植物原生质体转化试剂盒,植物细胞培养,原生质体Protoplast

植物原生质体转化试剂盒 植物细胞培养 ,原生质体(Protoplast)是指植物细胞去掉细胞壁后的裸露部分,体外培养条件下,具有以下功能:1)具全能型,可再生细胞壁,进行连续的细胞分裂且能再生成完整植株的能力;2)具摄取外源大分子、细胞器,以及细菌、病毒的能力,从而原生质体是进行遗传操作,基因转移的良好材料。

Plant Protoplast Transformation Kit (PEG-Mediated)

植物原生质体转化试剂盒(PEG法)

Plant Protoplast 植物原生质体;PEG-mediated protoplast transformation 聚乙二醇介导的原生质体转化;Yakult Honsha;Cellulase R-10 纤维素酶R-10;Macerozyme R-10 离析酶R-10;二乙酸荧光素 (FDA) 原生质体活力检测;

产品信息

产品名称 产品编号 规格
Plant Protoplast Transformation Kit (PEG-Mediated) MX7381-20T 20T

产品描述

原生质体(Protoplast)是指植物细胞去掉细胞壁后的裸露部分,体外培养条件下,具有以下功能:1)具全能型,可再生细胞壁,进行连续的细胞分裂且能再生成完整植株的能力;2)具摄取外源大分子、细胞器,以及细菌、病毒的能力,从而原生质体是进行遗传操作,基因转移的良好材料;3)通过同种和异种植物的原生质体融合,可产生异核体,实现体细胞杂交,从而培育出具有抗病原或更高产量的新品种。

原生质体(Protoplast)的制备主流的技术是酶解法,因其具有消化温柔,操作简单,且良好维持原生质体完整性的特点。工作原理是根据植物细胞壁的结构特征选择合适的酶进行处理,植物细胞壁主要由多糖(纤维素、半纤维素、果胶等)以及少量的蛋白和脂质构成。因此,通过使用纤维素酶、离析酶、半纤维素酶、果胶酶等复合酶来降解细胞壁,即可得到原生质体。

原生质体(Protoplast)的转化方法很多,主要有PEG介导转化法、电机穿孔转化法、脂质体介导转化法、农杆菌共培养转化法等。

本试剂盒是PEG介导的原生质体转化法,操作简单和便捷。试剂盒含有植物原生质体制备(不包含消化酶)和植物转化需要的所有试剂,按照单次10ml酶液体系来算,可做20次。

试剂盒组分

组分编号 组分名称 规格(20T 储存方法
MX7381-A Solution A-Enzyme solution buffer (2×) 溶液A 100ml -20℃保存
MX7381-B Solution BW5 solution 溶液B 200ml -20℃保存
MX7381-C Solution CMMG solution溶液C 25ml -20℃保存
MX7381-D Solution DTransformation solution溶液D 2.5ml -20℃保存
MX7381-E Solution EWI solution溶液E 25ml -20℃保存
MX7381-F Solution FReduced reagent溶液F 1ml RT保存
MX7381-G Solution GBSA solution (50mg/ml) 5ml -20℃保存

 

使用方法

  • 需要准备材料
    • 离析酶R-10(比如,Cat#:MX7351-1G)
    • 纤维素酶R-10(比如,Cat#:MX7352-1G)
    • 70μm细胞筛(比如,Cat#:352350, BD Bioscience)
    • 平头镊子
    • 一次性刀片
    • 1.5ml离心管
    • 50ml离心管
    • 恒温加热水浴锅
  • 原生质体分离

2.1 按照以下表格体系,配制即用型酶溶液:【注意:此溶液现配现用】

组分 10ml配制量 50ml配制量
溶液A (2×酶溶解液) 5ml 50ml
离析酶R-10 40mg 200mg
纤维素酶R-10 150mg 750mg
溶液F(还原剂) 5 μl 25μl
溶液G(50mg/ml BSA 0.2ml 1ml
无菌水 定容到10ml 定容到50ml

2.2 取生长状态良好的叶片切成0.5-1mm的小条,按照20个叶片加10ml即用型酶溶液的比例迅速将切好的叶片小条浸泡于即用型酶溶液内,室温避光酶解3h。

【注意】:酶解时间与叶片类型、叶片生长状态有关,请根据实际实验进行调整。酶溶液变为绿色表明原生质体已经分离,显微镜镜检确定是否分离。

2.3 酶解后加入10ml溶液B,轻柔混匀。

2.4 70μm细胞筛网过滤步骤2.3获得的溶液,去除未消化的叶片和杂质,收集滤液到50ml离心管内。

2.5 滤液于100×g,室温离心2min,吸掉上清。

2.6 加1ml溶液B重悬原生质体,冰浴30min,使得原生质体自然沉淀到底部。

2.7 小心吸掉上清,不要触动原生质体沉淀。将沉淀重悬于1ml溶液C,即得到原生质体溶液。

  • 原生质体转化
  • 原生质体培养和收集

植物原生质体转化试剂盒  植物细胞培养

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