F-DH5a Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞
F-DH5a;F-*0;DH10B;JM109;EPI400;羧苄;卡那霉素;链霉素;
产品订购:
货号 | 产品名称 | 规格 | |
MF2348-2000UL | F-DH5a Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 | 20×100μl | |
MF2348-10000UL | F-DH5a Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 | 100×100μl |
产品组分:
组分编号 | 组分名称 | 货号(规格) | |
MF2348-2000UL | MF2348-10000UL | ||
MF2348-A | F-DH5a Competent Cell | 20×100μl | 100×100μl |
MF2348-B | Control Vector puC19, 10pg/μl | 10μl | 10μl |
菌株描述
DH5a菌株基因型:F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi-1 gyrA96 relA1 phoA
产品描述
本品是大肠杆菌DH5a菌株经特殊工艺制作所得的快速转化感受态细胞,无需42℃热激,37℃孵育步骤,只需冰浴,10min内能完成转化、涂板步骤。经pUC19质粒检测转化效率可达1~5×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。
注意事项
5) 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。
6) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】
一、 快速转化操作(10min)
1.1 提前15min将用到的筛选培养平板拿到37℃预热。
1.2 取F-DH5a感受态细胞从-80℃取出,迅速插入冰中,5min后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物),并用手弹打管底轻轻混匀,冰中静置5min。
1.3 用移液枪将感受态细胞-DNA混合物转移到37℃预热的LB筛选培养平板上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,表面无水渍。
1.4 将平板倒置于37℃过夜培养。如果进行蓝白斑筛选,至少培养15h。
【注意】:F-DH5a感受态细胞涂含氨苄或羧苄筛选培养平板时效率搞,若涂卡那霉素或其他抗生素平板,转化效率会下降(由于没有孵育步骤,卡那霉素等对菌体毒性较大)。若要提高卡那霉素或其他抗性质粒的转化效率,按照快速热激转化操作。
二、 快速热激转化操作(25min,能提高转化效率)
【注意】:当质粒>7kb,通过以下热激转化操作:取F-DH5a感受态细胞从-80℃取出,迅速插入冰中,5min后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物),并用手管底轻轻混匀,冰中静置20min。
42℃水浴热激45s,迅速放回冰上并静置2min。加入700μl 无菌的LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养30min。之后涂板。
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