标签：丙酮酸

产品名称：乳酸脱氢酶（LDH）测试盒 可见分光光度法
测试方法：可见分光光度法
规格：50管/24样

注意：实验之建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品说明：
LDH（EC 1.1.1.27）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途径的末端酶，催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应，伴随着NAD⁺/NADH之间互变。
LDH催化NAD⁺氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸进一步与2,4-作用生成腙，在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。

自备仪器和用品：
可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1. 细菌、细胞或组织样本的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2. 血清（浆）样本：直接检测。

二、操作步骤：
1、分光光度计预热30min 以上，调节波长至450nm，蒸馏水调零。
2、标准品的配制：取100μL 标准液，用蒸馏水倍比稀释至1、0.5、0.25、0.125、0μmol/mL，用2、1、0.5、0.25、0.125、0μmol/mL 标准液做标准曲线。
3、样本测定

充分混匀，室温静置3min，450nm 下测定吸光度，样本计算ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管需要设一个对照管。

三、LDH 活力单位计算：
1. 标准曲线的绘制：根据标准管测定值和浓度做标准曲线，y 为标准品浓度，μmol/mL；x 为对吸光度（减去浓度为0 的标准管的OD 值）。
2. 计算样本丙酮酸的含量，即将ΔA 带入回归方程中（x），计算y 值（μmol/mL）。
3. 血清（浆）LDH 活力的计算
单位的定义：每mL 血清（浆）每分钟催化产生1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（U/mL）=y×V 样÷V 样÷T×10³=66.7×y
4. 细胞、细菌和组织中LDH 活力的计算
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg 组织蛋白每分钟催化产生1 nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（U/mg prot）= y×V 样÷（Cpr×V 样）÷T×10³=66.7×y÷Cpr
（2）按样本质量计算：
单位的定义：每g 组织每分钟催化产生1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（U/g 质量）= y×V 样÷（W÷V 样总×V 样）÷T×10³=66.67×y÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1 万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDH（U/10⁴ cell）= y×V 样÷（500÷V 样总×V 样）÷T×10³=0.133×y
V 样：反应体系中加入的样本体积，50μL=0.05mL；V 样总：加入的提取液体积，1mL；T：反应时间，15min；Cpr：蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万；10³：单位换算系数，1μmol/mL=10³nmol/mL。

本产品仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。

原创作者：上海生物科技有限公司