeast Strain 酵母双杂交用甘油菌 300μl
MF2354-1000UL Y187 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2355-300UL AH109 Yeast Strain 酵母双杂交用甘油菌 300μl
MF2356-1000UL AH109 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2501-200T Yeast Transformation Kit 酵母转化试剂盒 200T
MS6303-350G YPDA Agar Medium YPDA琼脂培养基 350g
MS6304-250G YPDA Medium YPDA液体培养基 250g

 Y2HGold Chemically Competent Cell 酵母感受态细胞 克隆与表达分析

Y2HGold Chemically Competent Cell 酵母感受态细胞 克隆与表达分析

 

酵母感受态细胞 克隆与表达分析

AH109 Chemically Competent Cell 酵母感受态细胞 克隆与表达分析,AH109是MATa型,能直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过接合(mating)操作进行蛋白相互作用验证或双杂交文库筛选和构建。

AH109 Chemically Competent Cell

酵母菌化学感受态细胞

 

Matchmarker GAL4双杂交系统;Y2HGoldpGBKT7Y187pGADT7AUR1-CAureobasidin A AbA);金担子素;

产品信息

产品名称 产品编号 规格
AH109 Chemically Competent Cell

酵母菌化学感受态细胞

MF2356-1000UL 10×100μl
MF2356-5000UL 50×100μl

产品包装

组分编号 组分名称 保存

货号(规格)

MF2356-1000UL MF2356-5000UL
MF2356-A AH109 Chemically Competent Cell -80 10×100μl 50×100μl
MF2356-B pGADT7 Control Vector (10ng/μl) -80 10μl   10μl  
MF2356-C Carrier DNA (5μg/μl) -20 100μl  500μl 
MF2356-D PEG/LiAC Solution +4 5ml 25ml

产品描述

AH109GAL4系统酵母双杂交用实验菌株,来源于PJ69-2A酵母菌株,引入lacZ报告基因从而产生AH109

AH109MATa型,能直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过接合(mating)操作进行蛋白相互作用验证或双杂交文库筛选和构建。AH109-GAL4酵母双杂交系统需要两种质粒配套使用,分别为pGBKT7pGADT7。前者筛选标志为Trp,用于表达DNA-BD与诱饵蛋白(bait)的融合蛋白;后者筛选标志为Leu,用于表达AD与诱捕蛋白(prey)的融合蛋白。AH109有四个报告基因:lacZHIS3, ADE2, MEL1,分别由三个完全异源的Gal4反应启动元件-G1G2M1调控,这三种启动子只有GAL4识别的17bp核心区相同,其余部分都不同。这一特征有效缩减假阳性发生的概率。因为,任何诱捕蛋白单独结合引起假阳性都需要识别3个不同序列,激活4个报告基因表达。

本品为经特殊工艺制备的AH109酵母菌化学感受态细胞,用pGADT7质粒检测转化效率>104cfu/μg DNA。且在-80能稳定保存三个月。

基因型

MATa, trp1-901, leu2-3, 112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ, LYS2::GAL1UASGal1TATAHis3, MEL1GAL2UASGal2TATAAde2, URA3::MEL1UASMEL1TATA- lacZ

注意事项

1/在冰上融化感受态细胞。

2/转化高浓度质粒可相应减少用于涂板的菌量。同时转化2-3种质粒可适当增加质粒的用量。

3/AH109对高温敏感,zui适生长温度为27-30,一旦高于31,生长速度和转化率都呈指数下降。

4/菌落变粉红色并不是污染,而是酵母细胞生长中的一种常见现象。当酵母细胞在平板上培养几天,将平板内的腺嘌呤消耗殆尽,那时酵母试图通过自身代谢途径合成腺嘌呤以供利用。然而,某些菌株ADE2基因被破坏,腺嘌呤合成受阻。且ADE45678基因均正常。由此,造成中间产物P-ribosylamino imidazoleAIR)在细胞的积累使得菌落变为粉红色。

5/酵母菌在缺陷培养基上生长速度比YPDA培养基慢,营养缺陷成分越多,生长越慢,以转化涂板为例:涂YPDA平板于2948h培养可见直径1mm克隆;涂SD单缺平板于2948-60h培养可见直径1mm克隆;涂SD双缺平板于2960-80h培养可见直径1mm克隆;涂SD三缺或四缺平板于2980-90h培养可见直径1mm克隆;

6/为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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货号

名称

规格

MF2351-300UL Y2HGold Yeast Strain 酵母双杂交用甘油菌 300μl
MF2352-1000UL Y2HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2353-300UL Y187 Yeast Strain 酵母双杂交用甘油菌 300μl
MF2354-1000UL Y187 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2355-300UL AH109 Yeast Strain 酵母双杂交用甘油菌 300μl
MF2356-1000UL AH109 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2501-200T Yeast Transformation Kit 酵母转化试剂盒 200T
MS6303-350G YPDA Agar Medium YPDA琼脂培养基 350g
MS6304-250G YPDA Medium YPDA液体培养基 250g

 AH109 Chemically Competent Cell 酵母感受态细胞 克隆与表达分析

AH109 Chemically Competent Cell 酵母感受态细胞 克隆与表达分析

AGL1 农杆菌电转感受态细胞,农杆菌感受态细胞

 AGL1 农杆菌电转感受态细胞:我司生物提供的AGL1电转感受态细胞经特殊工艺制作,特别适合大质粒的转化。基因型C58 RecA (rifR/carbR) Ti pTiBo542DT-DNA Succinamopine,经pCAMBIA2301质粒检测转化效率>105 cfu/μg DNA。
AGL1 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞
AGL1菌株;农杆菌感受态细胞;RifampicinRif 利福平Kanamycinkan)卡那霉素; EHA101LBA4404GV3101;植物转基因研究;
货号 产品名称 规格

MF2310-0500UL

AGL1 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞

10×50μl

MF2310-2500UL AGL1 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞 50×50μl

AGL1菌株的染色体背景为C58RecA,核基因含利福平抗性基因rif和羧苄青霉素抗性基因carb,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒pTiBo542DT-DNA,此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pTiBo542DT-DNA质粒自身的T-DNA转移功能虽被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。AGL1菌株适用于拟南芥、水稻、杨树等植物的转基因操作。

组分编号 组分名称

货号(规格)

MF2310-0500UL MF2310-2500UL
MF2310-A AGL1 Electrocompetent cell 10×50μl 50×50μl
MF2310-B pCAMBIA2301 对照载体 (10ng/μl) 10μl 10μl

注意事项

1)   感受态细胞应保存在-80,不可反复冻融和放置时间过长,以免降低感受态细胞的转化效率。

2)   整个转化操作,严格根据相应温度及无菌条件要求进行。

3)   加入质粒的体积不应大于感受态体积的1/10。质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,会导致转化效率急剧下降。质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。

4)   为确保zui高转化效率,整个操作过程应尽量轻柔,并保持低温。

5)   转化高浓度的质粒可相应减少zui终涂板用量。

6)   平板上克隆密度过大时,由于营养不足,克隆生长变慢,菌落变小。为获得大菌落,应减少质粒用量。

7)   利福平浓度应≤25μg/ml,过高浓度不利于农杆菌生长,会降低其生长速度和转化效率。我司EHA101感受态计算转化效率时所用平板只含50μg/ml卡那霉素,若所用平板含20μg/ml 利福平,则转化效率降低到1/2

8)   培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌;根据所用菌株抗性加入Ti质粒筛选抗生素可防止Ti质粒丢失,但这些筛选抗生素不利于农杆菌的转基因操作,所以一般培养农杆菌时不考虑这些筛选抗生素,因Ti质粒丢失的概率极低(基本可以忽略)。

9)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1)        0.1 cm店击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净吸水纸上5min,待其沥干水分,正置5min,使乙醇充分挥发干净,立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖,冰中静置5min使其充分降温。

2)        -80保存的感受态细胞于室温或手心片刻待其部分融化,达到冰水混合状态时插入冰浴中使其完全融化。

3)        50μl感受态细胞悬液中加入0.01~1μg(体积不大于6μl)质粒DNA,用手管底使其混匀,立即插入冰中。用枪轻轻吹打混匀感受态细胞质粒之后快速转移到店击杯中,盖上杯盖,空管保留待用注意:由于感受态转化效率较高,*次使用做预试验确定zui加的质粒用量。

4)        启动电转仪,设置参数:C=25 μFPC=200 ohmV=2400 V(此参数参考Bio-rad,具体使用请参考电转仪推荐步骤来操作),将店击杯快速放入电转槽中,店击完成快速插入冰中。

5)        加入700 μl无抗生素的LB并转移到感受态空管中,于28振荡培养2~3h

6)        6,000rpm离心1min,吸掉600ul上清,之后用枪轻轻吹打重悬菌体。之后加到含相应抗生素的LBYEB平板上,用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min,待液体被吸收后,倒置平板,28培养2-3天。注意:当平板只含转化所用双元载体抗生素时,28培养48h即可;当平板中加入双元载体抗生素的同时,再加入20μg/ml 利福平时,需28培养60h;若使用的平板含50μg/ml 利福平,需在28培养72-90h

相关产品感受态细胞系列

产品编号 产品名称 规格

MF2306-0500UL

EHA101 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞 10×50μl

MF2307-0500UL

EHA105 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞 10×50μl
MF2308-0500UL LBA4404 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞 10×50μl
MF2309-0500UL GV3101 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞 10×50μl

MF2310-0500UL

AGL1 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞 10×50μl

MF2301-1000UL

EHA101 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2302-1000UL EHA105 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 10×100μl

MF2303-1000UL

LBA4404 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 10×100μl

MF2305-1000UL

AGL1 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2304-1000UL GV3101 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 10×100μl
产品编号 产品名称 规格

MS0014-1G

Rifampicin, USP Grade 利福平 1g
MS0014-5G Rifampicin, USP Grade  利福平 5g

MS0016-5G

Spectinomycin Dihydrochloride Pentahydrate 壮观霉素二妍酸盐五水合物 5g
MS0016-25G Spectinomycin Dihydrochloride Pentahydrate 壮观霉素二妍酸盐五水合物 25g

MS0017-5G

Carbenicillin, Disodium Salt 羧苄青霉素二钠盐 5g
MS0017-25G Carbenicillin, Disodium Salt 羧苄青霉素二钠盐 25g

MS0019-10G

Kanamycin Sulfate 硫酸卡那霉素 10g
MS0019-25G Kanamycin Sulfate 硫酸卡那霉素 25g

MS0025-1G

Gentamycin Sulfate Salt 硫酸庆大霉素 1g

MS0023-25G

Streptomycin Sulfate, USP Grade 硫酸链霉素 25g

组分Component

LB(液体)/

LB(固体)/

胰蛋白胨 Tryptone

10g

10g

酵母提取物 Yeast extract

5g

5g

氯化钠 NaCl

10g

10g

1N NaOH

调整pH7.0

调整pH7.0

琼脂 Agar

/

15g


附表
2 固体和液体YEB培养基配方

组分Component

YEB(液体)/

YEB(固体)/

胰蛋白胨 Tryptone

5g

5g

酵母提取物 Yeast extract

1g

1g

牛肉浸膏 Beef Extract

5g

5g

蔗糖 Sucrose

5g

5g

七水硫酸镁 MgSO4·7H2O

0.49g

0.49g

1N NaOH

调整pH7.0

调整pH7.0

琼脂 Agar

/

15g

附表3常见农杆菌对抗生素敏感性总表

农杆菌菌株

羧苄(carb

链霉素(strep

利福平(rif

庆大霉素(gent

卡那霉素(kan

EHA101

S

S

R

S

R

EHA105

S

S

R

S

S

LBA4404

S

R

R

S

S

GV3101

S

S

R

R

S

AGL1

R

S

R

S

S

备注S代表敏感,R代表抗性。

 AGL1 农杆菌电转感受态细胞 AGL1 农杆菌电转感受态细胞

GV3101 Electrocompetent cell 感受态细胞

我司生物提供的GV3101电转感受态细胞(GV3101 Electrocompetent cell 感受态细胞)经特殊工艺制作,特别适合大质粒的转化。基因型C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gent) Nopaline,经pCAMBIA2301质粒检测转化效率>105 cfu/μg DNA。

GV3101 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞

GV3101菌株;农杆菌感受态细胞;RifampicinRif 利福平Kanamycinkan)卡那霉素; EHA101LBA4404AGL1;植物转基因研究;

货号 产品名称 规格  

MF2309-0500UL

GV3101 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞

10×50μl

MF2309-2500UL GV3101 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞 50×50μl

 

GV3101菌株的染色体背景为C58,核基因含利福平抗性基因rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pMP90pTiC58DT-DNA),此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pMP90pTiC58DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能虽被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。pMP90pTiC58DT-DNA)型Ti质粒携带筛选标签Gent,赋予GV3101菌株庆大霉素抗性,适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作。

