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总一氧化氮检测试剂盒（显色法） 由于本试剂盒使用的是NADPH依赖的硝酸盐还原酶，高浓度的NADPH会干扰后续检测，因此，试剂盒使用乳酸脱氢酶（LDH）来清除NADPH，确保检测结果的准确性。

Total Nitric Oxide Colorimetric Assay Kit

总一氧化氮检测试剂盒（显色法）

 

产品名称	规格
Total Nitric Oxide Colorimetric Assay Kit 总一氧化氮检测试剂盒（显色法）	50T
	200T

产品描述

 

本总一氧化氮检测试剂盒（Total Nitric Oxide Colorimetric Assay Kit）利用两步法测定总一氧化氮水平，一步先用硝酸盐还原酶（Nitrate reductase）将硝酸盐还原为亚硝酸盐，第二步再用经典的Griess reagent，对亚硝酸盐进行定量测定，从而推算出总一氧化氮含量。

由于本试剂盒使用的是NADPH依赖的硝酸盐还原酶，高浓度的NADPH会干扰后续检测，因此，试剂盒使用乳酸脱氢酶（LDH）来清除NADPH，确保检测结果的准确性。

本试剂盒以亚硝酸钠为标准品，通过优化的检测体系，检测下限达2μM，且在2~80μM范围内具有良好的线性关系。本试剂盒不仅能检测细胞、组织或培养液中的一氧化氮含量，还能检测血清、血浆或尿液中的一氧化氮含量。

• 当检测细胞或组织一氧化氮含量，不建议使用RIPA裂解液，因其可能在后续实验中产生沉淀，影响测试。建议使用一氧化氮分析用裂解液（不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂）（货号：MP1509-100ML）。也可自行选择适当方式制备组织或细胞样品的裂解液，要考虑到自行选择的方式是否存在干扰试剂盒内酶反应的可能。
• 当检测细胞培养液内一氧化氮含量，不可使用RPMI1640等含较高浓度硝酸盐的培养液，否则会干扰检测。
• 所有检测反应需避光进行。
• 由于检测过程存在还原反应，凡是影响还原反应的试剂都需要避免，比如DTT或2-ME。
• 本试剂盒利用的是间接法测定总一氧化氮含量，如果只需粗略测定一氧化氮相对量，可选择我司提供的一氧化氮检测试剂盒（货号：MX4731-500T）。如果需要直接测定一氧化氮水平，比如测定细胞内实际的一氧化氮水平，可选择我司提供的DAF-FM DA一氧化氮荧光探针（货号：MX4702-100T）。
• 本试剂盒对人体有害，请注意适当防护，避免直接接触人体或吸入体内。
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【注意事项】

• 反应必须避光进行。当使用96孔板进行检测，可用铝箔纸包裹96孔板进行避光。
• 样品的用量上限为60μl。血清、血浆或组织匀浆液通常使用40μl足够。样品不足60μl，不同样品之间的体积需要保持一致，体积不足的部分用制备或稀释样品所用的溶液补足。
• 可同时设置加入200μl水或PBS的2~3个孔为阴性对照，这2~3个孔仅加入水或PBS，不在加入任何其他试剂。
• 加入Griess reagent I后需轻轻混匀。
• 每次混匀后，可以1000~3000g离心数秒，把液体沉淀至管底。同时需避免各检测孔中产生气泡，以免气泡干扰检测结果。

3.2 在540nm（或520~560nm）测定吸光度。需在30min内测完，以防褪色降低灵敏度。

3.3 以标准品浓度为横坐标，吸光度OD值为纵坐标绘制标准曲线，获得横纵坐标之间的函数关系式。之后将样品OD值代入公式来计总算一氧化氮浓度。

3.4 标准曲线示例见右图，仅供参考。实际测定时，由于反应条件、试剂盒批次差异等因素，会导致检测结果与示例数据存在一定差异。

常见问题

• 检测结果标准曲线良好，但样品的吸光度很低，和空白对照接近，什么原因？

回复： 标准曲线良好说明检测方法和检测试剂盒基本上没有问题，样品吸光度低说明样品中一氧化氮含量很低。可以采取的办法是：1）加大样品和标准品的使用量至60μl，其余试剂用量不变。2）把整个检测体系每种试剂的用量加大50%，这样可以使检测灵敏度增加约50%。3）如果上述方法还不能解决问题，可以考虑浓缩样品，即一方面在收集样品的时候尽量使一氧化氮的浓度保持得较高（例如裂解细胞时采用较小体积的裂解液），另一方面可以考虑用真空干燥或真空冷冻干燥的方法浓缩样品。

• 检测时发现每个样品的吸光度都非常高，什么情况？

回复：使用RPMI 1640培养液时会发生这种情况。因RPMI 1640培养液中含有高浓度的硝酸盐从而会使样品检测出来的吸光度都非常高。其他含有高浓度硝酸盐的试剂也会产生类似情况，影响氧化还原反应的试剂也可能产生类似干扰。使用过程中避免使用RPMI 1640等可能导致干扰检测的试剂即可。

 

一氧化氮检测试剂盒（显色法）是一种活性基，在许多关键生理功能中发挥重要作用。一氧化氮，一氧化氮合酶（NOS）催化精氨酸的氧化产物，参与宿主防御和发育、调节蛋白活化、以及与功能生物分子之间的直接共价相互作用。

Nitric Oxide (NO) 一氧化氮；NO含量检测；分光光度计检测；Griess reagent；Carboxy-PTIO 一氧化氮清除剂；DAF-FM DA；