我司生物提供的GV3101电转感受态细胞经特殊工艺制作,特别适合大质粒的转化。基因型C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gent) Nopaline,经pCAMBIA2301质粒检测转化效率>105 cfu/μg DNA

 

组分编号 组分名称

货号(规格)

MF2309-0500UL MF2309-2500UL
MF2309-A GV3101 Electrocompetent cell 10×50μl 50×50μl
MF2309-B pCAMBIA2301 对照 Vector (10ng/μl) 10μl 10μl

 

 GV3101 Electrocompetent cell 感受态细胞

GV3101 Electrocompetent cell 感受态细胞

LBA4404 Electrocompetent 感受态细胞

LBA4404 Electrocompetent 感受态细胞 , 我司生物提供的LBA4404电转感受态细胞经特殊工艺制作,特别适合大质粒的转化。基因型Ach5 (rifR) Ti pAL4404 (strepR) Octopine,经pCAMBIA2301质粒检测转化效率>105 cfu/μg DNA。

LBA4404 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞

 

LBA4404菌株;农杆菌感受态细胞;RifampicinRif 利福平Kanamycinkan)卡那霉素; EHA101GV3101AGL1;植物转基因研究;

货号 产品名称 规格  

MF2308-0500UL

LBA4404 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞

10×50μl

MF2308-2500UL LBA4404 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞 50×50μl

产品描述:

LBA4404菌株的染色体背景为Ach5,核基因含利福平抗性基因rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的章鱼碱型Ti质粒pAL4404,此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pAL4404质粒自身的T-DNA转移功能虽被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。pAL4404Ti质粒携带筛选标签Strep,赋予LBA4404菌株链霉素抗性,适用于菸草、番茄、烟草等植物的转基因操作。

我司生物提供的LBA4404电转感受态细胞经特殊工艺制作,特别适合大质粒的转化。基因型Ach5 (rifR) Ti pAL4404 (strepR) Octopine,经pCAMBIA2301质粒检测转化效率>105 cfu/μg DNA

产品组分:

组分编号 组分名称

货号(规格)

MF2308-0500UL MF2308-2500UL
MF2308-A LBA4404 Electrocompetent cell 10×50μl 50×50μl
MF2308-B pCAMBIA2301 Contol Vector (10ng/μl) 10μl 10μl

 LBA4404 Electrocompetent 感受态细胞 LBA4404 Electrocompetent 感受态细胞

EHA105 农杆菌电转感受态细胞,基因型为C58,rifR,Ti pEHA105

EHA105 农杆菌电转感受态细胞:我司(生物)提供的EHA105电转感受态细胞经特殊工艺制作,特别适合大质粒的转化。基因型为C58 (rifR) Ti pEHA105 (pTiBo542DT- DNA) Succinamopine,经pCAMBIA2301质粒检测转化效率>105cfu/μg DNA。

EHA105 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞

EHA105菌株;农杆菌感受态细胞;RifampicinRif 利福平Kanamycinkan)卡那霉素; EHA101LBA4404GV3101AGL1;植物转基因研究;

货号 产品名称 规格

MF2307-0500UL

EHA105 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞

10×50μl

MF2307-2500UL EHA105 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞 50×50μl

 

EHA105菌株由EHA101菌株改造而来,染色体背景为C58,核基因含利福平抗性基因rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒pEHA105pTiBo542DT-DNA),此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pEHA105pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能虽被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。EHA105菌株适用于水稻、烟草等植物的转基因操作。

组分编号 组分名称

货号(规格)

MF2307-0500UL MF2307-2500UL
MF2307-A EHA105 Electrocompetent cell 10×50μl 50×50μl
MF2307-B pCAMBIA2301 Conrol Vector (10ng/μl) 10μl 10μl

EHA105 农杆菌电转感受态细胞 EHA105 农杆菌电转感受态细胞

EHA101农杆菌电转感受态细胞

EHA101农杆菌电转感受态细胞:我司(生物)提供的EHA101电转感受态细胞经特殊工艺制作,特别适合大质粒的转化。基因型为C58 (rifR) Ti pEHA101 (pTiBo542D T- DNA) (kanR) Nopaline,经pK7WGF2质粒(壮观霉素抗性)检测转化效率>105 cfu/μg DNA。

EHA101 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞

EHA101菌株;农杆菌感受态细胞;RifampicinRif 利福平Kanamycinkan)卡那霉素; EHA105LBA4404GV3101AGL1;植物转基因研究;

货号 产品名称 规格  

MF2306-0500UL

EHA101 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞

10×50μl

 
MF2306-2500UL EHA101 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞 50×50μl  

EHA101菌株的染色体背景为C58,核基因含利福平抗性基因rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pEHA101pTiBo542DT-DNA),此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pEHA101pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能虽被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。pEHA101pTiBo542DT-DNA)质粒携带筛选标签kan,赋予EHA101菌株卡那霉素抗性,适用于玉米、水稻、烟草等植物的转基因操作。

产品组分:

组分编号 组分名称

货号(规格)

MF2306-0500UL  
MF2306-A EHA101 Electrocompetent cell 10×50μl MF2306-A
MF2306-B pK7WGF2 Conrol Vector (10ng/μl) 10μl MF2306-B

 注意事项

1)   培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌;根据所用菌株抗性加入Ti质粒筛选抗生素可防止Ti质粒丢失,但这些筛选抗生素不利于农杆菌的转基因操作,所以一般培养农杆菌时不考虑这些筛选抗生素,因Ti质粒丢失的概率极低(基本可以忽略)。

2)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

EHA101农杆菌电转感受态细胞 EHA101农杆菌电转感受态细胞

EHA101农杆菌化学感受态细胞​

EHA101农杆菌化学感受态细胞​: EHA101菌株的染色体背景为C58,核基因含利福平抗性基因rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pEHA101(pTiBo542DT-DNA),此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件。

EHA101 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞

EHA101菌株;农杆菌感受态细胞;RifampicinRif 利福平Kanamycinkan)卡那霉素; EHA105LBA4404GV3101AGL1;植物转基因研究;

货号 产品名称 规格
MF2301-1000UL EHA101 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 10×100μl

MF2301-5000UL

EHA101 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 50×100μl

 

EHA101菌株的染色体背景为C58,核基因含利福平抗性基因rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pEHA101pTiBo542DT-DNA),此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pEHA101pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能虽被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。pEHA101pTiBo542DT-DNA)质粒携带筛选标签kan,赋予EHA101菌株卡那霉素抗性,适用于玉米、水稻、烟草等植物的转基因操作。

我司提供的EHA101化学转化感受态细胞经特殊工艺制作,基因型为C58 (rifR) Ti pEHA101 (pTiBo542D T- DNA) (kanR) Nopaline,经pK7WGF2质粒(壮观霉素抗性)检测转化效率>104 cfu/μg DNA

根癌农杆菌介导的转化原理:

根癌农杆菌能在自然条件下趋化性的感染大多数双子叶植物或裸子植物的受伤部位,诱导产生冠瘿瘤。诱发冠瘿瘤的原因在于根癌农杆菌Ti质粒上的T-DNA8个左右的基因能在植物细胞内表达,指导合成一种非常特殊的化合物冠瘿碱,进而引发转化细胞癌变;根癌农杆菌Ti质粒(150200kb)上的一段T-DNA,随着农杆菌侵染植物伤口进入细胞后,T-DNA脱离质粒并整合到植物基因组。因此,将外源基因插入到改造的T-DNA中,借助农杆菌的感染作用,从而达到将外源基因转化并整合进入受体植物的目的。

Ti质粒的类型:

根据根癌农杆菌诱导的植物冠瘿瘤中所合成的冠瘿碱种类不同,Ti质粒可分为4种类型:章鱼碱型(octopine)、胭脂碱型(nopaline)、农杆碱型(agropine)、农杆菌素碱型(agrocinopine)或称为琥珀碱型(succinamopine)。章鱼碱和胭脂碱是由氨基酸衍生的冠瘿碱,而农杆碱和农杆菌素碱是属于单糖衍生的冠瘿碱。各种不同类型的Ti质粒都具有控制肿瘤诱发的且物理位置彼此相邻的T-DNA区和毒性区(Vir),它们约占Ti质粒DNA总长度的1/3

产品组分:

组分编号 组分名称 规格 储存方法
MF2301-A EHA101 Chemically Competent Cell 10×100μl -80ºC保存
MF2301-B pK7WGF2 Control Vector (10ng/μl) 10μl -80ºC保存

使用方法

 

1)        -80保存的感受态细胞于室温或手心片刻待其部分融化,达到冰水混合状态时插入冰浴中使其完全融化。

2)        100μl感受态细胞悬液中加入1μg(体积不大于10μl)目的DNA,用手管底使其混匀,依次于冰上静置5min,液氮5min37水浴5min,冰浴5min

3)        加入700μl无抗生素的LBYEB液体培养基,于28振荡培养2-3h

4)        6,000rpm离心1min,吸掉600ul上清,之后用枪轻轻吹打重悬菌体。之后加到含相应抗生素的LBYEB平板上,用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min,待液体被吸收后,倒置平板,28培养2-3天。

注意:当平板只含转化所用双元载体抗生素时,28培养48h即可;当平板中加入双元载体抗生素的同时,再加入20μg/ml 利福平时,需28培养60h;若使用的平板含50μg/ml 利福平,需在28培养72-90h。

EHA101农杆菌化学感受态细胞​

EHA101农杆菌化学感受态细胞​

EHA105 Competent Cell 化学感受态细胞

EHA105 Competent Cell 化学感受态细胞:生物提供的EHA105化学转化感受态细胞经特殊工艺制作,基因型为C58 (rifR) Ti pEHA105 (pTiBo542DT- DNA) Succinamopine,经pCAMBIA2301质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA。
EHA105 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞

EHA101菌株;农杆菌感受态细胞;RifampicinRif 利福平Kanamycinkan)卡那霉素; EHA105LBA4404GV3101AGL1;植物转基因研究;

货号 产品名称 规格
MF2302-1000UL EHA105 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 10×100μl

MF2302-2000UL EHA105 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 20×100μl
MF2302-5000UL

EHA105 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞

50×100μl

EHA105菌株由EHA101菌株改造而来,染色体背景为C58,核基因含利福平抗性基因rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒pEHA105pTiBo542DT-DNA),此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pEHA105pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能虽被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。EHA105菌株适用于水稻、烟草等植物的转基因操作。
我司提供的
EHA105化学转化感受态细胞经特殊工艺制作,基因型为C58 (rifR) Ti pEHA105 (pTiBo542DT- DNA) Succinamopine,经pCAMBIA2301质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA

根癌农杆菌介导的转化原理:

根癌农杆菌能在自然条件下趋化性的感染大多数双子叶植物或裸子植物的受伤部位,诱导产生冠瘿瘤。诱发冠瘿瘤的原因在于根癌农杆菌Ti质粒上的T-DNA8个左右的基因能在植物细胞内表达,指导合成一种非常特殊的化合物冠瘿碱,进而引发转化细胞癌变;根癌农杆菌Ti质粒(150200kb)上的一段T-DNA,随着农杆菌侵染植物伤口进入细胞后,T-DNA脱离质粒并整合到植物基因组。因此,将外源基因插入到改造的T-DNA中,借助农杆菌的感染作用,从而达到将外源基因转化并整合进入受体植物的目的。

产品组分:

组分编号 组分名称

货号(规格)

1000UL

2000UL

5000UL

MF2302-A EHA105 Chemically Competent Cell

10×100μl

20×100μl

50×100μl

MF2302-B pCAMBIA2301 Control Vector (10ng/μl)

10μl

10μl

10μl

注意事项

1)   培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌;根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止Ti质粒丢失,但链霉素不利于农杆菌的转基因操作,一般培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大霉素,因Ti质粒丢失的概率极低(基本可以忽略)。

2)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

相关产品

货号 名称 规格 农杆菌类型
MF2301-1000UL EHA101化学感受态细胞 10×100μl 根癌农杆菌
MF2301-5000UL EHA101化学感受态细胞 50×100μl 根癌农杆菌
MF2302-1000UL EHA105化学感受态细胞 10×100μl 根癌农杆菌
MF2302-5000UL EHA105化学感受态细胞 50×100μl 根癌农杆菌
MF2303-1000UL LBA4404化学感受态细胞 10×100μl 根癌农杆菌
MF2303-5000UL LBA4404化学感受态细胞 50×100μl 根癌农杆菌
MF2304-1000UL GV3101化学感受态细胞 10×100μl 根癌农杆菌
MF2304-5000UL GV3101化学感受态细胞 50×100μl 根癌农杆菌
MF2305-1000UL AGL1化学感受态细胞 10×100μl 根癌农杆菌
MF2305-5000UL AGL1化学感受态细胞 50×100μl 根癌农杆菌
MF2306-1000UL EHA101电转感受态细胞 10×100μl 根癌农杆菌
MF2306-5000UL EHA101电转感受态细胞 50×100μl 根癌农杆菌
MF2307-1000UL EHA105电转感受态细胞 10×100μl 根癌农杆菌
MF2307-5000UL EHA105电转感受态细胞 50×100μl 根癌农杆菌
MF2308-1000UL LBA4404电转感受态细胞 10×100μl 根癌农杆菌
MF2308-5000UL LBA4404电转感受态细胞 50×100μl 根癌农杆菌
MF2309-1000UL GV3101电转感受态细胞 10×100μl 根癌农杆菌
MF2309-5000UL GV3101电转感受态细胞 50×100μl 根癌农杆菌
MF2310-1000UL AGL1电转感受态细胞 10×100μl 根癌农杆菌
MF2310-5000UL AGL1电转感受态细胞 50×100μl 根癌农杆菌

附表3常见农杆菌对抗生素敏感性总表

农杆菌菌株

羧苄(carb

链霉素(strep

利福平(rif

庆大霉素(gent

卡那霉素(kan

EHA101

S

S

R

S

R

EHA105

S

S

R

S

S

LBA4404

S

R

R

S

S

GV3101

S

S

R

R

S

AGL1

R

S

R

S

S

备注S代表敏感,R代表抗性。

 EHA105 Competent Cell 化学感受态细胞 EHA105 Competent Cell 化学感受态细胞

LBA4404 Chemically 农杆菌化学感受态细胞

LBA4404 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞

EHA101菌株;农杆菌感受态细胞;RifampicinRif 利福平Kanamycinkan)卡那霉素; EHA105LBA4404GV3101AGL1;植物转基因研究;

货号 产品名称 规格
MF2303-1000UL LBA4404 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 10×100μl

MF2303-5000UL

LBA4404 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 50×100μl

产品描述:

LBA4404菌株的染色体背景为Ach5,核基因含利福平抗性基因rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的章鱼碱型Ti质粒pAL4404,此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pAL4404质粒自身的T-DNA转移功能虽被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。pAL4404Ti质粒携带筛选标签Strep,赋予LBA4404菌株链霉素抗性,适用于菸草、番茄、烟草等植物的转基因操作。

我司提供的LBA4404化学转化感受态细胞经特殊工艺制作,基因型Ach5 (rifR) Ti pAL4404 (strepR) Octopine,经pCAMBIA2301质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA

Ti质粒的类型:

根据根癌农杆菌诱导的植物冠瘿瘤中所合成的冠瘿碱种类不同,Ti质粒可分为4种类型:章鱼碱型(octopine)、胭脂碱型(nopaline)、农杆碱型(agropine)、农杆菌素碱型(agrocinopine)或称为琥珀碱型(succinamopine)。章鱼碱和胭脂碱是由氨基酸衍生的冠瘿碱,而农杆碱和农杆菌素碱是属于单糖衍生的冠瘿碱。各种不同类型的Ti质粒都具有控制肿瘤诱发的且物理位置彼此相邻的T-DNA区和毒性区(Vir),它们约占Ti质粒DNA总长度的1/3

产品组分:

组分编号 组分名称

货号(规格)

MF2303-1000UL MF2303-5000UL
MF2303-A LBA4404 Chemically Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2303-B pCAMBIA2301 Control Vector (10ng/μl) 10μl 10μl

 

转化方法(内容)

附表1 固体和液体LB培养基配方

组分Component

LB(液体)/

LB(固体)/

胰蛋白胨 Tryptone

10g

10g

酵母提取物 Yeast extract

5g

5g

氯化钠 NaCl

10g

10g

1N NaOH

调整pH7.0

调整pH7.0

琼脂 Agar

/

15g

附表2 固体和液体YEB培养基配方

组分Component

YEB(液体)/

YEB(固体)/

胰蛋白胨 Tryptone

5g

5g

酵母提取物 Yeast extract

1g

1g

牛肉浸膏 Beef Extract

5g

5g

蔗糖 Sucrose

5g

5g

七水硫酸镁 MgSO4·7H2O

0.49g

0.49g

1N NaOH

调整pH7.0

调整pH7.0

琼脂 Agar

/

15g

 LBA4404 Chemically 农杆菌化学感受态细胞 LBA4404 Chemically 农杆菌化学感受态细胞 ​

GV3101农杆菌化学感受态细胞

我司提供的GV3101农杆菌化学感受态细胞经特殊工艺制作,基因型C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gentR) Nopaline,经pCAMBIA2301质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA。

GV3101 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞

EHA101菌株;农杆菌感受态细胞;RifampicinRif 利福平Kanamycinkan)卡那霉素; EHA105LBA4404GV3101AGL1;植物转基因研究;

货号 产品名称 规格
MF2304-1000UL GV3101 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 10×100μl

MF2304-5000UL

GV3101 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 50×100μl

产品描述:

GV3101菌株的染色体背景为C58,核基因含利福平抗性基因rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pMP90pTiC58DT-DNA),此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pMP90pTiC58DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能虽被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。pMP90pTiC58DT-DNA)型Ti质粒携带筛选标签Gent,赋予GV3101菌株庆大霉素抗性,适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作。

我司提供的GV3101化学转化感受态细胞经特殊工艺制作,基因型C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gentR) Nopaline,经pCAMBIA2301质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA

产品组分:

组分编号 组分名称

货号(规格)

MF2304-1000UL MF2304-5000UL
MF2304-A GV3101 Chemically Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2304-B pCAMBIA2301 Control Vector (10ng/μl) 10μl 10μl

 

相关产品(常用的根癌农杆菌感受态细胞):

货号 名称 规格 农杆菌类型
MF2301-1000UL EHA101化学感受态细胞 10×100μl 根癌农杆菌
MF2301-5000UL EHA101化学感受态细胞 50×100μl 根癌农杆菌
MF2302-1000UL EHA105化学感受态细胞 10×100μl 根癌农杆菌
MF2302-5000UL EHA105化学感受态细胞 50×100μl 根癌农杆菌
MF2303-1000UL LBA4404化学感受态细胞 10×100μl 根癌农杆菌
MF2303-5000UL LBA4404化学感受态细胞 50×100μl 根癌农杆菌
MF2304-1000UL GV3101化学感受态细胞 10×100μl 根癌农杆菌
MF2304-5000UL GV3101化学感受态细胞 50×100μl 根癌农杆菌
MF2305-1000UL AGL1化学感受态细胞 10×100μl 根癌农杆菌
MF2305-5000UL AGL1化学感受态细胞 50×100μl 根癌农杆菌
MF2306-1000UL EHA101电转感受态细胞 10×100μl 根癌农杆菌
MF2306-5000UL EHA101电转感受态细胞 50×100μl 根癌农杆菌
MF2307-1000UL EHA105电转感受态细胞 10×100μl 根癌农杆菌
MF2307-5000UL EHA105电转感受态细胞 50×100μl 根癌农杆菌
MF2308-1000UL LBA4404电转感受态细胞 10×100μl 根癌农杆菌
MF2308-5000UL LBA4404电转感受态细胞 50×100μl 根癌农杆菌
MF2309-1000UL GV3101电转感受态细胞 10×100μl 根癌农杆菌
MF2309-5000UL GV3101电转感受态细胞 50×100μl 根癌农杆菌
MF2310-1000UL AGL1电转感受态细胞 10×100μl 根癌农杆菌
MF2310-5000UL AGL1电转感受态细胞 50×100μl 根癌农杆菌


附表
1 固体和液体LB培养基配方

组分Component

LB(液体)/

LB(固体)/

胰蛋白胨 Tryptone

10g

10g

酵母提取物 Yeast extract

5g

5g

氯化钠 NaCl

10g

10g

1N NaOH

调整pH7.0

调整pH7.0

琼脂 Agar

/

15g

附表2 固体和液体YEB培养基配方

组分Component

YEB(液体)/

YEB(固体)/

胰蛋白胨 Tryptone

5g

5g

酵母提取物 Yeast extract

1g

1g

牛肉浸膏 Beef Extract

5g

5g

蔗糖 Sucrose

5g

5g

七水硫酸镁 MgSO4·7H2O

0.49g

0.49g

1N NaOH

调整pH7.0

调整pH7.0

琼脂 Agar

/

15g

GV3101农杆菌化学感受态细胞 GV3101农杆菌化学感受态细胞

AGL1农杆菌化学感受态细胞

我司生物提供的AGL1农杆菌化学感受态细胞经特殊工艺制作,基因型C58 RecA (rifR/carbR) Ti pTiBo542DT-DNA Succinamopine,经pCAMBIA2301质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA。

AGL1 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞

AGL1菌株;农杆菌感受态细胞;RifampicinRif 利福平Kanamycinkan)卡那霉素; EHA105LBA4404GV3101EHA101;植物转基因研究;

货号 产品名称 规格
MF2305-1000UL AGL1 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 10×100μl

MF2305-5000UL

AGL1 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 50×100μl

产品描述:

AGL1菌株的染色体背景为C58RecA,核基因含利福平抗性基因rif和羧苄青霉素抗性基因carb,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒pTiBo542DT-DNA,此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pTiBo542DT-DNA质粒自身的T-DNA转移功能虽被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。AGL1菌株适用于拟南芥、水稻、杨树等植物的转基因操作。

我司提供的AGL1化学转化感受态细胞经特殊工艺制作,基因型C58 RecA (rifR/carbR) Ti pTiBo542DT-DNA Succinamopine,经pCAMBIA2301质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA

产品组分:

组分编号 组分名称

货号(规格)

MF2305-1000UL MF2305-5000UL
MF2305-A AGL1 Chemically Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2305-B pCAMBIA2301 Control Vector (10ng/μl) 10μl 10μl

 

使用方法内容

相关产品(常用的根癌农杆菌感受态细胞):

货号 名称 规格 农杆菌类型
MF2301-1000UL EHA101化学感受态细胞 10×100μl 根癌农杆菌
MF2301-5000UL EHA101化学感受态细胞 50×100μl 根癌农杆菌
MF2302-1000UL EHA105化学感受态细胞 10×100μl 根癌农杆菌
MF2302-5000UL EHA105化学感受态细胞 50×100μl 根癌农杆菌
MF2303-1000UL LBA4404化学感受态细胞 10×100μl 根癌农杆菌
MF2303-5000UL LBA4404化学感受态细胞 50×100μl 根癌农杆菌
MF2304-1000UL GV3101化学感受态细胞 10×100μl 根癌农杆菌
MF2304-5000UL GV3101化学感受态细胞 50×100μl 根癌农杆菌
MF2305-1000UL AGL1化学感受态细胞 10×100μl 根癌农杆菌
MF2305-5000UL AGL1化学感受态细胞 50×100μl 根癌农杆菌
MF2306-1000UL EHA101电转感受态细胞 10×100μl 根癌农杆菌
MF2306-5000UL EHA101电转感受态细胞 50×100μl 根癌农杆菌
MF2307-1000UL EHA105电转感受态细胞 10×100μl 根癌农杆菌
MF2307-5000UL EHA105电转感受态细胞 50×100μl 根癌农杆菌
MF2308-1000UL LBA4404电转感受态细胞 10×100μl 根癌农杆菌
MF2308-5000UL LBA4404电转感受态细胞 50×100μl 根癌农杆菌
MF2309-1000UL GV3101电转感受态细胞 10×100μl 根癌农杆菌
MF2309-5000UL GV3101电转感受态细胞 50×100μl 根癌农杆菌
MF2310-1000UL AGL1电转感受态细胞 10×100μl 根癌农杆菌
MF2310-5000UL AGL1电转感受态细胞 50×100μl 根癌农杆菌

基本概念:

1感受态细胞(competent cell):受体细胞经过一些特殊方法的处理后,细胞膜的通透性发生暂时性的改变,从而允许外源DNA分子进入。

2转化(transformation):将外源DNA引入受体细胞并使其获得新的遗传性状的一种手段,是微生物遗传、分子遗传和基因工程等研究领域的基本实验技术。

3目前常用的转化方法有电转化和化学转化法,前者需要专门的电转化仪,但转化效率高,特别适合大片段质粒的转化;后者不需要额外的设备,成本较低,非难转化的质粒或对转化效率要求不高的情况都适合此方法。

电转化: 使用电转化需给细胞强加一电流。这一电流能够在细胞膜产生瞬间的小孔,迫使带负电荷的DNA通过一种电泳样的效应进入细胞。电转一般在0℃进行以zui小化对细胞的热损伤。