产品信息

产品名称	产品编号	规格
Nitric Oxide Colorimetric Assay Kit 一氧化氮检测试剂盒（显色法）	MX4731-500T	500T

一氧化氮（Nitric Oxide, NO）是一种活性基，在许多关键生理功能中发挥重要作用。一氧化氮，一氧化氮合酶（NOS）催化精氨酸的氧化产物，参与宿主防御和发育、调节蛋白活化、以及与功能生物分子之间的直接共价相互作用。一氧化氮生成后迅速代谢生成亚硝酸盐（Nitrite）和硝酸盐（Nitrate），两种首要的、稳定的和非挥发性的裂解产物，通过对这两种产物的测定能间接反映样本内的一氧化氮水平。

本一氧化氮检测试剂盒（Nitric Oxide Colorimetric Assay Kit）利用经典的Griess reagent，对亚硝酸盐进行定量测定。本试剂盒以亚硝酸钠为标准品，通过优化的检测体系，检测下限达1μM，且在1~100μM范围内具有好的的线性关系。本试剂盒不仅能检测细胞、组织或培养液中的一氧化氮含量，还能检测血清、血浆或尿液中的一氧化氮含量。

组分编号	组分名称	规格	保存方式
MX4731-A	1M NaNO2	1ml	2-8℃避光保存
MX4731-B	Griess Reagent I	25mL	2-8℃避光保存
MX4731-C	Griess Reagent II	25mL	2-8℃避光保存

保存与运输方法

保存：2-8℃避光保存，至少4个月稳定。

运输：冰袋运输。

保存与运输方法

保存：-20℃干燥保存，至少1年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

• 本试剂盒内的组分若保存不当发生颜色变化或沉淀，说明溶液已经失效，请勿再用。
• 当检测细胞或组织一氧化氮含量，不建议使用RIPA裂解液，因其可能在后续实验中产生沉淀，影响测试。建议使用免疫印迹及免疫沉淀用裂解液（不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂）（货号：MP1508-100ML）。
• 本试剂盒仅测定的是亚硝酸盐含量，不能检测硝酸盐，反映的并非总一氧化氮含量，只能在很大程度上反映一氧化氮的相对量，适合不需要精确定量的实验。若需要测定总一氧化氮含量，请选择总一氧化氮检测试剂盒（显色法）（货号：MX4732-50T），此试剂盒利用硝酸盐还原酶将硝酸盐还原为亚硝酸盐，然后利用Griess reagent测定亚硝酸盐，进而反映总一氧化氮水平。
• 本试剂盒对人体有害，请注意适当防护，避免直接接触人体或吸入体内。
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤

【注意】本试剂盒可用于培养液中的一氧化氮测定，培养液内的酚红和10%血清对测定无明显干扰。

【注意】本试剂盒可用于血清中的一氧化氮测定。当只需粗略计算，可直接用水稀释标准品，从而计算出血样中一氧化氮含量。当需精确计算，如果待测的正常血清是常见血清，能从文献查阅到一氧化氮浓度，那么用此已经一氧化氮浓度的正常血清稀释标准品，这样能得到比较精确的一氧化氮浓度。或使用已知浓度的人或其他动物血清来稀释标准品也可达到目的。或参考文献进行血清中一氧化氮浓度的测定。

【注意】样品中存在的一些内在成分可能会干扰测定，导致OD值和灵敏度降低。干扰程度依次顺序：尿液>血清>血浆>培养基。

• 需要设备

96孔酶标仪或可见光分光光度计，加波长540nm，或在520~560nm下测定，灵敏度可能会降低。

• 准备步骤

2.1 实验前将试剂从冰箱取出回温至室温。

2.2 标准品准备：每次测量均新做标准曲线，用待测样品所用溶液来稀释标准品，使得浓度在1~100μM内。

比如：当样品为细胞培养液上清，细胞培养液为DMEM+10% FBS，则用DMEM+10% FBS稀释标准品。标准品的浓度通常可取0，1，2，5，10，20，40，60，80，100μM。

2.3 样品准备：a）当样品为培养液上清，可直接取样。如果存在沉淀物，则需离心后取上清；b）当样品为组织或细胞，可快速冻融裂解，然后离心沉淀取上清，体积不足50μl，可用双蒸水、超纯水或0.9% NaCl稀释（相应的标准品也需用双蒸水、超纯水或0.9% NaCl稀释）。细胞或组织也可用免疫印迹及免疫沉淀用裂解液（不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂）来裂解，同样的，标准品需用裂解液稀释。

三、测定步骤

3.1 取50μl标准品或样品，加入96孔板内，做好标记；

3.2 每孔加入提前回至室温的50μl Griess reagent I；

3.3 每孔加入提前回至室温的50μl Griess reagent II；

3.4 室温避光孵育5min；

3.5 在540nm（或520~560nm）测定吸光度。需在30min内测完，以防褪色降低灵敏度。

3.6 以标准品浓度为横坐标，吸光度OD值为纵坐标绘制标准曲线，获得横纵坐标之间的函数关系式。之后将样品OD值代入公式来计算一氧化氮浓度。

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货号	名称	规格
MP1508-100ML	免疫印迹及免疫沉淀用裂解液（不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂）	100ml
MX4731-500T	Nitric Oxide Colorimetric Assay Kit 一氧化氮检测试剂盒（显色法）	500T
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MX4713-10MG	S-Nitrosoglutathione (GSNO) 亚硝基谷胱甘肽	10mg
MX4714-100MG	2,3-Diaminonaphthalene (DAN), Suitable for fluorescence 2,3-二氨基萘	100mg
MX4715-100MG	1,2-Diaminoanthraquinone (DAA, DAQ) 1,2-二氨基蒽醌	100mg

 

一氧化氮检测试剂盒（显色法）

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