化学转化:使用化学转化将细胞重悬在CaCl2低渗溶液(0℃)。在此情况下,Ca2+使得细胞膜产生小孔,促使DNA结合到细胞膜上并封闭掉DNA自身的负电荷。这使得DNA更容易穿透疏水性细胞膜。然后在给细胞加一个短时的42℃热激处理,产生一热流促使细胞吸收DNA复合物。

AGL1农杆菌化学感受态细胞 AGL1农杆菌化学感受态细胞

SURE化学感受态细胞,热激法

 SURE化学感受态细胞(热激法):SURE菌株是Agilent (Stratagene)公司开发,特别设计用于克隆在传统的大肠杆菌菌株中“无法克隆”的某些DNA段。本品是生物就SURE菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率>5×108 cfu/μg DNA。

SURE Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

SURESURE-2Stbl3StableDirect repeats 正向重复片段Retroviral sequences 逆转录病毒序列;Stratagene;
货号 产品名称 规格

MF2326-1000UL

SURE Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

10×100μl

MF2326-5000UL SURE Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl

产品组分:

组分编号 组分名称

货号(规格)

MF2316-1000UL MF2316-5000UL
MF2326-A SURE Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2326-B Control Vector puC19, 10 pg/µl 10μl 10μl

菌株描述

SURE菌株是Agilent (Stratagene)公司开发,特别设计用于克隆在传统的大肠杆菌菌株中无法克隆的某些DNA段。SURE菌株破坏了重组酶系统整条通路上的组分,这些组分能催化重组和删除体内的非标准二级和三级结构,包括十字形(由反向重复序列引起)和Z字形的DNA,经常出现在真核生物DNA中,能阻止真核DNA克隆进入传统大肠杆菌菌株中。SURE含限制缺陷(McrA, McrCB, McrF, Mrr, HsdR),使其无法对外源DNA进行标记和限制,从而提高外源甲基化DNA的克隆效率。也含内切酶缺陷(endA),和重组缺陷(recB recJ),提高了外源DNA的稳定性。存在于因子上的lacIq ZΔM15使菌株适用于蓝白斑。菌株本身含卡那霉素(KanR)和四环素(TetR)特性。

SURE菌株基因型:e14-(McrA-) Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)171 endA1 gyrA96 thi-1 supE44 relA1 lac recB recJ sbcC umuC::Tn5 (Kanr) uvrC [F´ proAB lacIqZΔM15 Tn10 (Tetr)].

产品描述

本品是SURE菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率>5×10cfu/μg DNA。且在-80能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

注意事项

1)   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。

2)   zui号在冰上融化感受态细胞。

3)   进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

4)   转化高浓度质粒或高效率连接产物可相应降低zui终用于涂板的菌量。

5)   菌株本身含卡那霉素和四环素特性,携带此两种抗性的质粒不适合克隆到SURE细胞。当携带抗霉素抗性基因(CamR)的质粒转化进入SURE细胞,使用添加100μg/ml氯霉素的LB固体平板来筛选克隆子。SURE细胞本身能耐受<40μg/ml氯霉素,但对100μg/ml 氯霉素很敏感。

6)   为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到zui低。

7)   采用常规操作流程转化SURE感受态细胞,转化效率可达5×10cfu/μg DNA。若是对转化效率要求更高,可使用标准操作流程。

8)   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10 pg/μl),供对照实验用。

9)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

常规操作流程所有操作均在无菌条件的标准下进行

标准操作流程所有操作均在无菌条件的标准下进行

1)   冰上提前预冷14ml BD Falcon聚丙烯圆底离心管, 42℃预热SOC培养基。

2)   -80℃取出感受态细胞迅速置于冰浴中5min使其完全融化。用手轻弹混匀吸取100 μl细胞到预冷的14ml离心管内。

3)   1.7μl β-ME1.42M)到细胞内。β-ME能提高转化效率

4)   轻弹管子。置于冰上孵育10min,每2min轻弹混匀细胞一次。

5)   往细胞内加入0.1-50ng目的DNA,轻弹混匀细胞,冰上静置孵育30min

6)   42℃热激45s,热激过程的持续性非常重要。冰上静置2min,此过程不要摇动离心管。

1)   向每个离心管中加入900 μl预热的无菌SOC培养基(不含抗生素),混匀后置于37 摇床,225-250 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

2)   吸取≤200 µl 转化菌液,加到含相应抗生素LB固体琼脂培养基上(若需要颜色反应,平板含IPTG+ X-gal),用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37)直至液体被吸收,倒置培养,37过夜培养。注意:若是进行蓝白斑筛选,37℃至少培养17h,使得颜色能生成。另外将平板置于4℃孵育2h,能加强颜色反应。

附表1 固体和液体LB培养基配方

附表2 固体和液体2-YT培养基配方

SURE化学感受态细胞(热激法) SURE化学感受态细胞(热激法)

Stbl2大肠杆菌化学感受态细胞,热激法,Stbl2菌株来源于大肠杆菌JM109菌株

Stbl2大肠杆菌化学感受态细胞(热激法):Stbl2菌株来源于大肠杆菌JM109菌株,特别适用于克隆不稳定插入片段(比如正向重复序列,逆转录病毒序列)。Stbl2菌株基因型:F– mcrA Δ(mcrBC-hsdRMS-mrr) recA1 endA1 lon gyrA96 thi supE44 relA1 λ– Δ(lac-proAB)

Stbl2 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

Stbl3Stbl2HB101StableDirect repeats 正向重复片段Retroviral sequences 逆转录病毒序列;

货号 产品名称 规格

MF2316-1000UL

Stbl2 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

10×100μl

MF2316-5000UL Stbl2 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl

产品组分:

组分编号 组分名称

货号(规格)

MF2316-1000UL MF2316-5000UL
MF2316-A Stbl2 Competent Cell 10×100μl MF2316-A
MF2316-B Control Plasmid puC19, 10 pg/µl 10μl MF2316-B

菌株描述

Stbl2菌株来源于大肠杆菌JM109菌株,特别适用于克隆不稳定插入片段(比如正向重复序列,逆转录病毒序列)。Stbl2中的mcr 突变和mcrBC-hsdRMS-mrr序列的删除允许甲基化基因组序列的克隆。也可用于慢病毒载体的克隆。由于不含lacZ∆M15,无法提供来自pUC或类似载体上β-半乳糖苷酶基因的α-互补序列,因此不能进行蓝白斑筛选。除了recA1之外,Stbl2包含一系列*的基因标志,使其能够稳定克隆正向重复和逆转录病毒序列和串联排列基因。另含有endA1突变,明显增加质粒产量和质量。

Stbl2菌株基因型:F– mcrA Δ(mcrBC-hsdRMS-mrr) recA1 endA1 lon gyrA96 thi supE44 relA1 λ– Δ(lac-proAB)

产品描述

本品是Stbl2菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率>10cfu/μg DNA且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

注意事项

1)   对不稳定DNA克隆或逆转录病毒/慢病毒载体克隆,涂板后应在30℃培养,以减少错误重组的发生概率。

2)   转化时SOCLB培养基均可用,前者能提高转化效率约20%

3)   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。

4)   醉好在冰上融化感受态细胞。

5)   进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

6)   为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到zui低。

7)   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10 pg/μl),供对照实验用。

8)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

Stbl2大肠杆菌化学感受态细胞(热激法)

Stbl2大肠杆菌化学感受态细胞(热激法)

Stbl3化学感受态细胞(不稳定DNA转化)

Stbl3化学感受态细胞(不稳定DNA转化):Stbl3菌株来源于大肠杆菌HB101菌株,特别适用于克隆不稳定插入片段比如含有直接重复序列的慢病毒DNA。本品是Stbl3菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率>108 cfu/μg DNA。

Stbl3 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

Stbl3Stbl2HB101StableDirect repeats 直接重复片段Lentiviral expression vectors 慢病毒表达载体;In-fusion 一步法克隆检测试剂盒;

 

货号 产品名称 规格

MF2317-1000UL

Stbl3 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

10×100μl

MF2317-5000UL Stbl3 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl

产品组分:

组分编号 组分名称

货号(规格)

MF2317-1000UL MF2317-5000UL
MF2317-A Stbl3 Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2317-B Control Plasmid puC19, 10 pg/µl 10μl 10μl

菌株描述

Stbl3菌株来源于大肠杆菌HB101菌株,特别适用于克隆不稳定插入片段比如含有直接重复序列的慢病毒DNA。与*0菌株不同,Stbl3菌株减少了存在于慢病毒表达载体和一些其他腺病毒载体中长末端重复序列(LTRs)的同源重组频率,有效降低错误重组。Stbl3有更高的基因组克隆容量。此菌株含链霉素抗性。

Stbl3菌株基因型:F-mcrB mrrhsdS20(rB-, mB-) recA13 supE44 ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20(StrR) xyl-5 λ-leumtl-1

产品描述

本品是Stbl3菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率>10cfu/μg DNA且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

注意事项

1)   对不稳定DNA克隆或逆转录病毒/慢病毒载体克隆,涂板后应在30℃培养,以减少错误重组的发生概率。

2)   制备高纯度病毒质粒,需使用新鲜转化的平板接菌,新鲜菌液提取质粒,菌液不可低温保存后使用。

3)   对不稳定的克隆或病毒质粒优先以质粒状态保存,尽量避免以转化在大肠杆菌细胞的方式保存质粒。

4)   转化时SOCLB培养基均可用,前者能提高转化效率约20%

5)   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。

6)   醉好在冰上融化感受态细胞。

7)   进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

8)   为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到zui低。

9)   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10 pg/μl),供对照实验用。

10)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

Stbl3感受态细胞常见问题详细问题

1.      使用Stbl3感受态细胞时,如何提高病毒质粒的产量?

2.      是否能用*0DH5α代替StableStbl3扩繁病毒质粒?

3.        使用Stbl3*0感受态细胞构建或扩增病毒质粒时,平板上长出的克隆有的偏大,有的偏小,如何选择哪种克隆用于后续实验?

4.      Stbl3的基因型为F-mcrB mrrhsdS20(rB-, mB-) recA13 supE44 ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20 (StrR) xyl-5 λ-leu mtl-1,如何理解各个基因?

5.      转化过程中感受态细胞的复苏必须使用SOC培养基?

 Stbl3化学感受态细胞(不稳定DNA转化)

Stbl3化学感受态细胞(不稳定DNA转化)

Stable化学感受态细胞,热激法,Stable菌株是NEB品牌

Stable化学感受态细胞(热激法):Stable菌株是NEB公司开发的高转化效率的大肠杆菌菌株,特别适合分离含重复元件和不稳定插入序列的质粒克隆,也适合分离和扩繁逆转录病毒/慢病毒载体克隆。

Stable Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

产品标签:

Stbl3Stbl2HB101StableDirect repeats 直接重复片段Lentiviral expression vectors 慢病毒表达载体;Gibson Assembly 一步法克隆检测试剂盒;

货号 产品名称 规格

MF2328-1000UL

Stable Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

10×100μl

MF2328-5000UL Stable Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl

产品组分:

组分编号 组分名称

货号(规格)

MF2328-1000UL MF2328-5000UL
MF2328-A Stable Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2328-B Control Vector puC19, 10 pg/µl 10μl 10μl

菌株描述

Stable菌株是NEB公司开发的高转化效率的大肠杆菌菌株,特别适合分离含重复元件和不稳定插入序列的质粒克隆,也适合分离和扩繁逆转录病毒/慢病毒载体克隆。

与商业化的同源重组反应体系比如NEBuilder HiFi DNA AssemblyGibson Assembly反应体系和酶切连接体系都兼容。Stable菌株基因型与Stbl2Stbl3没有关联性,但具有更优异的性能(见图1)。基因组含有重组酶recA1 relA1突变,能有效抑制长末端重复序列的重组,降低了错误重组的频率。还含有核酸酶内切酶endA1突变,避免了质粒提取过程中核酸酶的污染,显著提高制备质粒的产量和质量。基因组含有lacZΔM15,适用于蓝白斑筛选。菌株本身含链霉素和四环素抗性,在成功转化后赋予其额外的筛选标志。

Stable菌株基因型:F’ proA+B+ lacIq ∆(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR) ∆(ara-leu) 7697 araD139 fhuA ∆lacX74 galK16 galE15 e14-  Φ80dlacZ∆M15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL (StrR) rph spoT1 ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC

菌株亮点

◇   Stable菌株具有很高的转化效率,经pUC19检测转化效率>5×10cfu/μg DNA

◇   Stable菌株是基因克隆进入腺病毒/慢病毒载体的推荐宿主菌;

◇   Stable菌株是克隆正向重复序列和反向重复序列的推荐宿主菌;

◇   Stable菌株含recA1突变,能减少克隆DNA的重组发生,从而降低错误重组频率;

◇   Stable菌株含mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC),能有效转化真核来源的甲基化DNAPCRcDNA和许多其他来源的非甲基化DNA;

◇   Stable菌株含endA1(非特异核酸内切酶I)突变,确保得到zui高质量和产量的质粒;

◇   Stable菌株含fhuA突变,具有对噬菌体T1的抗性;

◇   Stable菌株含lacZΔM15,适用于具α-互补载体的蓝白斑筛选;

产品描述

本品是Stable菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率>5×10cfu/μg DNA且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

StableStbl3克隆性能(错误重组率)的比较

Stable化学感受态细胞(热激法)

1. StableStbl3克隆不稳定DNA序列的性能比较。pUC-5xREP5 x 32bp 重复序列,其在普通大肠杆菌中很不稳定。酶切后线性化的pUC19片段2.2ng+1ng 5xREP DNA段配制成重组反应体系,重组反应完成后分别转化Stable感受态细胞(A)或Stbl3感受态细胞(B),复苏60min,涂布在含50μg/ml羧苄青霉素的LB平板,30℃培养20h。之后做菌落PCR,检测5xREP DNA插入的稳定性(含有正确插入片段的克隆,菌落PCR片段为623bp)。

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法所有操作均在无菌条件的标准下进行

附表1 固体和液体LB培养基配方

附表2 固体和液体SOC培养基配方

附录1. Stable感受态细胞常见问题

1.      Stable菌株的基因型和各基因赋予菌株的特征?

Stable基因型:F’ proA+B+ lacIq ∆(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR) ∆(ara-leu) 7697 araD139 fhuA ∆lacX74 galK16 galE15 e14-  Φ80dlacZ∆M15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL (StrR) rph spoT1 ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC

◇   蓝白斑筛选(Φ80 Δ(lacZ)M15):使得β-gal omega段。lacX74去除染色体上的β-gal基因。pUC19和相似基因编码β半乳糖苷酶(lacZ)的α肽。α肽与β半乳糖苷酶的omega段(由F’携带,α互补)结合。当β半乳糖苷酶按照这种方式重新组合后能正常表达并切割X-gal生成蓝斑。当克隆DNA进入质粒破坏α肽基因,使得菌落为白斑。

◇   重组缺陷(recA1):大肠杆菌(E. coli)本身具修复系统能重组同源序列。基因组克隆通常有复制区,recA介导的重新排列不确定,特别当同源序列长于50bprecA功能缺失的菌株比recA+菌株通常更缓慢生长。

◇   内切酶I缺陷(endA1):野生型大肠杆菌的周质空间含非特异性内切酶。从这些菌株中制备质粒特别要注意质粒被降解。endA突变去除这个基因,显著改善了质粒制备物的质粒。

◇   限制缺陷(Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)):野生型大肠杆菌K12菌株含限制性内切酶,能切割含位点(AAC(N6)GTGCGCAC(N6)GTTDNA。虽然大肠杆菌DNA自身受保护,不被同源甲基转移酶所降解,但外源DNA会在这些位点被切割。限制缺陷删减了甲基转移酶和内切酶的基因。

◇   甲基限制缺陷(mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)):大肠杆菌具有一套酶系统,mcrAmcrBmrr能够切割在高等真核生物和某些植物、细菌菌株发现的甲基化DNA。来自PCR扩增片段,cDNA或原先在大肠杆菌内扩繁的DNA不会被甲基化,也不会被切割。

◇   T1噬菌体抗性(fhuA):T1,一种烈性噬菌体需要大肠杆菌羟肟酸铁吸收受体用来感染。这个基因的删减赋予对这个噬菌体的抗性,且不会显著影响转化或细胞的生长特征。

2.      Stable感受态细胞能替换Stbl2Stbl3?

答复:是的

3.      Stable感受态细胞适合大质粒转化?

答复:是的

Stable化学感受态细胞(热激法) Stable化学感受态细胞(热激法) ​

DH5α化学感受态细胞

DH5α化学感受态细胞:是大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

DH5α Chemically Competent Cell

大肠杆菌化学感受态细胞

货号 产品名称 规格   
MF2311-2000UL     DH5α Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞    20×100μl          
MF2311-10000UL DH5α Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 100×100μl  

 

产品组分:

组分编号          组分名称 货号(规格)
MF2311-2000UL     MF2311-10000UL   
MF2311-A DH5α Competent Cell 20×100μl 100×100μl
MF2311-B Control Plasmid puC19, 0.1ng/μl         10μl 10μl

菌株描述

DH5α是实验室常用的一种质粒克隆用菌株,其φ80lacZ△M15基因的产物可与载体编码的 β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补,可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。特别适用于高效的质粒DNA克隆并能保证高拷贝质粒的稳定复制。

DH5α菌株基因型:F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi-1 gyrA96 relA1 phoA

产品描述

本品是大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

注意事项

1)   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。

2)   号在冰上融化感受态细胞。

3)   进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

4)   为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到低。

5)   产品包装内含质粒pUC19 DNA(0.1ng/μl),供对照实验用。

6)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法所有操作均在无菌条件的标准下进行

1)   取感受态细胞置于冰浴中,如需分装可将刚刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管内,置于冰浴中。注意:一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl,可以根据实际情况分装使用。需注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。

注意:

 

a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,可取200-300 μl转化产物涂布平板。若预计的克隆较少,可通过离心(4,000 rpm,2min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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货号 名称 规格
MF2311-2000UL           DH5α Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 20×100μl          
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MF2335-1000UL BL21 Star (DE3) pLysS Competent Cell大肠杆菌感受态细胞 10×100μl
MS0021-10G Chloramphenicol, USP Grade氯霉素 10g
MS0018-10G Ampicillin, Sodium Salt氨苄青霉素钠 10g
MS0017-5G Carbenicillin, Disodium Salt羧苄青霉素二钠盐 5g
MS0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
MS0014-1G Rifampicin, USP Grade利福平 1g

DH5α化学感受态细胞

DH5α化学感受态细胞

NMY51酵母感受态细胞,双膜系统,双膜系统利用NMY51酵母菌

NMY51酵母感受态细胞:双膜系统利用NMY51酵母菌,能直接转化质粒进行蛋白突变验证或筛库实验。转化标志为TRP1,leu2-3。报告基因为HIS3,ADE2和LacZ。NMY51的选择性生长筛选通过营养缺陷报告基因(HIS3,ADE2)进行,之后通过LacZ报告基因进行β-半乳糖分析的定量或半定量筛选,三个独立的报告基因由不同的启动子调控,有助于降低假阳性几率。
NMY51 Chemically Competent Cell

酵母菌化学感受态细胞

Dualmembrane system 双膜系统Dualsystems BiotechY1HGoldpBT3-STEpPR3-STENMY51X-α-GalAureobasidin A AbA);金担子素;

货号 产品名称 规格
MF2360-1000UL NMY51 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2360-5000UL NMY51 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 50×100μl

产品组分:

组分编号 组分名称 保存

货号(规格)

MF2360-1000UL MF2360-5000UL
MF2360-A NMY51 Chemically Competent Cell -80℃ 10×100μl 50×100μl
MF2360-B pGADT7 Control Vector (10ng/μl) -80℃ 10μl   10μl  
MF2360-C Carrier DNA (10μg/μl) -20℃ 100μl  500μl 
MF2360-D PEG/LiAC Solution +4℃ 5ml 25ml


产品描述

双膜系统(Dualmembrane system)是由Dualsystems Biotech公司开发的专门筛选跨膜蛋白间相互作用的筛选技术,该技术利用分离的泛素系统直接检测天然状态下膜蛋白间的相互作用,是目前为止为一用来检测膜蛋白间相互作用的酵母双杂交系统。

双膜系统利用NMY51酵母菌,能直接转化质粒进行蛋白突变验证或筛库实验。转化标志为TRP1,leu2-3。报告基因为HIS3,ADE2和LacZ。NMY51的选择性生长筛选通过营养缺陷报告基因(HIS3,ADE2)进行,之后通过LacZ报告基因进行β-半乳糖分析的定量或半定量筛选,三个独立的报告基因由不同的启动子调控,有助于降低假阳性几率。

双膜系统的工作原理在于:泛素分子量很小,由76个氨基酸残基组成。泛素作为降解信号分子,能够连接另一个蛋白的N端,之后被泛素专一性蛋白酶(ubps)识别,导致与泛素相连蛋白被酶降解。泛素可人为分成两个部分:N端(Nub)和C端(Cub)。首先,将泛素Nub的三位异亮氨酸突变成甘氨酸(Nubi突变为NuBG),通过这种方式Cub的亲和力明显降低,避免Cub和Nub自我结合或靠近的可能性。其次,Cub与合成的LEXA-VP16转录激活因子融合成融合蛋白Cub-lexa-vp16。正常情况下,NuBG不与Cub结合,ubps也不能识别分离的泛素,转录激活因子也不会被切下来。后,将待测蛋白分别与NuBG和Cub融合,形成bait融合蛋白(bait-cub-lexa-vp16)和prey融合蛋白(prey-NuBG)。如果bait和prey发生相互作用,促使NuBG和Cub的相互接近,从而被ubps识别,导致LEXA-VP16的解离,进入核内,进而激活报告基因的转录。该系统能使用四种Bait质粒:pBT3-N,pBT3-SUC,pBT3-STE,pBT3-C,筛选标志是Leu。三种prey质粒:pPR3-C ,pPR3-SUC,pPR3-STE,筛选标志是Trp。

本品为经特殊工艺制备的NMY51酵母菌化学感受态细胞,用pGADT7质粒检测转化效率>104cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存三个月。

基因型

MATa, his3Δ200, trp1-901, leu2-3, 112, ade2, LYS2::(lexAop)4-HIS3, ura3::(lexAop)8-lacZ, ade2::(lexAop) 8-ADE2, GAL4

使用方法

 

1. Carrier DNA于使用前通过加热处理使其变性为单链状态,方法如下:95-100℃ 水浴或金属浴3min,快速插入冰中,静置3min。重复一次。

2. 取100 µl冰上融化的NMY51化学感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒2-5 µg,单链Carrier DNA 10 µl,PEG/LiAc 500µl,用枪吹打几次充分混匀,30℃水浴30 min(在15min时翻转6-8次混匀)。

3. 之后将管子放42℃水浴15 min(在7.5min时翻转6-8次混匀)。

4. 5000 rpm离心40s弃上清,用400 µl ddH2O重悬沉淀,离心30s弃上清。

5. 用50 µl ddH2O重悬,涂板,放入29℃培养48-96 h。

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NMY51酵母感受态细胞

NMY51酵母感受态细胞

Y190酵母化学感受态细胞

Y190酵母化学感受态细胞:是GAL4系统酵母双杂交用实验菌株,MATa型,能直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过接合(mating)操作进行蛋白相互作用验证或筛库实验。转化标志为trp1,leu2,cyh2。报告基因为lacZ,HIS3,MEL1。

Y190 Chemically Competent Cell

酵母菌化学感受态细胞

产品关键词:

Y190-GAL4酵母单杂交系统Y1HGoldpGBKT7pGADT7Ar QualX-α-GalAureobasidin A AbA);金担子素;

产品订购:

货号 产品名称 规格 价格(元)
MF2364-1000UL Y190 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 10×100μl 290
MF2364-5000UL Y190 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 50×100μl 1320


产品组分:

组分编号 组分名称 保存

货号(规格)

MF2364-1000UL MF2364-5000UL
MF2364-A Y190 Chemically Competent Cell -80 10×100μl 50×100μl
MF2364-B pGADT7 Control Vector (10ng/μl) -80 10μl   10μl  
MF2364-C Carrier DNA (10μg/μl) -20 100μl  500μl 
MF2364-D PEG/LiAC Solution +4 5ml 25ml


产品描述

Y190GAL4系统酵母双杂交用实验菌株,MATa型,能直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过接合(mating)操作进行蛋白相互作用验证或筛库实验。转化标志为trp1leu2cyh2。报告基因为lacZHIS3MEL1Y190-GAL4酵母双杂交系统需要两种质粒配套使用,pGB&pACT2pGBKT7& pGADT7pGB由或pGBKT7改造而来,筛选标志为Trp,用于表达DNA-BD与诱饵蛋白(bait)的融合蛋白;pACT2pGADT7的结构和功能类似,筛选标志为Leu,用于表达AD与诱捕蛋白(prey)的融合蛋白。

本品为经特殊工艺制备的Y190酵母菌化学感受态细胞,用pGADT7质粒检测转化效率>104cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存三个月。

基因型

MATa, ura3-52, his3-200, ade2-101, lys2-801, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, cyhr2, LYS2 : : GAL1 UAS-HIS3TATAHIS3, MEL1 URA3 : : GAL1UAS-GAL1TATA-lacZ

注意事项

  1. 号在冰上融化感受态细胞。
  2. 转化高浓度质粒可相应减少用于涂板的菌量。同时转化2-3种质粒可适当增加质粒的用量。
  3. Y190对高温敏感,适生长温度为27-30℃,一旦高于31℃,生长速度和转化率都呈指数下降。
  4. 菌落变粉红色并不是污染,而是酵母细胞生长中的一种常见现象。当酵母细胞在平板上培养几天,将平板内的腺嘌呤消耗殆尽,那时酵母试图通过自身代谢途径合成腺嘌呤以供利用。然而,某些菌株ADE2基因被破坏,腺嘌呤合成受阻。且ADE45678基因均正常。由此,造成中间产物P-ribosylamino imidazoleAIR)在细胞的积累使得菌落变为粉红色。
  5. 酵母菌在缺陷培养基上生长速度比YPDA培养基慢,营养缺陷成分越多,生长越慢,以转化涂板为例:涂YPDA平板于29℃,48h培养可见直径1mm克隆;涂SD单缺平板于29℃,48-60h培养可见直径1mm克隆;涂SD双缺平板于29℃,60-80h培养可见直径1mm克隆;涂SD三缺或四缺平板于29℃,80-90h培养可见直径1mm克隆;
  6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

  1. Carrier DNA于使用前通过加热处理使其变性为单链状态,方法如下:95-100 水浴或金属浴3min,快速插入冰中,静置3min。重复一次。
  2. 100 µl冰上融化的Y190化学感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒0.5-3 µg,单链Carrier DNA 10 µlPEG/LiAc 500µl,用枪吹打几次充分混匀,30水浴30 min(在15min时翻转6-8次混匀)。
  3. 之后将管子放42水浴15 min(在7.5min时翻转6-8次混匀)。
  4. 5000 rpm离心40s弃上清,用400 µl ddH2O重悬沉淀,离心30s弃上清。
  5. 50 µl ddH2O重悬,涂板,放入29培养48-96 h

Y190酵母化学感受态细胞

Y190酵母化学感受态细胞

Y1HGold酵母化学感受态细胞

Y1HGold酵母化学感受态细胞是Clontech GAL4-AbA酵母单杂交系统用的菌株,MATα型,能直接转化质粒进行文库筛选。Y1HGold-GAL4酵母单杂交系统需要两种质粒配套使用,分别为pAbAi和pGADT7。

Y1HGold Chemically Competent Cell 

酵母菌化学感受态细胞

产品关键词:

GAL4-AbA酵母单杂交系统Y1HGoldpAbAipGADT7Ar QualX-α-Gal Aureobasidin A AbA);金担子素;

产品订购:

货号 产品名称 规格 价格(元)
MF2362-1000UL Y1HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 10×100μl 290
MF2362-5000UL Y1HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 50×100μl 1320


产品组分:

组分编号 组分名称 保存

货号(规格)

MF2362-1000UL MF2362-5000UL
MF2362-A Y1HGold Competent Cell -80 10×100μl 50×100μl
MF2362-B pGADT7 Control Vector (10ng/μl) -80 10μl   10μl  
MF2362-C Carrier DNA (5μg/μl) -20 100μl  500μl 
MF2362-D PEG/LiAC Solution +4 5ml 25ml


产品描述

酵母单杂交是在酵母双杂交的基础上发展起来,不同于双杂交用来研究蛋白蛋白间的相互作用,单杂交主要用于研究蛋白和DNA的相互作用。

Y1HGoldClontech GAL4-AbA酵母单杂交系统用的菌株,MATα型,能直接转化质粒进行文库筛选。

Y1HGold-GAL4酵母单杂交系统需要两种质粒配套使用,分别为pAbAipGADT7。前者筛选标志为Ura,用于表达pBait-AbAi构建子(通过将bait-DNA 单拷贝或串联重复序列克隆到pAbAi载体所得);后者筛选标志为Leu,用于表达GAL4 AD与诱捕蛋白(prey)的融合蛋白。Y1HGold-GAL4酵母单杂交系统的工作原理在于:基因组整合有pBait-AbAi的酵母报告菌株,当诱捕蛋白(prey)结合到诱饵序列(bait-DNA),GAL4 AD会激活AUR1-C报告基因的表达,这一表达使得细胞能够在含筛选抗生素金担子素(Aureobasidin AAbA)的培养基上生长。与传统的营养缺陷报告基因相比,AUR1-CAbAr)在很低浓度(100-200 ng/ml)下即可以有效杀死非抗性克隆,大大降低背景克隆生长。这一优势也可降低酵母单杂交假阳性发生的概率。

本品为经特殊工艺制备的Y1HGold酵母菌化学感受态细胞,用pGADT7质粒检测转化效率>104cfu/μg DNA。且在-80能稳定保存三个月。

基因型

MATα, ura3-52, his3-200, ade2-101, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, met-, MEL1

使用方法

  1. 100 µl冰上融化的Y1HGold化学感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒2-5 µgCarrier DNA 95-100 孵育5 min,快速冰浴。重复一次。)10 µlPEG/LiAc 500µl,用枪吹打几次充分混匀,30水浴30 min(在15min时翻转6-8次混匀)。
  2. 之后将管子放42水浴15 min(在7.5min时翻转6-8次混匀)。
  3. 5000 rpm离心40s弃上清,用400 µl ddH2O重悬沉淀,离心30s弃上清。
  4. 50 µl ddH2O重悬,涂板,放入恒温培养箱29培养48-96 h

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MS6303-350G YPDA Agar Medium YPDA琼脂培养基 350g
MS6304-250G YPDA Medium YPDA液体培养基 250g
MS6311-467G Minimal SD Agar Base SD琼脂基础培养基 467g
MS6312-267G Minimal SD Base SD基础培养基 267g
MS6317-10G DO Supplement -Leu 10g
MS6320-10G DO Supplement -His/-Leu 10g
MS6334-10G DO Supplement -Leu/-Met/-Trp 10g
MS6342-10G DO Supplement -His/-Leu/-Met/-Trp 10g
MS0002-1ML Aureobasidin A (AbA) 金担子素A1 mg/ml 1ml
MF2501-200T Yeast Transformation Kit 酵母转化试剂盒 200T


Y1HGold酵母化学感受态细胞

Y1HGold酵母化学感受态细胞

DH10B化学感受态细胞

DH10B化学感受态细胞:来源于MC1061菌株,mcrA基因标记的加入、以及mcrBC和mrr的敲除使其适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA。因此,原核和真核来源的基因组DNA都能有效克隆进入DH10B。质粒拯救在DH10B中进行更为有效。

DH10B Chemically Competent Cell

大肠杆菌化学感受态细胞

产品关键词:

DH10BMC1061;链霉素;XL10-GoldDH10Bac

产品订购:

货号 产品名称 规格 价格(元)
MF2314-1000UL DH10B Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 10×100μl 280
MF2314-5000UL DH10B Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl 1280


产品组分:

组分编号 组分名称

货号(规格)

MF2314-1000UL MF2314-5000UL
MF2314-A DH10B Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2314-B Control Plasmid puC19, 10 pg/µl 10μl 10μl


菌株描述

DH10B菌株来源于MC1061菌株,mcrA基因标记的加入、以及mcrBCmrr的敲除使其适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA。因此,原核和真核来源的基因组DNA都能有效克隆进入DH10B。质粒拯救在DH10B中进行更为有效。recA1endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。φ80lacZM15 marker的存在使DH10B可用于蓝白斑筛选,rpsL赋予其链霉素抗性。

DH10B菌株基因型:F mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara-leu)7697 galU galK λrpsL(StrR) nupG

产品描述

本品是DH10B菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率>10cfu/μg DNA。且在-80能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

注意事项

  1. 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。
  2. 号在冰上融化感受态细胞。
  3. 转化高浓度质粒或高效连接产物需相应减少终涂板的菌量。
  4. 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。
  5. 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到低。
  6. 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10 pg/μl),供对照实验用。
  7. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

  1. -80取出DH10B感受态细胞迅速置于冰浴中5min使其完全融化。

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货号 名称 规格
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MS0021-10G Chloramphenicol,  USP Grade 氯霉素 10g
MS0018-10G Ampicillin, Sodium Salt 氨苄青霉素钠 10g
MS0017-5G Carbenicillin, Disodium Salt 羧苄青霉素二钠盐 5g
MS0019-10G Kanamycin Sulfate 硫酸卡那霉素 10g
MS0014-1G Rifampicin, USP Grade 利福平 1g

 

DH10B化学感受态细胞

DH10B化学感受态细胞

F-DH5a化学感受态细胞,大肠杆菌化学感受态细胞

F-DH5a化学感受态细胞:是大肠杆菌DH5a菌株经特殊工艺制作所得的快速转化感受态细胞,无需42℃热激,37℃孵育步骤,只需冰浴,10min内能完成转化、涂板步骤。经pUC19质粒检测转化效率可达1~5×108 cfu/μg DNA.

F-DH5a Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

F-DH5a;F-*0;DH10B;JM109;EPI400;羧苄;卡那霉素;链霉素;

产品订购:

货号 产品名称 规格
MF2348-2000UL F-DH5a Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 20×100μl
MF2348-10000UL F-DH5a Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 100×100μl

产品组分:

组分编号 组分名称 货号(规格)
MF2348-2000UL MF2348-10000UL
MF2348-A F-DH5a Competent Cell 20×100μl 100×100μl
MF2348-B Control Vector puC19, 10pg/μl 10μl 10μl

菌株描述

DH5a菌株基因型:F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi-1 gyrA96 relA1 phoA

产品描述

本品是大肠杆菌DH5a菌株经特殊工艺制作所得的快速转化感受态细胞,无需42℃热激,37℃孵育步骤,只需冰浴,10min内能完成转化、涂板步骤。经pUC19质粒检测转化效率可达1~5×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

注意事项

5)   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。

6)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

一、  快速转化操作(10min)

1.1    提前15min将用到的筛选培养平板拿到37℃预热。

1.2    取F-DH5a感受态细胞从-80℃取出,迅速插入冰中,5min后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物),并用手弹打管底轻轻混匀,冰中静置5min。

1.3    用移液枪将感受态细胞-DNA混合物转移到37℃预热的LB筛选培养平板上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,表面无水渍。

1.4    将平板倒置于37℃过夜培养。如果进行蓝白斑筛选,至少培养15h。

【注意】:F-DH5a感受态细胞涂含氨苄或羧苄筛选培养平板时效率搞,若涂卡那霉素或其他抗生素平板,转化效率会下降(由于没有孵育步骤,卡那霉素等对菌体毒性较大)。若要提高卡那霉素或其他抗性质粒的转化效率,按照快速热激转化操作。

二、  快速热激转化操作(25min,能提高转化效率)

【注意】:当质粒>7kb,通过以下热激转化操作:取F-DH5a感受态细胞从-80℃取出,迅速插入冰中,5min后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物),并用手管底轻轻混匀,冰中静置20min。

42℃水浴热激45s,迅速放回冰上并静置2min。加入700μl 无菌的LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养30min。之后涂板。

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MS0018-10G Ampicillin, Sodium Salt氨苄青霉素钠 10g
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F-DH5a化学感受态细胞

F-DH5a化学感受态细胞

BL21化学感受态细胞,大肠杆菌化学感受态细胞

BL21化学感受态细胞 :是大肠杆菌BL21菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热激转化。经pUC19质粒检测转化效率可达107 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

BL21 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

BL21;pGEX;pMAL;BL21 (DE3);Rosetta (DE3);羧苄;卡那霉素;链霉素;

产品订购:

货号 产品名称 规格            
MF2481-1000UL   BL21 Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞   10×100μl
MF2481-5000UL BL21 Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl

 

产品组分:

组分编号 组分名称 货号(规格)
MF2481-1000UL    MF2481-5000UL   
MF2481-A    BL21 Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2481-B Control Plasmid puC19, 10pg/μl    10μl 10μl

 菌株描述

BL21菌株是线开发的原核表达用的大肠杆菌菌株,适用于转化和非T7载体的常规蛋白表达,主要用于非毒性蛋白的表达。该菌株不含T7 RNA聚合酶基因,因此,不可用于T7启动子驱动的蛋白表达(如pET系列表达载体);但含大肠杆菌RNA聚合酶基因,可以用于tac或trc等利用大肠杆菌RNA聚合酶的原核标系统的表达(如pGEX,pMAL表达载体)。该菌株缺乏lon蛋白酶和外膜蛋白酶ompT的基因,这两种酶的缺失降低了外源重组蛋白在菌体内的降解,从而增加了蛋白表达量。对噬菌体T1(fhuA2)具有抗性。

BL21菌株基因型:E. coli B F-dcm ompT hsdS(rB-mB-) gal [malB+]K-12(λS)

产品描述

本品是大肠杆菌BL21菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热激转化。经pUC19质粒检测转化效率可达107 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

注意事项

1)   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。

2)   在冰上融化感受态细胞。

3)   进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

4)   为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到低。

5)   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。

6)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

【注意】:

a)涂布用量可根据具体实验调整。若预计的克隆较多,可直接吸取转化产物涂布平板;若预计的克隆较少,则同上离心(5,000 rpm,1min)后留取适量培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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 BL21化学感受态细胞

BL21化学感受态细胞

Ar A4化学感受态细胞,pK7WGF2质粒,壮观霉素抗性

Ar A4化学感受态细胞经特殊工艺制作,基因型为Agrobacterium rhizogenes (kanR) Ar A4 Ri (agropine type),经pK7WGF2质粒(壮观霉素抗性)检测转化效率>104cfu/μg DNA。

Ar A4 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞

Ar A4;Ar Qual;MSU440;K599;Agrobacterium rhizogenes发根农杆菌;pCAMBIA2301;Streptomycin 链霉素;Rifampicin利福平;

货号 产品名称 规格
MF2457-1000UL    Ar A4 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞   10×100μl    
MF2457-5000UL Ar A4 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 50×100μl

产品组分:

组分编号      组分名称 货号(规格)
MF2457-1000UL     MF2457-5000UL    
MF2457-A Ar A4Chemically Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2457-B pK7WGF2 Control Vector (10ng/μl)     10μl 10μl

 产品描述

发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)是根瘤菌科农杆属的一种革兰氏阴性土壤细菌,能够侵染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。起关键作用的是其携带的Ri质粒,含有负责发根自主性生长和冠瘿碱合成的基因。结构上与Ti质粒类似,主要有致毒区(Vir),T-DNA区以及冠瘿碱合成功能区等。 

根据合成冠瘿碱的不同,Ri质粒分为4种类型:1)甘露碱型;2)黄瓜碱型;3)农杆碱型;4)米奇矛型。

发根农杆菌菌株Ar A4含天然农杆碱型Ri质粒,具有广泛的宿主范围(玉米,烟草,胡萝卜、甘草等),同时具有卡那霉素抗性。 

注意事项

7)   Ar A4具有卡那霉素抗性,不可用于具卡那霉素抗性质粒的转化。

8)   为了保证号的转化效率,发根农杆菌的培养务必使用TY培养基(配方见附表1)。

9)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1)        取-80℃保存的感受态细胞于室温或手心片刻待其部分融化,达到冰水混合状态时插入冰浴中使其完全融化。

2)        往100μl感受态细胞悬液中加入0.01~1μg质粒DNA(转化效率较高,*次使用前号做预实验确定所加质粒的量),用手快速、剧烈拨管底混匀或用枪吹吸混匀,依次放于冰中间静置5min,液氮5min,37℃水浴5min,冰浴5min。

3)        冰浴中拿出放室温,加入700μl无抗生素的TY液体培养基,于28℃振荡培养2h。

4)        6,000rpm离心1min,吸掉600ul上清,之后用枪轻轻吹打重悬菌体。之后加到含相应抗生素的TY平板上,用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min,待液体被吸收后,倒置平板,28℃培养2-3天。

Ar A4化学感受态细胞

Ar A4化学感受态细胞

MSU440农杆菌化学感受态细胞,发根农杆菌,Streptomycin 链霉素

提供的MSU440农杆菌化学感受态细胞经特殊工艺制作,基因型为Agrobacterium rhizogenes (strR)

MSU440 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞

MSU440;K599;Agrobacterium rhizogenes发根农杆菌;pCAMBIA2301;Streptomycin 链霉素;Rifampicin利福平;

货号 产品名称 规格     
MF2451-1000UL   MSU440 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞   10×100μl    
MF2451-5000UL MSU440 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 50×100μl

产品组分:

组分编号 组分名称 货号(规格)
MF2451-1000UL     MF2451-5000UL  
MF2451-A     MSU440Chemically Competent Cell 10×100μl MF2451-A
MF2451-B pCAMBIA2301 Control Vector (10ng/μl)   10μl MF2451-B

 产品描述

发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)是根瘤菌科农杆属的一种革兰氏阴性土壤细菌,能够侵染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。起关键作用的是其携带的Ri质粒,含有负责发根自主性生长和冠瘿碱合成的基因。结构上与Ti质粒类似,主要有致毒区(Vir),T-DNA区以及冠瘿碱合成功能区等。

根据合成冠瘿碱的不同,Ri质粒分为4种类型:1)甘露碱型;2)黄瓜碱型;3)农杆碱型;4)米奇矛型。

发根农杆菌菌株MSU440含天然农杆碱型Ri质粒,具有广泛的宿主范围(玉米,茶树、青蒿、烟草等),同时具有链霉素抗性。

注意事项

1)   感受态细胞应保存在-80℃,不可反复冻融和放置时间过长,以免降低感受态细胞的转化效率。

7)   MSU440具有链霉素抗性,不可用于具链霉素抗性质粒的转化。

8)   为了保证加的转化效率,发根农杆菌的培养务必使用TY培养基(配方见附表1)。

9)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

附表1 固体和液体TY培养基配方

附表2 常见发根农杆菌对抗生素敏感性总表

 

 

MSU440农杆菌化学感受态细胞

MSU440农杆菌化学感受态细胞

DB3.1大肠杆菌化学感受态细胞

DB3.1大肠杆菌化学感受态细胞:DB3.1菌株是HB101衍生菌株,含gyrA462基因,赋予其对ccdB毒性基因的抗性,适用于扩增含ccdB基因的质粒比如Gateway系统的载体,或构建含ccdB基因的新质粒。此菌株具有链霉素抗性。

DB3.1 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

DB3.1;Stbl2;HB101;Stable;ccdB;链霉素;

产品订购:

货号 产品名称 规格                 
MF2323-1000UL   DB3.1 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞   10×100μl  
MF2323-5000UL DB3.1 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl  

 

产品组分:

组分编号 组分名称 货号(规格)
MF2323-1000UL     MF2323-5000UL    
MF2323-A    DB3.1Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2323-B Control Plasmid puC19, 10 pg/µl      10μl 10μl

 菌株描述

DB3.1菌株是HB101衍生菌株,含gyrA462基因,赋予其对ccdB毒性基因的抗性,适用于扩增含ccdB基因的质粒比如Gateway系统的载体,或构建含ccdB基因的新质粒。此菌株具有链霉素抗性。

DB3.1菌株基因型:F-gyrA462endA1 Δ(sr1-recA)mcrBmrr hsdS20(rB-, mB-) supE44ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20(SmR) xyl-5 λ- leu mtl1

产品描述

本品是DB3.1菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率>108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

注意事项

1)   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。

2)   号在冰上融化感受态细胞。

3)   转化高浓度质粒或高效连接产物需相应减少终涂板的菌量。

4)   进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

5)   为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到低。

6)   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10 pg/μl),供对照实验用。

7)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

 

 

DB3.1大肠杆菌化学感受态细胞

DB3.1大肠杆菌化学感受态细胞

大肠杆菌化学感受态细胞表达分析,

大肠杆菌化学感受态细胞 表达分析 大肠杆菌OverExpress C43(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达5×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

OverExpress C43(DE3) Chemically Competent Cell

大肠杆菌化学感受态细胞

 

OverExpress C43(DE3)C43(DE3) pLysSBL21 (DE3)OverExpress C41(DE3)表达感受态细胞;毒性蛋白表达;pET表达载体;

货号 产品名称 规格  
MF2342-1000UL OverExpress C43(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2342-5000UL OverExpress C43(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl

 

OverExpress C41(DE3)、C41(DE3) pLysS、C43(DE3)和C43(DE3) pLysS都是大肠杆菌(E. Coli)菌株,有效表达不同物种有机生物体包括细菌、酵母菌、植物、病毒和哺乳动物来源的毒性蛋白。

OverExpress C43(DE3)菌株来源于OverExpress C41(DE3)菌株,通过筛选OverExpress C41(DE3)对另一个不同毒性蛋白的抗性菌株而获得。OverExpress C41(DE3)来源于BL21(DE3),此菌株含一个突变,能降低T7 RNA聚合酶(T7 RNAP)的水平,从而预防许多重组毒性蛋白过表达引起的细胞死亡。OverExpress C43(DE3)菌与OverExpress C41(DE3)相比,至少携带另一个不同突变,使其获得更广泛更高的毒性蛋白表达能力。

OverExpress C43(DE3)菌株含DE3区,表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因),适用于靶基因克隆进入T7启动子表达载体比如pET系列的蛋白生产。

OverExpress C43(DE3)菌株基因型:F– ompT hsdSB (rB mB) gal dcm (DE3)

产品描述

本品是大肠杆菌OverExpress C43(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达5×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

产品包装

组分编号 组分名

货号(规格)

MF2342-1000UL MF23425000UL
MF2342-A OverExpress C43(DE3) Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2342-B Control Plasmid puC19, 10pg/μl 10μl 10μl

 注意事项

1) 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。

2) hao在冰上融化感受态细胞,不可在冰上放置时间过长,长时间存放会降低转化效率

3) 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

4) 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到低。

5) 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用

6) 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

7) 诱导时,IPTG浓度范围可选:0.1~2mM

8) 为了得到足量的蛋白,需就加诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。

9) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1) 从-80冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物),用手轻弹管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰浴静置25min。

2) 42水浴热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

3) 向每个离心管中加700 μl无菌的2YT或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

4) 低速离心收菌(比如5000rpm,1min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到筛选抗生素2YT或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37)直至液体被吸收,倒置培养,37培养过夜

【注意】:

a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(5000 rpm,1min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37直至液体被吸收后再倒置培养。

c)涂布剩余的菌液可置于4保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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MS0018-10G Ampicillin, Sodium Salt 氨苄青霉素钠 10g
MS0017-5G Carbenicillin, Disodium Salt 羧苄青霉素二钠盐 5g
MS0019-10G Kanamycin Sulfate 硫酸卡那霉素 10g
MS0014-1G Rifampicin, USP Grade 利福平 1g
MF2002-1G IPTG 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 1g

附录I 蛋白诱导步骤(仅作参考)

1)从新鲜涂布平板上挑取一单克隆,转移到含相应抗生素的5ml LB液体培养基内。

2)37℃摇菌培养过液。为了小化诱导前目的蛋白的小化表达,添加葡萄糖(终浓度为0.2% w/v)到生长培养基内。

3)将步骤2)中过夜培养的菌液吸取0.5ml接种到含相应抗生素的50ml LB液体培养基内。

4)37℃摇菌培养直至OD600达到0.6~0.8。

5)加入IPTG使其终浓度为1mM。目的蛋白的加诱导时间可能在2~16h,依蛋白而异。

6)37℃培养3~4h。为了确定目的蛋白的加诱导时间,建议作一个时间周期优化实验,范围从2~16h。

7)将培养物冰浴10min。4℃,5,000 x g离心10min收集菌株。

8)吸掉上清,将沉淀保存在-20℃(也能保存在更低的温度)。

IPTG母液(1M)配制

称量2.38g IPTG(Mw: 238.30)溶于适量去离子水,充分溶解后,调整终体积到10ml,并过滤除菌,即得到1M ITPG母液。

 

大肠杆菌化学感受态细胞 表达分析

大肠杆菌化学感受态细胞 表达分析

ATCC15834 农杆菌电转感受态细胞 表达分析

ATCC15834 农杆菌电转感受态细胞 表达分析 ATCC15834电转感受态细胞经特殊工艺制作,特别适合大质粒的转化。基因型为Agrobacterium rhizogenes pRi15834 (agropine type),经pCAMBIA2301质粒(卡那霉素抗性)检测转化效率>105 cfu/μg DNA。

ATCC15834 Electrocompetent Cell

农杆菌电转感受态细胞

ATCC15834MSU440Ar 1193Ar A4K599C58C1Agrobacterium rhizogenes 发根农杆菌pCAMBIA2301;Streptomycin 链霉素;Rifampicin利福平;

货号 产品名称 规格  
MF2466-0500UL ATCC15834 Electrocompetent Cell 农杆菌电转感受态细胞 10×50μl
MF2466-2500UL ATCC15834 Electrocompetent Cell 农杆菌电转感受态细胞 50×50μl  

产品描述

发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)是根瘤菌科农杆属的一种革兰氏阴性土壤细菌,能够侵染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。起关键作用的是其携带的Ri质粒,含有负责发根自主性生长和冠瘿碱合成的基因。结构上与Ti质粒类似,主要有致毒区(Vir),T-DNA区以及冠瘿碱合成功能区等。

根据合成冠瘿碱的不同,Ri质粒分为4种类型:1)甘露碱型;2)黄瓜碱型;3)农杆碱型;4)米奇矛型。

发根农杆菌菌株ATCC15834来源于American type culture collection (ATCC),为发根农杆菌原始菌株。ATCC15834含pRi15834农杆碱型Ri质粒,具有广泛的宿主范围(禾本科,豆科,烟草等),特别适合对紫杉醇,青蒿等药用植物毛状根的诱导。

产品包装

组分编号 组分名称

货号(规格)

MF2466-0500UL MF24662500UL
MF2466-A ATCC15834 Electrocompetent Cell 10×50μl 550μl
MF2466-B pCAMBIA2301 Control Vector (10ng/μl) 10μl 10μl

 注意事项

  • 感受态细胞应保存在-80,不可反复冻融和放置时间过长,以免降低感受态细胞的转化效率。
  • 整个转化操作,严格根据相应温度及无菌条件要求进行。

3) 加入质粒的体积不应大于感受态体积的1/10。质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,会导致转化效率急剧下降。质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。

  • 为确保高转化效率,整个操作过程应尽量轻柔,并保持低温。

5) 电转感受态细胞中不可混入气泡,转化高浓度的质粒可相应减少终涂板用量。

6) 平板上克隆密度过大时,由于营养不足,克隆生长变慢,菌落变小。为获得大菌落,应减少质粒用量。

7) ATCC15834生长缓慢,转化质粒后的ATCC15834涂布在含抗生素的平板上应生长72h。

8) 为了保证加的转化效率,发根农杆菌的培养建议使用TY培养基(配方见附表1)。

9) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

    • 将0.1 cm电基杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净吸水纸上5min,待其沥干水分,正置5min,使乙醇充分挥发干净,立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖,冰中静置5min使其充分降温。
    • 取-80℃保存的农杆菌感受态细胞插入冰中5min,待其完全融化。
    • 往50μl感受态细胞悬液中加入0.01~1μg(体积不大于6μl)质粒DNA,用手拍打管底使其混匀,立即插入冰中。用枪轻轻吹打混匀感受态细胞-质粒之后快速转移到电基杯中,盖上杯盖,空管保留待用【注意:质粒DNAhao用试剂盒抽提,且用双蒸水溶解。由于感受态转化效率较高,*次使用hao做预试验确定加的质粒用量】。
    • 启动电转仪,设置参数:C=25 μF,PC=200 ohm,V=2400 V(此参数参考Bio-rad,具体使用请参考电转仪推荐步骤来操作),将电基杯从冰中取出,吸水纸吸干外表面水分,快速放入电转槽中,启动电基,电基完成快速插入冰中。
    • 加入1ml无抗生素的TY并转移到感受态空管中,于28℃振荡培养2~3h。

    6) 6,000rpm离心1min,留取 100ul左右上清,之后用枪轻轻吹打重悬菌体。之后加到含相应抗生素的TY平板上,用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min,待液体被吸收后,倒置平板,28℃培养72h。

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附表1 固体和液体TY培养基配方

组分Component TY(液体)/升 TY(固体)/升
胰蛋白胨 Tryptone 5g 5g
酵母提取物 Yeast extract 3g 3g
琼脂 Agar / 15g
  补水到1L,121℃,20min高压灭菌 补水到1L,121℃,20min高压灭菌
氯化钙 CaCl2 配制1M CaCl2水溶液,121℃,20min高压灭菌。之后按照10ml/L加入上方灭菌的液体营养液。 配制1M CaCl2水溶液,121℃,20min高压灭菌。之后按照10ml/L加入上方灭菌的液体营养液。

附表2 固体和液体YMB培养基配方

组分Component YMB(液体)/升 YMB(固体)/升
酵母提取物 Yeast extract 1g 1g
MgSO4·7H2O 0.2g 0.2g
K2HPO4 0.5g 0.5g
NaCl 0.1g 0.1g
甘露醇 10g 10g
琼脂 Agar / 15g
  补水到1L,完全溶解后,调pH至7.0,121℃,20min高压灭菌 补水到1L,完全溶解后,调pH至7.0,121℃,20min高压灭菌

附表3常见发根农杆菌对抗生素敏感性总表

农杆菌菌株 羧苄(carb) 链霉素(strep) 利福平(rif) 庆大霉素(gent) 卡那霉素(kan)
Ar A4 S S S S R
Ar Qual S R S R S
Ar 1193 R R R S S
K599 S R S S S
C58C1 S R R S S
MSU440 S R S S S
ATCC15834 S S S S S
备注】:S代表敏感,R代表抗性。

附表4 ATCC15834菌株质粒转化筛选抗生素使用浓度

抗生素 配方 筛选培养基 母液 工作液
硫酸卡那霉素 去离子水溶解,0.22μm滤膜除菌 YMB 或 TY 100mg/ml 100μg/ml
壮观霉素 去离子水溶解,0.22μm滤膜除菌 TY 50mg/ml 70μg/ml

ATCC15834 农杆菌电转感受态细胞 表达分析

ATCC15834 农杆菌电转感受态细胞 表达分析

大肠杆菌化学感受态细胞,BJ5183,BJ5183-AD-1,pAdeasy-1,pAdeasy-2

大肠杆菌化学感受态细胞 BJ5183菌株是一种具较高重组活力的大肠杆菌菌株,提供了转移载体和含腺病毒基因组载体之间发生重组事件必要的元件,是目前腺病毒系统常用的菌株之一。
BJ5183 Chemically Competent Cell

大肠杆菌化学感受态细胞

BJ5183BJ5183-AD-1pAdeasy-1pAdeasy-2腺病毒系统;卡那霉素;链霉素;

产品订购:

货号 产品名称 规格
MF2318-1000UL BJ5183 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2318-5000UL BJ5183 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl
组分编号 组分名称

货号(规格)

MF23181000UL MF23185000UL
MF2318-A BJ5183 Chemically Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2318-B Control Vector puC19, 10pg/μl 10μl 10μl


菌株描述

BJ5183菌株是一种具较高重组活力的大肠杆菌菌株,提供了转移载体和含腺病毒基因组载体之间发生重组事件必要的元件,是目前腺病毒系统常用的菌株之一。BJ5183菌株含recBC sbcBC双重突变,赋予其较强的重组能力,有利于目的基因与腺病毒质粒(pAdeasy-1或pAdeasy-2)的重组。另外,BJ5183菌株含endA突变(编码核酸内切酶),这一突变赋予recBC sbcBC突变菌株更高的双链断裂修复活性,也有利于重组DNA的稳定和高纯质粒的提取。StrR赋予BJ5183菌株链霉素抗性。

BJ5183菌株基因型:endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (StrR)

产品描述

本品是大肠杆菌BJ5183菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19载体检测转化效率可达>5×108 cfu/μg DNA且在-80能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件:

保存:-80℃保存,个月有效。

运输:干冰运输。

注意事项

1) 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存(避免温度波动),不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。

2) 在冰上缓慢融化感受态细胞。不可在冰上放置时间过长,否则会降低转化效率。

3) 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

4) 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

5) 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到低

6) 产品包装内含载体pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。

7) BJ5183菌株的质粒产量不高。腺病毒构建成功后,可选择在其它大肠杆菌菌株中扩繁和纯化质粒。

8) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1) 从-80冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的质粒含有目的基因并且是线性化和腺病毒质粒,用手轻弹管底轻轻混匀(避免用枪吹打),冰浴静置25min。

2) 42水浴热45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

3) 向每个离心管中加入700 μl无菌的2YT或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

低速离心收菌(比如5000rpm,1min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到含相应抗生素2YT或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37)直至液体被吸收,之后倒置放于37过夜培养

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MS0019-10G Kanamycin Sulfate 硫酸卡那霉素 10g
MS0014-1G Rifampicin, USP Grade 利福平 1g
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大肠杆菌化学感受态细胞

 大肠杆菌化学感受态细胞

DH5α大肠杆菌电转感受态细胞

DH5α大肠杆菌电转感受态细胞 是实验室较常用的一种质粒克隆用菌株,其φ80lacZ△M15基因的产物可与载体编码的 β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补,可用于蓝白斑筛选。

DH5α Electrocompetent cell

大肠杆菌电转感受态细胞

DH5α Electrocompetent Cell 电ji感受态细胞;*0DH10BXL1-Blue;1mm电转杯(电ji杯);Biorad 1652083;

货号 产品名称 规格
MF2381-0250UL DH5α Electrocompetent cell 大肠杆菌电转感受态细胞 5×50μl
MF2381-1000UL DH5α Electrocompetent cell 大肠杆菌电转感受态细胞 20×50μl

 菌株描述

DH5α是实验室常用的一种质粒克隆用菌株,其φ80lacZM15基因的产物可与载体编码的 β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补,可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。特别适用于高效的质粒DNA克隆并能保证高拷贝质粒的稳定复制。

DH5α菌株基因型: F φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk,mk+) supE44λ- thi-1 gyrA96 relA1 phoA

产品描述

本品是大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺制作所得的电ji感受态细胞,只能用于DNA的电ji转化,不能用于热激转化。经pUC19质粒检测转化效率可达1×1010 cfu/μg DNA且在-80能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

产品包装

组分编号 组分名称

货号(规格)

MF2381-0250UL MF2381-1000UL
MF2381-A DH5α Electrocompetent cell 5×50μl 20×50μl
MF2381-B Control Plasmid puC19, 10pg/μl 10μl 10μl

 保存与运输条件:

保存:-80保存,六个月有效。

运输:干冰运输。

注意事项

1) 感受态细胞保存在-80以下,不可反复冻融和放置时间过长,以免降低感受态细胞的转化效率。

  • 整个转化操作,严格根据相应温度及无菌条件要求进行。
  • 加入DNA的体积不应大于感受态体积的1/10。DNA不纯或存在盐、乙醇、蛋白及缓冲液等污染时,会导致转化效率急剧下降。
  • 为确保高转化效率,整个操作过程应尽量轻柔,并保持低温。

5) 电ji感受态细胞加入电ji杯应避免产生气泡,气泡会增加弧光放电风险。

6) 电ji杯里的离子可增加溶液的电导,增大在含有细胞和DNA的溶液中产生电流和弧光放电的风险。

7) 若转化大质粒或想获得较高转化效率,推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级

8) 对于连接产物转化:在转化前乙醇沉淀DNA后用适量TE缓冲液重悬产物,保证DNA浓度不超过100ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率,增加弧光放电的风险。

9) 混入质粒时应轻柔操作,吸取感受态细胞时不可用孔径过小的枪头(普通200μl枪头应剪去枪头尖0.6cm)。避免用力过猛,以免剪切力过大损伤细胞膜,降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少终用于涂板的菌量。

10) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1)将0.1 cm电ji杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净吸水纸上5min,待其沥干水分,正置5min,使乙醇充分挥发干净,立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖,冰中静置5min使其充分降温。

2)取-80保存的电ji感受态细胞插入冰中5min,待其完全融化。加入目的DNA(质粒或连接产物),用手拍打管底轻轻混匀,避免产生气泡,立即插入冰中。

【注意】:若需要测定转化效率,使用1μl 对照质粒 pUC19(10 pg/μl);对于连接产物,请用乙醇沉淀DNA后加入适量TE buffer(货号:MS3537-500ML)重悬,DNA浓度不要超过100ng/μl,体积不超过5μl/50μl感受态。

3)用200μl枪头将感受态-DNA混合物快速移到电ji杯中,避免产生气泡,盖上杯盖。

4)启动电转仪,设置参数:C=25 μF,PC=200 ohm,V=1800 V(此参数参考Bio-rad,具体使用请参考电转仪推荐步骤来操作),将电ji杯快速放入电转槽中,电ji完成快速插入冰中。

5)2min后从冰中取出电ji杯,放室温,加入700μl不含抗生素的无菌SOC培养基(室温),用1ml枪吹吸电ji杯底部数次混匀后,转移到50ml离心管(比如:BD Falcon 50ml锥形离心管),向离心管中补加SOC培养基至5ml。37,225 rpm复苏60min。

6) 5000rpm,1min离心收菌,重悬后取100-200μl涂布到含相应抗生素的SOC平板上(因菌量较大,若全部

涂板请选用直径15cm培养皿2-5个)。将平板倒置放于37培养箱过夜培养13-17h。

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MF2386-0250UL BJ5183-AD-1 Electrocompetent cell 大肠杆菌电转感受态细胞 5×50μl
MF2387-0250UL XL1-Blue Electrocompetent cell 大肠杆菌电转感受态细胞 5×50μl
MF2388-0250UL SURE Electrocompetent cell 大肠杆菌电转感受态细胞 5×50μl
MS0018-10G Ampicillin, Sodium Salt 氨苄青霉素钠 10g
MS0017-5G Carbenicillin, Disodium Salt 羧苄青霉素二钠盐 5g
MS0019-10G Kanamycin Sulfate 硫酸卡那霉素 10g
MS0014-1G Rifampicin, USP Grade 利福平 1g

 

DH5α大肠杆菌电转感受态细胞

DH5α大肠杆菌电转感受态细胞